논문 상세보기
Trichoderma harzianum 유래 β-Mannanase의 정제 및 Picea abies Galactosyl Glucomannomannan 가수분해 올리고당의 중합도별 Bifidobacterium spp.에 대한 생육활성 KCI 등재
Purification of β-Mannanase from Trichoderma harzianum and the Effect of Picea abies Galactosyl Glucomannan Hydrolysates on the Growth of Bifidobacterium spp.
pp.62-68
Sephadex G-100 column chromatography에 의해 Trichoderma harzianum 유래 β-mannanase의 정제를 수행하여 비활성 8.44 units/mL 정제배율 56.27배를 나타내었다. SDS-PAGE에 의한 단일밴드를 확인하였고, 분자량은 52.5 kDa으로 결정되었다. 정제효소에 의해 Picea abies Galactosyl glucomannan을 가수분해하여 activated carbon column chromatography에 의해 당가수분해물을 분리 회수하여 TLC 및 Timell's method에 의해 중합도 6, 8, 9로 결정되었으며, Penicillum purpurogenum유래 정제 β-mannanase와 α-galactosidase를 이용한 enzymatic sequential action에 의해 3 가지 가수분해산물 모두 hetero type galactosyl glucomannooligosaccharides로 확인되었다. B. longum, B. bifidum, B. infantis, B. animalis, B. breve, B. adolessentis, B. auglutum의 생육활성에 대한 중합도 6, 8, 9의 영향을 검토하기 위하여 modified-MRS 배지상에 탄소원으로 중합도 6, 8, 9를 대체하여 생육활성을 비교한 결과 B. longum에서는 D.P. 6 galactosyl glucomannooligosaccharide를 탄소원으로 대체한 경우 표준 MRS배지와 비교하여 14.3배, D.P. 8에서 9.42배, D.P. 9에서 8.0배의 상대활성을 나타내어 가장 우수한 생육활성을 나타내었으며, B. breve의 경우에서도 D.P. 6에서 7.52배, D.P. 8에서 8.19배, D.P. 9에서 6.9배의 높은 활성을 보인 반면, B. bifidum에 대해서는 D.P. 6에서 2.33배, D.P. 8에서 1.33배, D.P. 9에서 2.33배의 낮은 생육활성을 나타내었다.
Beta-mannanase from Trichoderma harzianum was purified by Sephadex G-100 column chromatography. The specific activity of the purified enzyme was 8.44 units/mL protein, representing an 56.27-fold purification of the original crude extract. The final preparation thus obtained showed a single band on SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. Its molecular weight was determined to be 52.5 kDa. Picea abies galactosyl glucomannan was hydrolyzed by the purified β-mannanase, and then the hydrolysates were separated by activated carbon column chromatography. The main hydrolysates were composed of D.P. (degree of polymerization) 6, 8, and 9 galactosyl glucomannooligosaccharides. To investigate the effects of Picea abies galactosyl glucomannanooligosaccharides on in the vitro growth of Bifidobacterium longum, B. bifidum, B. animalis, B. breve, B. infantis, B. adolescentis, and B. auglutum, Bifidobacterium spp. were cultivated individually on a modified-MRS medium containing carbon sources such as D.P. 6, 8, and 9 galactosyl glucomannooligosaccharides. B. longum grew up 14.3-fold and 9.4-fold more effectively after treatment with D.P. 6 and D.P. 8 galactosyl glucomannooligosaccharides compared to those with standard MRS medium. Especially, D.P. 6 was more effective than D.P 9 galactosyl glumannooligosaccharides with regard to the growth of Bifidobacterium spp.
