본 연구는 Diode Array Detector (DAD)가 장착된 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 이용하여 산초나무 잎에 함유된 chlorogenic acid와 hesperidin을 동시에 분석할 수 있는 표준 정량법 개발을 확립하고자 실시하였다. 산초나무 잎의 chlorogenic acid와 hesperidin은 MS/MS 분석 및 표준물질과의 유지시간(RT), UV 흡광도 비교를 통해 확인하였고, 산초나무 잎의 지표물질로 선정하였다. 개발한 분석방법은 지표물질을 대상으로 특이성, 정확성, 정밀도, 검출한계, 정량한계, 선형성에 대해 최적화하고 검증하였다. HPLC 분석으로 두 화합물에 대한 검량선은 각각 0.99% 이상의 높은 상관계수(r2)를 보였다. Chlorogenic acid의 전체 회수율은 106.82%이었고, hesperidin의 전체 회수율은 107.37%였다. Chlorogenic acid의 검출한계(LOD)는 0.271μg/ml, Hesperidin의 검출한계(LOD)는 0.005μg/ml였다. Chlorogenic acid의 일간정밀도는 0.102% (RSD%), Hesperidin의 일간정밀도는 1.038% (RSD%)였다. 본 연구에서 개발한 HPLC-DAD 분석방법은 기능성 원료 인정을 위한 분석기준을 충족하였다. 따라서 본 연구에서 확립한 HPLC 분석법은 향후 산초나무 잎에서 유래한 생리활성물질의 대량추출 및 관련제품을 개발할 때 원료 표준화에 적용가능할 것이다.

We attempted to establish a High-performance liquid chromatography (HPLC) analysis method with a Diode Array Detector (DAD) for standard quantification of chlorogenic acid and hesperidin, which are healthy functional food ingredients in leaves of Zanthoxylum schinifolium. The chlorogenic acid and hesperidin from Z. schinifolium leaves were identified by MS/MS analysis, comparing retention time and UV absorbance with authentic compounds. HPLC method was validated by specificity, accuracy, precision, and limit of quantification. The HPLC method showed that calibration curves for each compounds have high linearity with a correlation coefficient (r2) of ＞ 0.99%. The total recovery rate of chlorogenic acid and hesperidin was 106.82% and 107.37%, respectively. The detection limits (LOD) for chlorogenic acid and hesperidin are 0.271㎍/ml and 0.005㎍/ml, respectively. Daily precision of chlorogenic acid was 0.102% (RSD%), and hesperidin was 1.038% (RSD%). All tested parameters met the appropriate ranges designated in the guideline. Therefore, the HPLC analysis method established in this study can be applied and used to standardize health-related functional products or pharmaceutical raw materials and products derived from Z. schinifolium leaves.

서론
재료 및 방법
    1. 분석장비 및 시약
    2. 실험재료
    3. 표준용액 제조 및 HPLC 분석조건
    4. HPLC-DAD 분석법 검증
    5. 검량선
결과 및 고찰
산초나무 잎 추출물의 HPLC분석
감사의 글
References

• 강주영(경상국립대학교 산림자원학과 대학원생) | Ju-Yeong Kang (Graduate student, Department of Forest Resources, School of Agriculture & Life Science, Gyeongsang National University, Jinju, 52828, Korea)
• 노혜령(경상국립대학교 산림자원학과 대학원생) | Hye-Ryeong Noh (Graduate student, Department of Forest Resources, School of Agriculture & Life Science, Gyeongsang National University, Jinju, 52828, Korea)
• 김봉규(경상국립대학교 환경산림과학부 교수) | Bong-Gyu Kim (Professor, Division of Environmental and Forest Science, Gyeongsang National University, Jinju, 52725, Korea) Corresponding author