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pp.26-30
전기영동법과 발색반응법 등의 장, 단점 분석을 통해 가장 저렴한 비용으로 신속, 정확하게 lipoxygenase isozymes를 검정하는 분석체계를 확립하여 무비린내 나물콩 품종육성에 활용 가능할 것으로 보인다.
1. SDS-PAGE 전기영동법은 Lx-0, L-1, L-2, 및 L-123의 검정에는 효과적이었으나, L-3, L-13, 및 L-23의 검정에서는 분리능에 있어서 정확도가 떨어져 검정효율은 92.2%를 나타내었다.
2. 발색반응법을 이용한 lipoxygenase isozymes의 검정방법은 간편하고 신속하였으며 검정효율은 95.7%였다.
3. L-1과 L-2가 존재하는 종실의 기질용액에서는 1분 이내에 methylene blue의 청색 반응용액을 탈색시켰으며 그 결과가 오랫동안 지속되었다.
4. L-3가 존재하는 종실의 용액에서는 20초 이내에β-carotene의 황색 반응용액을 탈색시켰으나 그 결과가 오래 지속되지 않아 신속한 결과분석이 요구되었다.
5. L-1, L-2 및 L-3을 동시에 검정하기 위한 전체 시료량은 콩 종자 1알의 약 10 mg 정도이면 충분하였으며, 검정하지 않은 나머지 부분은 파종에 이용될 수 있으므로 F2 종자에서 lipoxygenase isozymes 결핍계통을 조기에 선발 가능하였다.
6. 발색반응법과 SDS-PAGE 전기영동법을 적절히 겸용하여 수행하게 되면 시료 분석에 소요되는 시간은 1인 100점에 6.5시간, 재료비는 약 54,000원이 소요되어 이 시스템이 가장 효율적인 lipoxygenase 검정방법으로 판명되었다.
Normal soybean seed contains three lipoxygenase isozymes called L-1, L-2, and L-3, respectively, which are responsible for the generation of undesirable grassy-beany flavors. Simple and effective methods for the detection of lipoxygenase isozymes were developed in soybean seeds. Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) has been tried in separating these isozymes. It was done effectively on 7.5% separating gel and 4.5% stacking gel. However, no reliable method has been developed specifically for separating L-3, L-13 and L-23. Visual judging methods were based on the bleaching activities of lipoxygenase in contact with methylene blue and β-carotene. Sodium linoleate bleaching method was adopted to determine L-1 and L-2. Carotene bleaching and spectrophotometric methods were used to determine L-3. These systems were very rapid within one minute, furthermore only required a small piece of cotyledon (below 10 mg) and the other part could be used for generation advance after analysis. It was demonstrated that 200 seed samples could be analyzed per day by one laboratory assistant. The combination of visual judging methods and electrophoresis is suitable for breeding programs. It took 6.5 hours for analysis of 100 seed samples by one person.
