One-step System으로 6시간 동안 중화된 H202의 배양 각막상피 세포에 대한 세 포독성과 Apoptosis를 조사하기 위해 세포에 15분간 직접 처리하여 세포의 형태적 변화， 생화화적 변화 그리고 면역화학적 발현 여부 등올 확인하였다. 세포독성은 형 태적 변화와 MTT Assay률 시행하였고 Apoptosis는 Hoechst 잃342의 형광염색으로 산 정 한 Apoptotic index, DePsipher™ assay를 이 용한 mitochondria 활성 과 변화를 확인하였으며 immunocytochemistry로 각막 상피세포 막의 수용체인 FAS 의 발현 여 부도 조사하였다. 중화된 H202를 15분간 처리 후 세포독성을 조사한 결과， 같은 디스크로 중화를 반 복한 경우 독성이 높게 나타났으며 세포증식도 느리게 나타났다.24시간 동안 세포를 정상 배양액으로 환원시켜 조사한 결과， 세포 독성에서 회복효과가 거의 없고 Apoptotic index도 높게 나타났다. 또한 미토콘드리아 활성과 초기 Apoptosis 에 대 한 검증도 모두 양성으로 나타났다. 그리고 Apoptosis 유도의 가장 중요한 경로인 FAS-FAS ligand system에 대 한 조사에 서 중화된 H20z를 처 리 한 세 포의 FAS 가 정 싱세포에서 보다 강하게 발현되는 것을 immunocytochemistry로 확인할 수 있었다. 이상의 결과로 강력한 apoptosis 유도 물질인 H202를 콘태트렌즈 소독을 위해 One-step system으로 중화한 경우에도 불완전하게 중화된 Hz02에 의해 각막상피세 포의 Apoptosis가 유도되 므로 중화용 백금 디 스크의 반복된 사용올 금지 하거 나 반복 사용 시에는 시간을 더 늘려야 할 것으로 사료된다.

The induction of apoptosis by neutralized hydrogen 않roxide(H2Üz) was examined in cultured human comeal epithelial(HCE) cells. A continuous HCE cell line was treated with neutralized H20Z for 15 rninutes and for 15 minutes followed by 24 hours of cell recovery. A change in morphology was observed in HCE cells treated with neutralized H20Z. The perce따age of dead cells as measured by MTT assay, was high in reuse of old disc manner. Morphologic changes and guantification of apoptotic cells were deterrnined under fluorescence microscope after neutralized HzOz-treated HCE cells for 15 minutes with Hoechst 33342 staining and DePsipher assay. The expression of F AS protein was measured by immunocyto다lemistry. A significant decrease of membrane integrity with chromatin condensation was observed with neutralized HzÜ2. Neutralized HzÜ2 elicited typical apoptotic morphologic changes(chromatic condensation, nucleus fragmentations, non orange-red colored rnitochondria) and expressed F AS protein highly. The loss rnitochondrial transmembrane potential appeared in earliest phase; subsequently, the chromatin condensation and DNA-fragmentation occurred. A functional FASmediated apoptotic pathway is present in cultured HCE cells and can be activated by upregulation of Fas expression with neutralized HzOz. This study suggests that the reuse of old discs must be prohibited or the exposure time to old discs should be in crease for the protection of H202 induced apoptoslS.

• 김재민(동강대학 안경광학과) | Jai-Min Kim