Orchardgrass의 종자배양에서 캘러스형성과 식물체 재분화에 적합한 조건을구명하기 위하여 품종간의 차이와 배지조성 및 생장조절물질의 조성 등에 대한 일련의 실험을 수행한 바, 공시품종중 "Amba"의 식물체 재분화율이 가장 높았고, $N_6$ 수식 이미지 배지가 MS, $B_5$ 수식 이미지 배지보다 종자에서 형성된 캘러스 생체중이 무거웠으며, 식물체 재분화율도 높게 나타났다. 또한 3 mg/L의 dicamba가 첨가된 배지에서 형성된 캘러스를 재분화배지에 이식하였을 때 식물체 재분화율이 30%로 가장 높게 나타났다.ㅍ

다섯가지 품종의 레드 클로-버의 캘러스 유도에 미치는 몇가지 요인을 밝히기 위하여 본 실험을 행하였으며, 얻어진 결과는 아래와 같았다. Callus유도에서 auxin원으로서 0.1 ml/l의 picloram이 가장 효과적인 것으로 나타났으며, 여러 종류의 배지중에서는 PC(Phillips & Collins)배지가 가장 callus 형성이 좋았다. PC 배지에서 생성된 callus는 다른 배지에서 생선된 callus보다 더 무른 것이 특징이었다. 배지의

작약(芍藥)의 약(葯)으로부터 분리된 화분소포자(花粉小胞子)를 생장조절제가 첨가되지 않은 MS 배지에 배양하였을때 직접 배(胚)발생 과정을 거쳐서 소포자 유래의 배(胚)가 형성되었고, 1mg/l의 PAA가 첨가된 배지에서는 화분소포자 유래의 캘러스가 형성 되었으며 이들 캘러스를 생장조절제를 함유하지 않은 배지에 이식하였을 때 배양 7주 후에 배(胚)가 형성되었다.

본 연구는 Petunia hybrida hybrid를 약배양(葯培養)하여 반수체(半數體)를 얻을 목적으로 약(葯)의 치상시기(置床時期)와 배지(培地)의 종류(種類), 생장조절물질(生長調節物質)의 종류와 농도, 약(葯)의 전처리(前處理)와 품종(品種)에 따른 캘러스 형성률을 조사하였던 바 다음과 같은 결과를 얻었다. 약배양하기 전 0.8-1.2cm의 길이의 화뢰(花雷)가 달린 모본(母本)의 줄기를 에서 15일간 저온처리(低溫處理)하였다. 약을 채취하여 1/2 MS배지에 NAA 5.0mg/, BAP 0.5mg/를 첨가한 배지(sucrose 30g/, 2g/, pH 5.8)에서 배양 4주후 연녹색의 캘러스가 형성되었으며, 이들 캘러스로부터 배양 3주후 2ip 2.0mg/가 함유된 MS배지에서 식물체가 분화되었다.

기관분화(器官分化)된 유채의 조직으로부터 재분화되는 식물체의 획득빈도를 높이고자 이에 관여하는 몇가지 요인에 대한 실험을 수행하여 얻어진 결과는 다음과 같다. 유채의 종자, 무균배양(無菌培養)된 자엽(子葉), 하배축(下胚軸) 및 엽절편(葉切片)배양에서 명상태에서 보다는 암상태에서 캘러스의 생장이 왕성하였고, 하배축(下胚軸)과 자엽조직(子葉組織)에서 형성된 캘러스에서 shoot 분화능력이 높은 편이었다. 자엽(子葉) 및 하배축(下胚軸) 조직(組織)의 캘러스형성에는 2, 4-D 단용보다 2, 4-D와 kinetin 또는 BAP를 혼용하는 것이 효과적이었으며, 자엽조직(子葉組織)의 경우는 2, 4-D(1.0 mg/)와 0.1mg/의 kinetin이 첨가된 배지에 형성된 캘러스를 0.1mg/의 NAA와 2.0 mg/의 kinetin이 첨가된 배치에 이식하였을 때 shoot 분화율이 16.7%로 가장 높게 나타났다. 하배축(下胚軸) 조직(組織)에서는 1.0mg/의 2, 4-D와 0.5mg/의 kinetin이 첨가된 배지에서 형성된 캘러스를 0.1mg/의 NAA와 4.0mg/의 kinetin이 혼용된 배지에 이식하였을 때 shoot 분화율(分化率)이 24%로 가장 높게 나타났다. 자엽(子葉) 및 하배축(下胚軸) 조직(組織)의 캘러스 형성과 shoot분화능력의 유채 품종간(品種間) 차이는 매우 뚜렷하게 인정되었고, 자엽(子葉)보다는 하배축(下胚軸) 조직(組織)에서 형성된 캘러스에서 shoot 분화능력이 현저히 높게 나타났다.

본 연구(硏究)는 식물(植物)의 발생(發生)과 분화(分化)에 관(關)한 생화학적(生化學的) 분자생물학적(分子生物學的) 구명(究明)을 위해 조직(組織) 발생(發生) 단계(段階)의 특이적인 유전자(遺傳子)의 발현조절 기작과 역할(役割)을 연구(硏究)하기 위한 기초(基礎) 지식을 얻고자 수행(遂行)되었다. 벼를 실험재료(實險材料)로 하여 현미로부터 callus를 유도(誘道)하고 이들 callus에서 여러가지 방법(方法)을 통(通)해 embryogenic callus와 nonembryogenic callus를 분리(分離)해 somatic embryogenesis에 관련된 특수한 단백질(蛋白質)을 찾고자 하였고 그 결과(結果)를 요약(要約)하면 다음과 같다. 지금까지의 보고(報告)에 의하면 재분화가 잘되는 callus와 그렇지 않은 callus간에는 여러가지 면에서 차이가 난다고 알려져 있다. 재분화가 잘되는 callus는 표면이 거칠고 흰색에 가까우며 조직(組織)이 단단하다. 반면에 재분화가 되지않는 callus는 표면(表面)에 윤기가 나며 단단하지 않다. 이러한 보고(報告)를 기초(基礎)로 하여 media에 1mg/1의 2,4-D가 첨가(添加)된 배지(培地)에서 2주 정도 callus를 유기시키고 유기된 callus는 다시 배양(培養)하였다. 7-8차 계대배양하면서 embryogenic callus와 nonembryogenic callus를 분리(分離)한 다음 이를 시료(試料)로 하여 protein을 추출(抽出)하여 SDS-PAGE 상에서 비교하여 보았다. 그 결과(結果) 두 callus간에 차이가 있음을 알 수 있었다. 7-8차 계대배양한 두 종류(種類)의 callus로 부터 protein을 분리하여 two-dimensional gel 전기영동에 의해 비교하여 본 결과(結果) 몇 개의 단백질(蛋白質)이 서로 다름을 알 수 있었다.

벼 완숙현미(完熟玄米)의 배(胚)로부터 유기(誘起)된 callus의 계대배양(繼代培養)에 영향(影響)을 미치는 계대배양(繼代培養) 회수(回數), 기간(期間) 및 배지내(培地內)에 첨가(添加)되는 생장조정제(生長調整劑)의 조성(組成) 등(等)과 같은 몇가지 요인(要因)에 대한 실험(實驗)을 수행(遂行)하여 얻어진 결과(結果)는 다음과 같다. 벼 callus의 계대배양(繼代培養)은 4주간격(週間隔)보다는 2주간격(週間隔)으로 배양(培養)하는 것이 효과적(效果的)이었고 식물체(植物體) 재분화율(再分化率)은 품종(品種)과 계대배양(繼代培養) 기간(期間)에 따라 크게 상이(相異)한 것으로 나타났다. "영덕(盈德)벼"의 경우는 2주간격(週間隔)으로 4회(回) 계대배양(繼代培養)된 callus에서 72.5%의 가장 높은 재분화율(再分化率)을 보였으며, 4주간격(週間隔) 2회(回) 계대배양(繼代培養)된 callus에서도 58.3%의 재분화율(再分化率)을 보였다. Callus유기(誘起) 배지(培地)에 CH(2g/1), MI(200mg/1), TH(2mg/1)등(等)을 첨가(添加)하면 callus생장량(生長量)도 많았고 식물체(植物體) 재분화율(再分化率)도 향상(向上)되었으며, 식물체(植物體) 재분화(再分化)에는 kinetin단용(單用)보다는 kinetin과 NAA를 혼용(混用)하는 것이 효과적(效果的)인 것으로 나타났다. Callus 계대배양(繼代培養)에 CH, MI, TH 등(等)을 첨가(添加)한 배지(培地)를 이용(利用)하면 embryogenic callus의 발생량(發生量) 증가(增加)하는 경향이었고 품종(品種)에 따라서는 식물체(植物體) 재분화율(再分化率)도 높게 유지(維持)되는 것으로 나타났다.

本實驗은 Vernal알팔파의 callus 誘導에 미치는 몇가지 要因들에 對하여 糾明하고자 逐行되었으며 얻어진 結果는 다음과 같다, Callus 誘導에서 auxin 源으로서 2,4-D를 2-5mg/1 單用處理한 것이 가장 좋았으며, 여러가지 基本 培地 中에서는 B5와 SH가 callus 誘導에 가장 效果的이었는데, PC와 MS 培地에서 生成된 callus는 friable 하였다. 培地#의 pH는 5.8이 가장 좋았으며 7.0 以上에서는 callus는 거의

벼 약(葯) 배양(培養)에 있어서 이삭내(內), 이삭당(當) callus의 형성량(形成量)의 차이(差異)와 형성(形成)된 callus의 처리과정(處理過程)의 분화(分化)에 미치는 영향(影響), 저온처리(低溫處理)에 의한 callus 형성량(形成量)의 증가(增加)와, 분화(分化)에서의 효과(效果)를 구명(究明)하기 위해 실시(實施)한 시험(試驗)의 결과(結果)는 다음과 같다. Callus의 행장(生長)에는 고체배지(固體培地)가 액체배지(液體培地)보다 양호(良好)하였고, 특히 N-6배지(培地)가 19.8배(陪)의 생장율(生長率)로 가장 양호(良好)하였다. 분화(分化)에서도 역시 N-6배지(培地)가 뿌리에서 37.50%의 분화율(分化率)로 가장 높았으며, P. E 배지(培地)는 callus생장(生長)에는 M-S배지(培地)보다 불량(不良)하였으나 분화율(分化率)은 5% 높았다. 한 이삭내(內)에서는 극히 제한(制限)된 수(數)의 약(葯)에서만 callus가 형성(形成)되었으나 그 분포(分布)는 넓은 편이었다. 저온처리(低溫處理)로서 callus 형성량(形成量)이 증가(增加)하였고 특히 에 5일간(日開) 처리(處理)한것은 처리(處理)하지 않은것보다 38%가 증가(增加)하였다. 또한 저온처리(低溫處理)로서 callus의 형성시기(形成時期)가 빨라지며 형성기간(形成期間)의 폭(幅)도 넓어지는 경향(傾向)이 있다. 약(葯)에서 형성(形成)된 callus는 빨리 분화배지(分化培地)에 이식(移植)하는 것이 분화율(分化率)이 높으며 시일(時日)이 경과(經過)할수록 분화율(分化率)이 감소(減少)하였다. 고농도(高濃度)의 2, 4-D는 Callus의 생장과정(生長過程)에서 분화능력(分化能力)을 유지(維持)시켜 주는것으로 추정(推定)되며 분화중(分化中)의 callus는 저온처리(低溫處理)로서 뿌리에는 급격(急激)한 분화율(分化率)의 감소(減少)를 야기(惹起)시키나 줄기에는 에 5일간(日間) 처리(處理)한 것이 유효(有效)하였다.

마늘의 바이러스 무감염주 생산과 종자 비용절감을 위한 기초적연구를 행하고저 마늘인편의 보통엽조직의 callus배양을 행하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 마늘 callus의 유도 Linsmaier & Skoog는 기본배지에 Benzyladenine 10-5M과 2,4-D10-5M에서 가장 양호한 결과를 얻었다. 2. callus생장은 Linsmaier & Skoog 기본배지에 kinetin 10-6M과, 2,4D10-6M을 함유한 것이 가장 양호하였다. 3. callus조직내의 바이러스 소장을 조사한 결과 투명하고 부드러운 callus조직을 8대 계대배양을 하였을 때 바이러스는 제거되었다. 4. 바이러스무감염이 확인된 마늘 callus조직을 Murashing & Skoog 기본배지에 kinetin 10-5M와 NAA5×10-6M을 함유한 배지에 다식하였을 때 재분화 되어 소식물체를 형성하였다.

Background : Kalopanax pictus is one of the most popular wild vegetables in Korea. In recent years Kalopanax pictus has been developed which has no thorns that can be efficiently harvested. Kalopanax pictus, now without thorns, breeds only by root cutting. This makes the price of ineffective and invisible Kalopanax pictus high. Therefore, tissue culture is necessary for efficient mass proliferation of visibly absent Kalopanax pictus. This study was conducted to investigate the effect of anti-browning treatment on tissue culture of thornless Kalopanax pictus. Methods and Results : Thornless Kalopanax pictus young leaves were cut into 5 ㎜ in diameter and cultured for 1 month at 2,4-D 1 ppm + TDZ 0.1 ppm + 3% sucrose. Add 0.05%, 0.1%, 0.15% and 0.2 ㎎/ℓ of browning inhibitor such as ascorbic acid, citric acid and activated charcoal to the MS + 2,4-D 0.2 ppm + 5% sucrose medium. And cultured at 25℃ for 24 hours Light condition for 1 month. In order to determine the optimum concentration of browning agent, characteristics such as callus size, adventitious shoot formation rate and browning degree were investigated. As a result, the callus size of ascorbic acid 0.05 ㎎/ℓ was the largest at 2.26 ± 0.4 ㎝ and the adventitious shoot formation rate was the highest at 16.4%. The degree of browning was 40.30 ± 4.92 in L value and 5.00 ± 2.23 in b value. Conclusion : When ascorbic acid 0.05 ㎎/ℓ is added to the secondary culture medium, the size of the callus increases and the degree of browning decreases. Using the above-mentioned results, we can establish a mass proliferation system through tissue culture of Thornless Kalopanax pictus.

Background : In this study, we investigated the formation of Abeliophyllum distichum callus which has not been reported until now and the culture optimization. The potential of callus cultures was examined by comparing the components and antioxidant activities of callus and wild planting. Furthermore, it was intended to provide data on the possibility of substitution for the active ingredient production of Abeliophyllum distichum callus extraction. Methods and Results : We tried to induce callus by introducing it in vitro culture by using leaves and stem of Abeliophyllum distichum grown in Goesan Chungbuk. In order to investigate the effect of growth regulators on the callus, TDZ, NAA, 2,4-D, IBA and BAP were treated with 0.25 to 5 ㎎/ℓ of single hormone, and the combination hormones were treated with two concentrations of BAP (0.1, 1.0 ㎎/ℓ) and 2,4-D, NAA, IBA at 0.1 ㎎/ℓ and 1.0 ㎎/ℓ. And investigate the effect of inorganic salt concentration on somatic embryogenesis, the incidence of callus was examined by culturing 1X, 1/2X MS medium for 4 weeks. As a result, the effect of growth regulator and treatment concentration on the callus formation of Abeliophyllum distichum, callus induction was the fastest in the 2,4-D condition, but the callus indection was slow. The highest amount was produced ine the NAA condition. The axillary bud was best grown in TDZ condition, but no root was formed. LC chromatogram was able to compare the contents of leaf, stem extracts and callus extracts. Antioxidant ativity showed excellent antioxidative activity in the extracts of the wild planted stem. Conclusion : The optimum culture conditions for callus were 1/2X MS, 1 ㎎/ℓ BAP and 0.1 ㎎/ℓ of 2,4-D. As a result of LC chromatogram, it was confirmed that callus extract contained a large amount of the same components as the stem and leaf extracts grown on the wild planting. Currently, Studies on mass culture using bioreactor to utilize this are underway, We could confirm the potential possibility of Abeliophyllum distichum cultured products.

Background : Rhododendron brachycarpum belong to Ericaceae family is northern herbaceous plant and grows high in mountains of Korea. Traditionally, this plants have been used to treat arthralgia, neuralgia, hypertension, roborant and diuretic. In spite of medicinal values, natural populations are decresing due to climate change and grows slowly. Therefore it need to secure plant materials and in vitro culture is able to the alternative methods. In this study, we examined the effect of PGRs treatment using leaf and petiole explants. Methods and Results : The effects of the different surface sterilization agents (NaOCl and HgCl2) and time were tested. Best results with lower contamination and higher explants survival were recorded with 2 - 4% NaOCl for 1 minutes and 0.5 - 1.0% AgNO3. Callus was obtained when cultured onto MS medium using different concentration and combination of 2,4-D, BA and NAA. Maxium induction of callus was obtained from combinations of 2.0 ㎎ l-1 2,4-D and 1.0 - 2.0 ㎎ l-1 BA from leaf explants. Petiole explants were more effective to induce callus than leaf explants from combination of 1.0 ㎎ l-1 2,4-D and 0.1 - 1.0 ㎎ l-1 BA. Conclusion : The resultes provide that different explants and PGRs combinations were good source of callus induction.

Background : Korean ginseng require 3 - 4 years to produce mature seeds from their mother plants. Therfore, it takes over 20 years to genetic fixation by artificial crossing of 8 generation. Anther culture is a useful method for obtaining homozygotes in only one generation. However, there is not much research on ginseng yet. In this study, we investigated the callus induction of anther depending on the type and concentration of the plant growth regulators in Panax ginseng C. A. Meyer. Methods and Results : Flower buds of P. ginseng were cold pretreated at 2 days before the anthers were plated on the induction medium. The flower buds were immersed in 70% ethanol for 30 sec min, washed two times with sterile distilled water, surface-sterilized in 2% sodium hypochlorite solution for 20 min, then rinsed five times with sterile distilled water. The anthers were placed on Petri dishes containting fifteen different concentrations and combinations of 2,4-D, NAA, BAP and KT. Callus induction was significantly influenced by the type and combination of plant growth regulators. The highest callus induction rate was observed in GR5 medium at 79.2%. The 2,4-D mediums had significantly higher callus induction than the NAA medium, and 2,4-D 1 ㎎/ℓ have a higher callus induction rate than the other concentrations. The increase of callus induction rate was not observed by the addition of cytokinin, but the callus induction rate was gradually decreased as the BAP concentration was increased. There was no difference in callus induction rate between BAP and KT. Conclusion : The important factor for inducing callus of ginseng anther was the addition of 2,4-D, and no effect of cytokinin addition could be found.

본 연구에서는 천연 화장품 소재 개발을 위하여 접시꽃 캘러스 생리활성 효능에 대해서 평가하였다. 접시 꽃캘러스 추출물의 항산화 효능은 DPPH, ABTS, FRAP assay를 통해서 확인하였다. 그 결과 접시꽃캘러스 추출물은 농도 의존적으로 강력한 항산화 능력을 확인되었다. 더불어, 접시꽃 캘러스 추출물은 10 mg/mL 의 농도에서 세포 내 ROS를 효과적으로 감소시키는 것으로 확인되었다. 접시꽃 캘러스 추출물의 미백효능을 평가 하기 위해 tyrosinase 저해 효과를 확인한 결과, 접시꽃 캘러스 추출물은 10 mg/mL 의 농도에서 tyrosinase 활성을 51% 감소시키는 것으로 확인되었다. 이상의 결과를 바탕으로, 접시꽃 캘러스 추출물은 항산화 및 미백 효능을 지닌 화장품 기능성 소재로서 적용 가치가 높은 천연소재로 사료된다.

In this study, we evaluated the antioxidant activity and protective effects against oxidative DNA damage of the ethyl acetate fraction from the callus of Abeliophyllum distichum Nakai (ECA). Callus of A. distichum was induced on MS medium containing NAA (1 ㎎/L) and 2,4-D (1 ㎎/L), and a sufficient amount was obtained for the extraction by subculture. Acteoside was analyzed and quantified (0.39 ㎎/g callus) from ECA using the high-performance liquid chromatographyphotodiode array detector method. ECA showed very high antioxidative activity as revealed by DPPH and ABTS scavenging assays. The IC50 values were 12.4 and 6.8 ㎍/㎖, respectively. ECA showed protective effects against oxidative DNA damage evaluated by using ψX-174 RF I plasmid DNA. It also inhibited DNA damage by suppressing the oxidative stress-induced protein and mRNA levels of γ-H2AX and p53 in NIH/3T3 cells. In conclusion, ECA protects against oxidative DNA damage through its powerful antioxidant activity.

Plant molecular farming has attracted a lot of attention lately in the field of mass production of industrially valuable materials by extending application of the plant as a kind of factory concept. Among them, protein expression system using rice(Oryza sativa L.) callus is a technology capable of mass culture and industrialization because of a high expression rate of a target protein. This study was carried out to develop an Agrobacterium-mediated transformation system to increase the utilization of rice callus. The transformation efficiency was improved by using the hand when seeds were de-husked for callus induction. Furthermore, we were possible induction of callus from 6 years old seed smoothly. Selection of the callus contained the target gene was required a cultivation period of at least 3 weeks, and the most efficient selection period was after 6 weeks of culture including one passage. This selection was confirmed that the gene was stably inserted into the genomic DNA of the plant cell by the southern blot analysis and progeny test. Such an efficient selection system of rice callus that can be cultured in the long term will be contribute to the industrialization of useful recombinant proteins using rice.