종자 등 유전자원의 국가간 교류는 새로운 병원균을 유입시켜 새로운 병을 일으키고 경제적인 손실을 극대화 시킬수 있는 원인을 제공하기 때문에 국가별로 검역이 더욱 강화되고 있는 실정이다. 그러한 연유로 국가별로는 자국에 존재하지 않은 유사한 병원균을 발견할 경우 종자도입을 막고 있어 불필요한 경제적 손실원인이 되기도 한다. 따라서 이러한 손실을 막기위해 각국에 검역소에서는 병원균의 형태적인 감별보다 더 정확한 검정기술이 시급한 실정이다. 본 연구에서는 다중PCR을 통하여 한번의 PCR 증폭으로 벼종자에 존재하는 벼흰잎마름병을 일으키는 Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo)과 세균성 줄무늬병을 일으키는 Xanthomonas oryzae pv.oryzicola (Xoc) 를 검출하고 이 두병원균을 판별할수 있는, 국제미작연구소가 최적화한 다중PCR 검정방법의 실질적 적용성 여부를 검증하기 위한 연구였다. 그 결과 51개의 비병원성이나 Xoo 또는 Xoc 와 유사하며 벼종자에서 분리된 균들은 다중PCR검정에서 어떤 밴드도 증폭하지 않은 반면, 대조구(positive control)에서는 알맞은 band size의 amplicon들을 증폭해냈다. 따라서 본 연구에 사용된 국제미작연구소에서 최적화된 다중 PCR방법 (IRRI-optimized multiplex PCR)은 벼종자에서 발견할수 있는 Xoo와 Xoc 의 존재 여부 뿐만 아니라
이들과 형태적으로 유사하나 비병원성균으로부터 구분해 내는데 탁월한 방법이었음을 확인할 수 있었다.

One of the major hurdles faced by numerous quarantine centers is to accurately detect and distinguish non-plant pathogenic bacteria from plant pathogenic bacteria based on colony morphology. Yellow colony-forming, non-plant pathogenic bacteria found in rice seeds are often misidentified as Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo) and Xanthomonas oryzae pv. oryzicola (Xoc), causal agents of bacterial leaf blight and bacterial leaf streak, respectively. In this study, 51 non-pathogenic, yellow-colony forming, Xoo and Xoc look-alike bacteria isolated from rice seeds, were used to test the specificity of a multiplex PCR for the detection and differentiation of Xoo and Xoc. Four primer pairs used in this multiplex PCR specific for Xanthomonas oryzae (Xo), Xoo and Xoc were used and all 51 isolates did not amplify any band, indicating that they are not Xo, Xoo or Xoc. These results imply that the multiplex PCR used in this study is robust in detecting and differentiating Xoo and Xoc from non-pathogenic, rice seed-associated, yellow colony-forming bacteria.

MATERIALS AND METHODS
  Source of the Rice Seed Bacterial Isolates
  Isolation and Standardization of Genomic DNA
  BOX-PCR Amplification and Gel Electrophoresis
  Normalization of BOX-PCR Patterns and ClusterAnalysis
  Multiplex PCR Amplification and Gel Electrophoresis
 RESULTS AND DISCUSSION
  DNA Fingerprinting of the Rice Seed-Borne Isolatesusing BOX-PCR
  Multiplex PCR amplification of SHU isolates
 적 요
 REFERENCES

• Da-Young Lee(Institute of Biological Sciences (IBS), University of the Philippines Los Baños, Plant Breeding, Genetics, and Biotechnology Division, International Rice Research Institute, 1099 Metro Manila, Philippines)
• Vera Cruz, C. M.(Plant Breeding, Genetics, and Biotechnology Division, International Rice Research Institute, 1099 Metro Manila, Philippines) Corresponding author