회전식 통풍관 생물반응기 사용에 따른 느타리균의 manganese peroxidase 생산 및 특성 Production of manganese peroxidase from Pleurotus ostreatus using a rotary draft tube bioreactor (RTB) and characterization of its activity
pp.316-321
리그닌 분해효소의 생산은 나선형 리본이 있는 새로운 형태의 회전식 통풍관 생물 반응기(RTB)를 사용하여 느타리(Pleurotus ostreatus) No.42에 의해 실시하였다. 락게 이즈(laccase)의 최대 생산량은 배양 3일 후 약 8,200 U/ bioreactor 수준에 도달한 후 감소하였다. 반면에, 망간퍼 옥시데이즈(MnP)의 최대 생산은 6일 배양 후 약 8,400 U/bioreactor의 수준에 도달하였다. 그러나 이 발효조에서 리그닌퍼옥시데이즈(LiP)는 검출되지 않았다. 그 결과 회전식 통풍관 생물 반응기(RTB)가 리그닌 분해효소를 대규모 생산을 위해 성공적으로 생산할 수 있음을 보여주었다. 이 발효기에서 망간퍼옥시데이즈의 정제 과정은 Sepharose CL-6B, Superdex 75 prep grade 및 Mono-Q에 대한 크로마토그래피를 포함하여 정제하였다. 이 주요 효소는 sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide 겔 전기영동(SDS-PAGE)에서 분자량 36,400, pI 3.95의 등전점(IEF)으로 각각 확인되었다. 이 발효기의 주요 효소 N-말단 서열은 정치 및 진탕배양과 같은 다른 배양조건에서 보고된 MnP3 효소와 동일하였다.
Ligninolytic enzymes were produced by Pleurotus ostreatus No.42, cultivated in a new kind of bioreactor that has a rotating draft tube with a helical ribbon. Maximum laccase (Lac) production (about 8,200 U/bioreactor) was reached after 3 days of incubation, then production decreased. Production of manganese peroxidase (MnP) in this fermenter reached a maximum level of about 8,400 U/bioreactor after 6 days of incubation. Lignin peroxidase (LiP) was not detected under these growth conditions. These results indicate that the rotary draft tube bioreactor (RTB) is compatible with large scale production of ligninolytic enzymes. MnP produced under these fermentation conditions was purified via a multistep process that included chromatography on Sepharose CL-6B, prep grade Superdex 75, and Mono-Q. This major isoenzyme was confirmed to have an apparent molecular weight of 36,400 by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), and its isoelectric point (IEF) was determined to be 3.95. N-terminal sequencing of the major isoenzyme from this fermentation was identical to that reported for an MnP3 isoenzyme isolated under different cultivation conditions, including stationary and shaking culture.
서 론
재료 및 방법
공시균주 및 배양방법
리그닌 분해효소 측정
용존산소 측정
글루코오스 측정
총 단백질 함량
Manganese peroxidase(MnP)의 정제
겔 전기영동 및 등전점
N-말단 아미노산 서열분석
결과 및 고찰
회전식 통풍관 생물 반응기(RTB)를 사용한 느타리균의리그닌 분해효소 생산
Manganese peroxidase 분리 및 정제
겔 전기영동 및 등전점
적 요
REFERENCES