식품에 존재하는 주요 비타민 B12는 hydroxycobalamin, adenosylcobalamin, methylcobalamin이며 cyanocobalamin은 시리얼과 같은 강화식품에 사용되는 합성형이다. 비타민 B12는 식품 중에 낮은 농도로 존재하기 때문에 추출 및 농축과정이 매우 중요하다. 본 연구에서는 과자와 시리얼 같은 탄수화물 식품 중의 비타민 B12 추출을 위해 α-amylase처리와 산성조건과 cyanide 존재시 열처리, immunoaffinity column(IAC)로 농축과 세척, HPLC/DAD로 분리 검출하였다. 분석법 수행특성지표들을 측정함으로 분석법을 검증하였다. 정확성과 정밀성은 AOAC 가이드라인을 충족시켰고, LOD 0.01 μg/100g과 LOQ 0.03 μg/100 g을 얻었다. 국제정도관리 시험에서 z-score 1.4로 분석수행이 우수함을 확인하였고 QC chart를 이용한 분석품질관리로 모든 분석이 관리하에 있음을 확인하였다. 검증된 분석법으로 과자류 12종과 시리얼 11종의 비타민 B12 함량을 분석하여 각각 0.02-0.26과 0.03-2.67 μg/100 g 범위를 얻 고 이는 신뢰도높은 데이터로 식품성분표에 활용 가능할 것이며 IAC-HPLC/DAD법이 탄수화물 식품의 비타민 B12 데이터베이스 구축에 활용될 수 있을 것으로 보인다.

Naturally occurring vitamin B12 include hydroxycobalamin, adenosylcobalamin and methylcobalamin. Cyanocobalamin is a synthetic form observed in fortified food. Because vitamin B12 exists at very low concentration in food, concentration and clean-up are the crucial steps for accurate quantification. In this study, vitamin B12 assay using enzyme and heating extraction under acidic condition with cyanide and immunoaffinity-HPLC/DAD was validated and applied for vitamin B12 determination(μg cyanocobalamin/100 g) in confectionery and cereals. Accuracy and precision were good enough to meet the AOAC guidelines. Limit of detection and quantification were 0.01 and 0.03 μg/100 g, respectively. The z-score of the vitamin B12 assay in a FAPAS Proficiency test was less than 2, assuring reliability of analytical performance. The validated method was applied for determining vitamin B12 from confectionery and cereals: 0.02-0.26 and 0.03-2.67 μg/100 g, respectively. All analysis was under the control based on quality control chart of vitamin B12. This study shows that the IAC-HPLC/DAD is acceptable for the construction of reliable database on vitamin B12 for carbohydrate products.

Ⅰ. 서론
 Ⅱ. 재료 및 방법
  2.1 시약
  2.2 시료 준비
  2.3 비타민 B12 추출
  2.4 비타민 B12 농축 및 정제
  2.5 HPLC/PDA 분석
  2.6 분석법 검증
  2.7 내부 및 외부 분석품질 관리
 Ⅲ. 결과 및 고찰
  3.1 분석법의 특이성(Specificity) 검증
  3.2 분석법의 직선성(Linearity), 검출한계(LOD),정량한계(LOQ)
  3.3 정밀성(Precision)과 정확성(Accuracy) 검증
  3.4 과자류 및 시리얼류의 비타민 B12 함량 분석
  3.5 내부 분석품질관리(internal analytical qualitycontrol)
  3.6 외부 분석품질관리(external analytical qualitycontrol)
 Ⅳ. 결론
 Ⅴ. 감사의 글
 » Literature cited

• 장다은(순천대학교 식품공학과) | Da-Eun Jang
• 정명근(강원대학교 생약자원개발학과) | Myoung-Gun Choung
• 천지연(순천대학교 식품공학과) | Jiyeon Chun Corresponding author