닭 정액의 주요성분인 glutamine은 정장의 주요 성분으로 정자의 생리 활성에 매우 중요 한 것으로 알려져 있으며 조류 정액 희석액의 주요성분으로 이용되어져 왔다. 그러나 glutamine은 액상의 배양액에서 변성이 일어날 수 있어 세포배양에는 alanyl glutamine을 이용하 여 장기 세포배양에 이용되고 있다. 본 연구에서는, alanyl glutamine을 이용하여 개발된 희 석제를 이용하고 닭 정액의 냉장보존에 이용하였으며, 닭 정자의 장기 생존성에 미치는 영 향을 조사하였다. 국립축산과학원 가축유전자원시험장에서 사양관리중인 오골계 수탉 또 는 레그혼에서 복부 마사지법으로 채취된 정액을 이용하였다. 채취한 정액은 96 mM L- Glutamine 또는 Alanyl Glutamine을 함유하는 희석액에 각각 1:8의 부피비율로 상온에서 희석하 여 상업용 냉장고와 4℃로 조절된 BOD 배양기에 보존을 실시하였다. 냉장되는 온도의 저 하 속도를 낮추기 위하여 상온에서 희석하는 온도와 동일한 온도의 증류수 300 ml을 비이 커에 담고 물위에 1.5 ml E-tube에 담아서 파리필름으로 밀봉하였다. 희석된 정자의 활력은 상업용 냉장고에 보존할 경우, 4일차까지 75.6%의 활력정자가 유지 되었으나 5일 이후에는 급격히 생존성이 저하되었으며 6일째에는 활력 정자의 수가 18%로 낮게 나타났다. 한편, BOD 배양기에서 보존된 동일한 정자는 9일까지 약 73%의 활력정자가 유지되었으며, 10일 이후에는 활력 정자의 수가 급격히 감소되는 현상을 관찰하였으며, 15일째에는 약 20%의 정자 활력이 유지되는 현상을 관찰하였다. 이러한 정자의 활성 유지는 정자의 미토콘드리 아 에 필요한 글루타민 에너지 공급원을 안정적으로 공급하는 기능에 의하여 유지 되는것으로 추정되며 특히 hyper activated sperm의 비율을 줄여주어 정자군의 노화를 방지할 수 있는 효과가 있는 것으로 추정되었다. 그러므로 조류 정액을 냉장 보존할 때, 알라닐글루타민을 희석액의 주요 성분으로 이용될 수 있음을 보여주고 있다.

칡한우는 한우의 품종의 하나로 FAO에 등록되어 있고, 1,700여두가 사육되고 있는 것으 로 추정하고 있다. 그러나 사육두수가 적어 멸종위험품종으로 분류되고 있고, 특히 번식 가 능한 수소의 숫자가 매우 적어 근친의 위험에 노출되어 있다. 칡소에 대한 연구는 유전적 특성(이 등, 2002), 정액동결(조 등, 2011), 모색분포(박 등, 2007) 등으로 아주 제한적으로 보고되고 있어서 증식에 필요한 정액 동결관련 연구가 필요할 것으로 생각된다. 따라서 본 연구에서는 칡한우 수소의 활용도를 높이기 위하여 생후 15개월령 단계에서 2-3일 간격으 로 2회 채취하여 동결한 후 거세·비육하여 도체성적을 평가하였다. 정액채취는 인공질(FHK, Japan), 동결희석제는 Triladyl(Minitube, Germany) 희석제를 이 용하였다. 정자의 motility는 CASA system(Minitube, Germany)상에서 Total motile (TM)과 Progressive motile (PM) 비율을 측정하였다. 15개월령 칡소와 30개월령 칡소의 신선 및 동결융해 정액의 활력을 조사한 결과, 15개월 령 수소의 정액량이 평균 2.3 ml이었고, 30개월 수소의 정액량은 평균 5.0 ml로서 유의하게 높았다(p<0.05). 채정 직후의 신선정자의 TM 비율이 15개월 및 30개월 수소가 각각 평균 93.7% 및 88.3%, PM 비율은 각각 97.0% 및 88.3%로서 PM 비율은 15개월령이 유의하게 높았다(p<0.05). 한편 동결융해 정자의 TM 비율은 각각 평균 56.0% 및 58.0%였고, PM 비 율은 각각 평균 64.0% 및 70.7%로서 차이가 없었다. 칡소 15개월 정액채취가 완료된 후 거세 및 비육하여 출하한 결과와 한우 거세우의 도축 성적을 비교한 결과, 육량은 A등급이 칡한우는 35.7%, 한우는 27.5%였고, B등급은 각각 42.9% 및 52.75였다. 육질등급은 1++등급이 각각 35.7% 및 15.0%, 1+등급이 각각 35.7% 및 30.8%, 1등급은 각각 14.3% 및 32.0% 그리고 2등급이 각각 14.3% 및 20.1%였다. 본 연구를 통하여 칡한우 수소 생후 15개월령에서 정액채취, 동결 및 활용이 가능한 것 으로 판단되며, 향후 칡한우 고유 유전자원의 확보 및 증식에 활용도가 높을 것으로 기대된 다.

This study was conducted to evaluate whether \"Royal jelly\" (RJ) added to Tris-buffer dilute contributed to supporting post-thaw viability and longevity of frozen canine spermatozoa. Two Japanese spitzs (2 to 4 years of age) were used as a semen donor. Semen was collected by manual masturbation and separated into 3 fractions. Only the sperm-rich fraction having sperm motility of more than 70%, containing sperm concentration of 2~410 cells/ml and having dead or abnormal spermatozoa of less than 15% was used for the experiment. Each ejaculated semen was centrifuged at 400 g for 5 min and then diluted in a Tris-buffer supplemented with 20 ml egg yolk (Ext I), 4% glycero1 and 1% Equex STM Paste (Ext II) or g1ycero1, Equex STM paste and RJ of various concentrations (Ext II-RJ). After freezing and thawing, viability of spermatozoa in Ext II -RJ containing 1% RJ immediately after thawing (67.59.6) was significantly lower than that of Ext II , Ext II -RJ containing 0.01 or 0.1% RJ (77.512.5, 78.78.2 and 80.06.3). However, Ext II-RJ containing 0.1% RJ yielded higher viability than Ext II, Ext II-RJ containing 0.01% at or 1% 1 h after thawing (69.58.1 vs. 55.012.9, 57.59.6 and 41.512.6; P<0.05). At 1 h after thawing, the viability of spermatozoa thawed in 7 (68.812.5) was significantly higher than that of spermatozoa thawed in 38 (48.816.3), although there was no difference in the viability between both groups immediately after thawing (77.59.6 and 81.38.1). Post-thaw viability and longevity of post-thaw spermatozoa in Ext II-RJ containing 0.1% RJ was higher in those in Ext II at 1 h (65.012.9 vs. 42.512.6), 2 h (52.512.6 vs. 27.517.1) and 3 h (40.014.1 vs. 20.012.1) after thawing. These results indicated that addition of 0.1% af to Tris-buffer enhanced post-thaw viability and longevity of canine spermatozoa and this additive can be used for increasing the possibility of collision between spermatozoa and ova during insemination.emination.