본 연구는 한국 옥수수의 α -amylase의 유전자 클로닝을 주된 목표로 하여 수행되었다. 이를 위하여 여러 식물체의 α -amylase 염기서열로 부터 잘 보존된 부분을 참고로 oligonucleotlde probe 및 PCR primer를 설계, 합성하고, 옥수수의 유묘로부터 전체 RNA를 분리하여 northern blot analysis를 통하여 확인한 다음, 이로부터 첫 번째 가닥 cDNA를 만든 후, 여기서 얻은 RNA : DNA hybrid를 주형으로 한 polymerase chain reaction을 통하여 길이 가 약 500bp되 는 PCR 산물을 얻었다. 이를 클로닝하기 위해 pUC19을 클로닝 백터로 사용하여 재조합 플라스미드인 pZMα ' 를 만들었다. 합성 probe를 이용, Southern blot analysis한 결과, pZMα ' 가 옥수수 mRNA로 부터 증폭된 DNA의 일부분을 갖고 있음을 확인하였으며, 그 길이는 PCR 산물과 같은 500bp가량 되는 것으로 나타났다.

The objective of this study was to clone a partial fragment of α -amylase from Korean maize. We designed and synthesized an oligonucleotide probe and two kinds of PCR primers based on cDNA conserved region of α -amylase sequences from other plants. Total RNA from 3-day-old maize seedling was used as template for 1st strand cDNA synthesis and RNA-DNA hybrid was used as template for polymerase chain reaction(PCR). The product of PCR was about 0.5 kb long and inserted into pUC19. We named this recombinant plasmid as pZMα '. The cloned fragment was certified by Southern blot analysis using labeled synthetic oligonucleotide as probe.

• 金容旭(동국대 농대 농학과) | 김용욱
• 姜信蕙(동국대 농대 농학과) | 강신혜