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배과실(果實)의 PPO를 분리(分離) 정제(精製)한 후(後) 그 특성(特性)을 조사(調査)한 결과(結果)는 다음과 같다. 조효소액(粗酵素液)을 전기영동한 결과 2개의 활성분리대(活性分離帶)가 관찰(觀察)되었으며, 이 조효소액(粗酵素液)을 acetone 심몰(沈沒)과 DEAE-cellulose chromatography로 부분정제(部分精製)한 결과 PPO A 분획(分劃)과 PPO B 분획(分劃)을 얻었다. 각 구분을 전기영동(電氣泳動)한 결과 PPO A, B 각각 Rm치가 0.58, 0.68인 단일 활성분리대(活性分離帶)가 관찰(觀察)되었다. PPO A와 PPO B의 최종 정제도(精製度)는 각각 7.8와 8.7배(倍)였다. PPO A의 최적(最適) pH와 온도(溫度)는 pH 7, 인 반면 PPO B의 최적(最適) pH와 온도(溫度)는 pH 4.2, 로 나타났다. PPO A, B의 열(熱) 안정성(安定性)은 이상(以上)의 온도(溫度)에서는 급격히 활성(活性)이 감소했으며 PPO B보다 PPO A가 더 안전(安定)하였다. 배의 두 PPO는 o-diphenol에 강한 활성을 나타냈으며 특히 PPO A는 catechol에 PPO B는 chlorogenic acid에 활성이 강했다. 또한 PPO A는 pyrogallol에도 활성을 나타냈다. 그러나 두 PPO는 m-diphenol, p-diphenol과 monophenol에는 활성(活性)을 나타내지 않았다. 무기염(無機鹽)의 영향(影響)을 본 결과(結果)는 10mM농도(濃度)에서 은 PPO A의 활성(活性)을 증가(增加)시켰으나 는 저해(沮害)했고 반면 , 는 PPO B는 활성(活性)을 증가(增加)시켰으나 , , , 는 저해(沮害)했다. 는 저농도(低濃度)에서는 효소(酵素)를 활성화(活性化)시켰으나 10mM의 고농도(高濃度)에서는 저해작용(沮害作用)을 했다. 저해제(沮害劑)의 작용(作用)을 조사(調査)한 결과(結果), L-ascorbic acid, L-cysteine, thiourea 등이 저해작용(沮害作用)이 강했다. PPO A와 PPO B의 catechol에 대한 Km치는 각각 20mM과 14.3mM이었다.
Polyphenol oxidase in japanese pear (Pyrus communis var. mansamkil) was isolated, partially purified and its some properties were investigated. Polyacrylamide disc gel electrophoresis indicated two bands with polyphenol oxidase activity in the extract from acetone dry powder of par flesh. These two polyphenol oxidases (PPO A and PPO B) were purified through acetone precipitation and diethylaminoethyl cellulose column chromatography. PPO A and B were purified 7.8 fold and 8.7 fold by the present procedure, respectively. The Rm values of partially purified PPO A and B were estimated to be 0.58 and 0.68, respectively. The optimum temp, and pH of PPO A activity were and pH 7.0, while those of PPO B were and pH 4.2, respectively. Two PPO were unstable over the temperature of . The substrate specificity of pear PPO showed high affinity toward o-diphenolic compounds, especially catechol in PPO A and chlorogenic acid in PPO B, but inactive toward m-diphenol, p-diphenol and monophenols. PPO A showed affinity toward the trihydroxyphenolic compound. activated the PPO A activity but inhibited PPO B activity, while and activated the PPO B activity, while and activated the PPO B activity but , , and inhibited at 10mM concentration. activated the enzyme action at low concentrations but inhibited at high concentration. Inhibition studies indicated that L-ascorbic acid, L-cysteine and thiourea were most potent. The Km values of PPO A and PPO B for catechol were 20mM and 14.3mM, respectively.
