붉은사철란(Goodyera biflora)은 한국을 포함한 동아시아 지역에 분포하는 상록성 지생란으로 종자 발아율이 낮고 생장 속도가 느려 자연 상태에서의 증식이 제한적이다. 본 연구는 붉은사철란의 기내 증식 체계를 확립하고, 절편 배양 시 싸이토카이닌 처리에 따른 신초 유도 효과를 평가하며, 이를 기반으로 교육용 식물 조직배양 키트의 개발 가능성을 검토하고자 수행되었다. 무균 상태에서 배양한 줄기 마디 절편을 ½ MS 배지에 치상하고, 6-benzylaminopurine (BAP), 2-isopentenyladenine (2iP), zeatin, thidiazuron (TDZ)을 각각 0, 1, 그리고 2 mg L-1 농도로 처리하였다. 그 결과, 1 그리고 2 mg L-1 TDZ 처리구에서 가장 높은 신초 유도율(100%)과 평균 신초 수(1.3 ± 0.1)가 나타났으며, BAP와 zeatin 처리구에서도 유의한 효과가 확인되었다. 반면, 무처리구는 상대적으로 낮은 신초 유도 반응을 보였다. 이러한 결과를 바탕으로, 기내 배양묘, 원예상토, 실습 도구, 매뉴얼 및 QR 코드 연계 동영상 자료를 포함한 교육용 조직배양 키트를 설계하였다. 본 연구는 붉은사철란의 증식 및 보존을 위한 기초자료를 제공함과 동시에, 식물 조직배양 기술의 교육적 활용 가능성을 제시한다.