논문 상세보기
Development of Rapid Immune-gold Strip Kit for On-site Diagnosis of Cucumber Mosaic Virus KCI 등재
오이모자이크바이러스 현장진단용 급속면역금나노입자 막대 키트 개발
- 언어ENG
- URLhttps://db.koreascholar.com/Article/Detail/268961
pp.62-67
‘급속면역금나노입자막대 (RIGS) 키트’라 명명된 빠르며 사용자 편의 및 간단한 면역흡착막대 방식의 키트가 오이모자이크바이러스 (CMV)의 현장진단을 하기 위하여 개발되었다. 토끼의 CMV항혈청에서 정제된 면역글로블린G (IgG)는 단백질A 크로마토그래피법으로 정제되었으며 이후 금나노입자와 결합하여 니트로셀룰로스막에서 진단선 표시하도록 고안되었다.CMV항체와 비특이적으로 결합하는 단백질A를 같은 진단막대에서 대조선으로 이용되었다. RIGS-CMV 키트를 이용한 진단은 의심 식물 시료를 완충액이 들어간 플라스틱 봉지에 넣은 후 착즙 후 진단막대기를 넣으면 된다. 결과는 5-10분 후알 수 있다. CMV가 감염된 고추, 오이 및 멜론의 즙액에RIGS 막대기를 넣고 진단한 결과 CMV 농도에 비례하여 진단선이 형성됨이 관찰되었으며, 이들 키트들은 CMV와 연관되지 않은 다른 고추바이러스들에서 비특이적 반응이 형성되지 않았다. 이런 결과들은 RIGS-CMV 키트가 매우 민감하며,진단에 별 다른 실험실 기술이나 경험이 필요하지 않는 다는것을 의미한다. 그러므로, RIGS-CMV 키트는 CMV 감염이의심되는 식물체들의 현장 진단 뿐만 아니라 실험실에서의CMV 진단에 효과적이다.
A rapid, user-friendly and simple immune-chromatographic dipstick kit named ‘rapidimmune-gold strip’ (RIGS) kit was developed in a novel single strip format to detect on-site detection ofCucumber mosaic virus (CMV). Immunoglobulin G (IgG) from polyclonal antisera raised in rabbitsagainst CMV was purified through protein-A affinity chromatography and then the purified CMV-IgGwas conjugated to colloidal gold nano-particles which served as a test line on nitrocellulose membrane.Protein A that non-specifically binds to CMV antibody was used as a control line on the same strip. Thediagnosis process with the RIGS-CMV involves simply grinding the suspect plant sample in a bag thatcontains the extraction buffer and inserting the strip the bag. Results can be seen in 5-10 minutes. Theflow of the complexes of gold particles coated with CMV-IgG and a crude sap from CMV infected pep-per, cucumber and melon plants resulted in intensive color formed on the test lines proportional to theconcentrations of CMV. The RIGS-CMV kit did not show any cross-reactions against other pepper-infecting viruses unrelated to CMV. These results indicate that the RIGS-CMV kit is highly sensitive andis not required for laboratory training and experience prior to testing. The RIGS-CMV kit is suitable foron-site determination of suspect CMV-infected plants as well as for laboratory diagnosis.
