새로운 Bacillus sp.의 숙주균주로서 가능성을 조사하기 위해 알칼리 내성 Bacillus sp. YA-14의 형질전화최적조건을 검토한 결과 다음의 결과를 얻었다. 형질전화배지로서 0.4% MgSO_4, 0.5mM CaCl_2가 함유된 modified SPI배지 (pH 8.0)를 사용하였으며, 말기 대수증식기의 균체가 최적이었다. 또한 competent cell 1ml에 plasmid DNA 0.5g을 첨가하여 40분간 진탕배양하는 것이 형질전환에 가장 좋았으며, 이러한 최적조건하에서 형질전환율은 4.53×10 exp (-6)CFU/ml/㎍ DNA이었다. 전기영동실험을 통하여 transformant 내에 분자량 3.0×10 exp (6) daltons의 pUB110 plasmid DNA가 도입되었음을 확인하였고, 20세대 계대배양 후에도 안정하였다. 이로부터 알카리내성 Bacillus sp. YA-14는 Bacillus속 미생물의 host-vector system에서 새로운 숙주균주로서 이용가능성을 보여 주었다.

To develop the potential use as new host strain for gene cloning, the optimal conditions for transformation of alkali-tolerant Bacillus sp. were examined. The Bacillus sp. YA-14 was cultured to late logarithmic growth phase at 37℃ in modified SPI medium (pH8.0) containing 0.4% MgSO_4, 0.5mM CaCl_2, 1 ml of competent cell was mixed with 0.5㎍ of plasmid DNA and incubated with shaking at 37℃ for 40 min. The transformation frequency under the optimal condition was 4.53×10 exp (-6)CFU/ml/g plasmid DNA. The presence of 3.0×10 exp (6) daltons molecular weight pUB110 plasmid DNA in trasformants was confirmed by electrophresis and stably maintained in the new host.

• 박수진 | Soo Jin Park
• 우미혜 | Mi Hye Woo
• 조여원 | Ryo Won Choue