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T-DNA Integration Patterns in Transgenic Tomatoes with PATII Gene KCI 등재
형질전환 토마토의 T-DNA 도입 특성 분석
- 언어ENG
- URLhttps://db.koreascholar.com/Article/Detail/284469
pp.591-597
제초제 저항성 유전자가 도입된 형질전환 토마토에서 T-DNA의 특성을 분석하였다. 형질전환 토마토의 T-DNA 도입형태를 분석하기 위한 primer쌍을 제작하여 rpPCR을 실시하 였다. T0-21(15:1, 4 copy), 26(3:1, 3 copy), 34(63:1, 4 copy)의 경우에는 5쌍의 primer를 이용하여 수행한 rpPCR 결과에서 양쪽이 절단된 불완전한 T-DNA 반복이 확인되었다. 도입된 T-DNA의 주변 서열 및 분포를 알아보기 위하여 총 52개체의 형질전환체에 대하여 TAIL-PCR을 실시하였다. 이 중 22개 형질전환체의 TAIL-PCR 산물의 염기서열을 분석하였는데, 2개의 형질전환체에서 나온 염기서열 결과는 토마토의 12번 염색체와 90%, 1개체는 토마토 clone 135006R과 98%, 5개체는 담배의 엽록체와 97% 상동성을 보였으며, 12개체는 다양한 vector의 염기서열을 나타내었고, 그 외 나머지 개체들은 토마토 유전체 정보와 는 유사성을 찾을 수 없었다.
The repetitive integration of transgenes in transgenic tomatoes was investigated. Several independent transgenic lines of tomato were screened for possible T-DNA repeats using reverse primer PCR (rpPCR), which utilizes primer pairs oriented in opposite directions. The rpPCR results showed that the binding sites for primers 3 and 4 were missed and were truncated at T-DNA copies in the 3 transgenic lines, including T0-21, -26, and -34. To assess the distribution of inserts, 52 flanking sequenceswere amplified by thermal asymmetric interlaced (TAIL)-PCR. In the nucleotide sequence analysis results of 22 flanking regions, two showed higher than 90% homologys to centromeric region of chromosome 12, one flanking sequence showed 98% homology to tomato clone 135006R, and five flanking sequences showed 97% homology to tobacco chloroplast genome DNA. Twelve of the 22 flanking sequences showed various vector sequences and thirty flanking sequences showed no significant similarity to any released tomato genomic regions.
