보존제 PHMB(polyhexamethylene biguanide)-EGCG(epigallocatechin gallate) 혼합물의 각막상피세포 급성독성 평가
목적: 항균제 polyhexamethylene Biguanide(PHMB), epigallocatechin gallate(EGCG) 및 PHMB/EGCG 혼합물의 각막상피세포(primary human corneal epithelial cells, HCEpiCs)에 대한 급성독성을 평가하고자 하였다.
방법: 각막상피세포를 0.00001~0.005% PHMB, 0.001~5% EGCG 및 0.00005% PHMB/0.05% EGCG 혼합물이 각각 포함된 배양액에서 30분, 60분, 120분 및 240분 동안 배양하였다. 배양한 각막상피세포를 고정한 다음 Draq 5로 염색하고 공초점현미경과 ImageXpress UltraTM를 이용하여 세포형태를 관찰하여 세포 생존율과 세포자살(apoptosis)을 비교하였다.
결과: 배양된 각막상피세포는 0.00005% 이하의 PHMB 농도 및 0.05% 이하의 EGCG 농도에서는 세포 독성이 나타나지 않았다. 0.00005% PHMB/0.05% EGCG 혼합물이 포함된 배양액에서 급성 세포독성은 관찰되지 않았으나 240분 배양시킨 경우에는 손상된 각막상피세포 수가 증가하고 생존 세포의 수는 감소하였다.
결론: 항균 시너지 효과를 갖는다고 보고된 0.00005% PHMB/0.05% EGCG 혼합물의 경우 각막상피세포에 대한 급성독성은 없었으나 만성효과에 대해서는 추가적인 연구가 필요할 것으로 생각된다.
Purpose : To evaluate the acute cytotoxic effect of polyhexamethylene biguanide (PHMB), epigallocatechin gallate (EGCG) and PHMB/EGCG mixture on the cultured human corneal epithelial cell (HCEpiC).
Methods : HCEpiCs were cultured in the media of HCEpiC containing 0.00001~0.005% PHMB, 0.001~5% EGCG and 0.00005% PHMB/0.05% EGCG mixture respectively for 30, 60, 120 and 240 min. Cultured HCEpiCs were fixed and stained with Draq5 and cell viability and apoptosis were evaluated using confocal microscope and ImageXpress UltraTM.
Results : Cultured HCEpiC did not show cytotoxic effect at below 0.00005% PHMB and below 0.05% EGCG concentration. In the media containing 0.00005% PHMB/0.05% EGCG, acute cytototoxic effect was not found, whereas damaged HCEpiCS were increased and survival cells were decreased in the media incubated for 240 min.
Conclusion : The mixture of 0.00005% PHMB/0.05% EGCG showed non acute cytotoxic effect on the cultured HCEpiCs, however it is needed to investigate its chronic cytotoxic effect.