17β-estradiol (E2)는 난소로부터 방출되는 호르몬으로 가정 및 축산 오폐수에 포함되어 환경으 로 지속적으로 유출된다. E2는 높은 에스트로겐 활성을 가지고 있어 갑각류의 발달과 생식에 영향을 미치는 내분비계교란물질로 알려져 있다. 갑각류의 발달은 탈피호르몬(ecdysteroid)의 신호 전달 과정에 의해 이루어지지만 E2가 소형 갑각류의 탈피호르몬 경로 유전자를 어떻게 조 절하는지에 대한 연구는 매우 미흡하다. 본 연구에서는 기수산 물벼룩 Diaphanosoma celebensis 에서 E2에 대한 급성 독성 시험을 통해 24-h LCx 값을 도출하였고, E2 노출에 따른 탈피호르몬 경로에 관여하는 7개의 유전자(CYP314a1, EcRA, EcRB, USP, ERR, Vtg, VtgR)의 시간별 발현 변 화를 quantitative real time polymerase chain reaction (qRT-PCR)을 이용하여 분석하였다. D. celebensis의 24-h LC50 값은 9.581 mg/l (95% C.I.: 7.697~11.927 mg/l), 24 h-LC10 값은 4.842 mg/l (95% C.I.: 3.683~6.366 mg/l)로 나타났다. CYP314a1, EcRA, USP, VtgR 유전자의 발현이 12시간 또는 24시간에 유의하게 증가하는 양상을 보였다. 이러한 결과는 E2가 D. celebensis의 탈피호 르몬 경로에 관련하는 유전자의 발현을 조절함으로써 탈피와 생식에 영향을 미칠 수 있을 것 임을 시사한다. 본 연구는 소형 갑각류에서 내분비계교란물질이 탈피 경로에 미치는 영향에 대한 분자 기전을 이해하는데 도움이 될 것이다.

17β-estradiol (E2) is a natural hormone secreted by ovary, and continuously discharged from household and livestock wastewater into aquatic environment. Due to its strong estrogenic activity, it has adverse effects on development and reproduction in crustacean as an endocrine disrupting chemical. Although ecdysteroid signaling pathway play a key role in development in crustacean, little information on transcriptional modulation of ecdysteroid-related genes in response to E2 is available in small crustacean. Here, we investigated the acute toxicity of E2 to obtain 24-h LCx values in the brackish water flea Diaphanosoma celebensis. Time-dependent expression patterns of seven ecdysteroid pathway - related genes (CYP314a1, EcRA, EcRB, USP, ERR, Vtg, VtgR) were further examined using quantitative real time reverse transcriptase polymerase chain reaction (qRT-PCR). As results, 24-h LC50 and LC10 values were 9.581 mg/l and 4.842 mg/l, respectively. The mRNA expression of CYP314a1, EcRA, USP, VtgR was significantly up-regulated at 12 or 24 h after exposure to E2. These findings indicate that E2 can affect their molting and reproduction by modulating the expression of ecdysteroid pathway - related in D. celebensis. This study will be useful for better understanding of molecular mode of action of endocrine disrupting chemicals on molting process in small crustacean.

서 론
재료 및 방법
    1. 시험 생물 배양
    2. 시험물질
    3. 물질 노출 시험
    4. Total RNA 추출 및 cDNA 합성
    5. Quantitative real-time reverse transcriptase polymerasechain reaction (qRT-PCR)
    6. 통계분석
결 과
    1. E2 노출에 따른 급성 독성
    2. E2 노출에 따른 유전자 발현 결과
고 찰

• 인소연(상명대학교 융합공과대학 생명공학과) | Soyeon In (Department of Biotechnology, College of Convergence Engineering, Sangmyung University, Seoul 03016, Korea)
• 유제원(상명대학교 융합공과대학 생명공학과) | Jewon Yoo (Department of Biotechnology, College of Convergence Engineering, Sangmyung University, Seoul 03016, Korea)
• 조하영(상명대학교 융합공과대학 생명공학과) | Hayoung Cho (Department of Biotechnology, College of Convergence Engineering, Sangmyung University, Seoul 03016, Korea)
• 이영미(상명대학교 융합공과대학 생명공학과) | Young-Mi Lee (Department of Biotechnology, College of Convergence Engineering, Sangmyung University, Seoul 03016, Korea) Corresponding author