한국응용과학기술학회지(구 오일 및 응용과학 학회지) Vol. 38 No. 1 (p.99-106)

대장균 베타-갈락토시데이즈를 이용한 Phenylethanol Galactoside 합성 조건의 최적화

Optimal Conditions for Phenylethanol Galactoside Synthesis using Escherichia coli β-Galactosidase
키워드 :
페닐알코올 갈락토사이드,베타-갈락토시데이즈,갈락토오즈 전달반응,최적화 연구,용매 분획,Phenylethanol galactoside,β-Galactosidase,Transgalactosylation,Optimization,Solvent fractionation

목차

요 약
Abstract
1. 서 론
2. 실험방법
   2.1. 시약
   2.2. β-Gal을 생산하는 재조합 대장균
   2.3. PhE-gal 합성 최적화 연구
   2.4. TLC 분석
   2.5. 용매를 이용한 PhE-gal의 분획
3. 결과 및 고찰
   3.1. PhE-gal의 최적 합성 조건
   3.2. 최적 반응조건에서 PhE-gal의 합성
   3.3. 반응물에서 PhE와 PhE-gal의 분획
4. 결 론
References

초록

Phenylethanol (PhE)에서 야기되는 피부 부작용 문제를 극복하기 위한 대안으로 phenylethanol galactoside (PhE-gal)에 대하여 연구하였다. 그 중에서도 대장균 효소 β-galalactosidase (β-gal)을 이용하여 PhE로부터 PhE-gal를 합성하는 반응의 최적 조건에 대하여 조사하였다. 그리고, 용매 분획연구를 수행하여 PhE-gal의 특성도 조사하였다. 반응조건 중에서 반응액의 β-gal 농도, PhE 농도, 반응액의 pH, 그리고 온도에 대하여 조사한 결과, 최적 β-gal의 농도는 0.45 U/ml, 최적 반응물 PhE의 농도는 1.0%, 최적 반응액의 pH는 8.0, 최적 반응온도는 40℃ 였다. 그리고, 최적 반응조건에서 48 시간까지의 반응을 관찰하였는데, 약 81.9 mM의 PhE로부터 약 47.4 mM의 PhE-gal이 합성되었고, PhE로부터 PhE-gal로의 전환수율은 약 57.9% 정도였다. 또한, PhE와 PhE-gal이 포함된 반응물을 용매 EA와 MC로 분획한 결과, 물 층으로 대부분의 PhE-gal이 분획 되었고, 용매 층으로는 PhE가 분획 되었다. 그러나, 물 층으로의 PhE-gal의 분획이 용매 MC를 사용할 때, 더 분명하고 명확하게 나타났으며, 용매 EA를 이용한 분획에서는 명확히 물 층으로 PhE-gal이 분획 되지 않았다. 앞으로, PhE-gal을 화장품에 사용할 수 있는 첨가물(방부제)로 개발하기 위한 후속연구를 계속 진행할 예정이다.
To circumvent the skin problem from phenylethanol (PhE), we have studied on the enzymatic synthesis of phenylethanol galactoside (PhE-gal) as an alternative to PhE. Base on the previous study, we optimized the reaction conditions for PhE-gal synthesis from PhE using E. coli β-galactosidase (β-gal). The optimal amount of β-gal, PhE concentration, pH, and temperature for PhE-gal synthesis were 0.45 U/ml, 1%, 8.0, 40℃, respectively. Under these conditions, about 81.9 mM PhE was converted into about 47.4 mM PhE-gal, in which the conversion yield was about 57.9%. Meanwhile, when the reaction mixture containing PhE and PhE-gal was mixed and fractionated with water-immiscible solvent (EA or MC), it was observed that PhE-gal was distributed in water phase, and PhE was distributed in solvent phase. Additionally, PhE-gal was clearly distributed into water phase when MC was used, but PE-gal was not when EA was used. In the future, we are planning to carried out the continuing study on developing an alternative cosmetic preservative using PhE-gal.