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pp.298-306
농업적, 환경적, 경제적 및 사회적인 이익으로 농업생명공학에 의한 유전자변형(GM) 작물의 재배는 점차 증가되고 있다.국내에서도 주요 작물을 대상으로 유용 GM작물이 개발되고있으며, 최근 Choline kinase 유전자(OsCK1)가 도입된 병저항성 형질전환벼가 개발되었다. GMO의 안전성과 관련하여, 표시제의 시행 또는 사후 이력추적을 위해서 검정법이 필수적으로 요구되고 있다. 본 연구에서 각 134, 306, 243bp의 PCR증폭산물을 갖는 유전자 특이, 구조 특이 및 이벤트 특이primer를 병저항성(OsCK1) GM벼의 검출에 사용하였고, 다른어떤 작물에서도 반응산물을 나타내지 않았다. 이벤트 특이primer CKRB32-1/02-2를 사용한 정성 duplex PCR을 통해서OsCK1 GM벼에 대한 검출한계(LOD)가 0.05%임이 확인되었다. Real-time PCR을 이용한 정량검정을 위해서 벼 내재유전자 염기와 OsCK1 GM벼의 5’-인접염기를 갖는 pSPSCKR을표준물질로 제조하였고, 10 copies 범위까지 정량검출이 가능한 것으로 나타났다. 따라서 도출된 real-time PCR 방법의 정확성 및 정밀성을 확인하고자 0.5, 1, 3, 5 및 10%로 GM시료에 대하여 정량 분석하였으며, 표준편차 및 상대표준변이가 20% 내로 확인되었다. 이상의 결과로, 개발된 이벤트 특이정성 및 정량 PCR 방법이 OsCK1 GM벼의 사후 GMO 모니터링 및 이력추적에 효과적으로 적용 가능할 것으로 판단된다.
Genetically modified (GM) crops generated by agricultural biotechnology are rapidlyincreasing and cultivated in many countries since they have delivered substantially agronomic, environ-mental, economic, and social benefits to farmers. The disease resistant transgenic rice, which expressescholine kinase gene (OsCK1), was developed. With the potential problems of safety, the detection methodis required as an essential element for the GMO labeling system or GMO traceability of transgeniccrops. In this study, gene, construct and event-specific primer pairs with 134, 306 and 243 bp amplicon,respectively, were used for PCR amplification of disease resistant (OsCK1) GM rice and no amplifiedproduct was observed from any other crops as templates. The limits of detection (LOD) of qualitativeduplex PCR were 0.05% for OsCK1 GM rice using the event-specific primer pair CKRB32-1/02-2. Forquantitative detection using TaqMan real-time PCR system, plasmid pSPSCKR as reference moleculewas constructed, which contains rice endogenous gene sequence and 5’-junction DNA sequence ofOsCK1 GM rice. The absolute detection limit of quantitative PCR method was around 10 copies for oneplasmid molecule pSPSCKR. Thereafter, five mixed transgenic rice containing 0.5, 1, 3, 5 and 10% werequantified to evaluate the accuracy and precision of the established real-time PCR system. The bias andthe relative deviations were all within the range of 20% for OsCK1 GM rice. These results demonstratethat the developed event-specific qualitative and quantitative PCR methods are acceptable for monitor-ing and traceability of GM rice.
