한국버섯학회지 제17권 제4호 (p.185-190)

|Research Article|
느타리 버섯균의 정치배양으로부터 생산되는 중요한 망간퍼옥시데이즈(MnP3)의 N-말단 아미노산 배열 분석

N-terminal amino acid sequence analysis of major manganese peroxidase (MnP3) produced by static culture of Pleurotus ostreatus
키워드 :
Amino acid sequence,Ligninolytic enzymes,Manganese peroxidase,Pleurotus ostreatus,Static culture

목차

ABSTRACT
서 론
재료 및 방법
   공시균주 및 배양방법
   리그닌 분해효소 측정
   조효소액 준비 및 농축
   총 단백질 함량
   효소의 정제
   겔 전기영동
   N-말단 아미노산 서열분석
결과 및 고찰
   글루코오스-펩톤-이스트-밀기울 배지(GPYW)에서 정치배양한 리그닌분해효소 생산
   망간퍼옥시데이즈 분리 및 정제
   겔 전기영동
   N- 말단 아미노산 분석
적 요
REFERENCES

초록

리그닌 분해 담자균류로 알려져 있는 느타리버섯균 No.42는 망간퍼옥시데이즈(MnP) 및 락게이즈(Lac)를 생산하였으나 글루코오스-펩톤-이스트-밀기울(GPYW)배지를 이용한 정치배양조건하에서 리그닌퍼옥시데이즈(LiP)활성은 검출 되지 않았다. 한편, 동일배지에서 망간퍼옥시데이즈 활성은 11일째 80(3.6) U/flask(ml)의 최대 생산되었다. 망간퍼옥시 데이즈 분리정제는 Sepha-ros CL-6B 및 Mono-Q 컬럼순으로 수행하였으며 주요 망간퍼옥시데이즈 isozyme은 단일밴 드로 분자량은 36.4KDa이였다. N-말단으로부터 19개의 아 미노산 배열은 단백질 자동 분석 장치로 분석한 결과 ATCADGRTTANAACCVLFP를 나타내었다. 느타리버섯균 No.42의 정치배양조건 하에서 세포외로 생산되는 중요한 망간퍼옥시데이즈 isozyme의 N-말단 아미노산 배열은 이전에 보고된 MnP3의 아미노산 배열과 동일하였다.
Pleurotus ostreatus No.42, known as the ligninolytic basidiomycetes, showed production of MnP and Lac, but did not show any LiP acitivity in static culture, grown in GPYW liquid medium. Maximum production of MnP (80U/flask) was observed on day 11 of culturing in this medium. Chromatographic purification of MnP included the use of Sepharose CL-6B and Mono-Q. The major MnP isozyme purified by column chromatography was observed to be a 36.4 KDa (single band on SDS PAGE). The 19-amino acid sequence from the N-terminal was determined by protein sequencing to be ATCADGRTTANAACCVLFP. The N-terminal sequence of the major MnP isozyme of P. ostreatus No.42 was found to be the same as a previously reported sequence of an MnP3 isozyme from this fungus.