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Suppression Subtractive Hybridization을 통한 Venturia Nashicola 접종후 ‘93-3-98’에서 유도된 저항성 후보 유전자 선발 KCI 등재
Candidate Gene Selection Induced by ‘93-3-98’ Pear after Inoculation of Venturia Nashicola by Suppression Subtractive Hybridization
pp.1-10
본 연구는 V. nashicola에 의해 발생하는 배 검은별무늬병 에 저항성을 가지는 유전자를 선발하고자 고도 저항성 ‘93-3-98’과 고도 감수성 ‘스위트스킨’에 병 접종후 24시간, 48시간후 엽을 채취하여 suppression subtractive hybridization 을 수행하였다. ESTs 분석결과 ‘93-3-98’에서만 발현된 유전 자는 24H(tester, 24시간 ’93-3-98; driver, 24시간 ‘스위트스킨’)과 48H(tester, 48시간 ’93-3-98; driver, 48시간 ‘스위트 스킨’)에서 각각 9개, 14개였으며 방어 또는 스트레스에 관련 된 유전자의 비율은 각각 40%와 42%였다. 식물의 방어반응에 관련된 PR protein family 유전자로써는 24H에서 pathogenesisrelated protein 1a, major allergen Pyr c 1과 allergen mal d 1, 48H에서는 major allergen Mal d 1.03B 유전자가 특이 적으로 발현되었고 다수의 방어반응에 관련된 유전자들도 확 인되었다. Major allergen Pyr c 1, F-Box/kelch-repeat protein, flavoprotein wrbA, hypothetical protein POPTRDRAFT_ 783792은 고도저항성 ‘Bartlett’과 ‘93-3-98’에서만 높게 발 현 되었으며 중도저항성 ‘감천배’와 감수성 ‘원황’, 고도 감수 성 ‘신고’와 ‘스위트스킨’에서는 낮게 발현되어 검은별무늬병 저항성 연관 유전자로 확인되었다.
Suppression subtractive hybridization was carried out to identify resistant genes against to pear scab caused by Venturia nashicola using leaves harvested at 24 and 48 hours after inoculation into ’93-3-98’ (highly resistant) and ‘Sweat Skin’ (highly susceptible). As a result of the ESTs analysis, nine and 14 unique genes were expressed on 24H (tester, mRNA at 24hr after inoculation of ’93-3-98’; driver, one of ‘Sweet Skin’) and 48H (tester, mRNA at 48hr after inoculation of ’93-3-98’; driver, one of ‘Sweet Skin’), respectively and genes related to defense or stress response were accounted for 40% (24H) and 42% (48H). Differential expressed genes classifying into PR protein family were pathogenesis-related protein 1a, major allergen Pyr c1 and allergen mal d 1 at 24H and major allergen Mal d 1.03B at 48H, respectively. Major allergen Pyr c1, F-Box/kelch-repeat protein, Flavoprotein wrbA, and hypothetical protein POPTRDRAFT_783792 are expected to closely connecting to scab resistance of pear following strongly expressed in highly resistant cv. ‘Bartlett’ and ‘93-3-98’ compared with moderately susceptible cv. ‘Gamcheonbae’, susceptible cv. ‘Wonhwang’, and highly susceptible cv. ‘Niitaka’ and ‘Sweat skin’.
재료 및 방법
식물 재료
분생포자 인공접종 및 시료채취
RNA 분리 및 cDNA 합성
SSH 라이브러리 제작 및 Mirror Orientation Selection (MOS)
cDNA 염기서열 분석
Real-time (RT) PCR 분석
결과 및 고찰
Subtracted cDNA 라이브러리 제작
차등 발현 유전자의 염기서열 및 기능 분석
Real-time PCR을 이용한 선발된 유전자 발현검정
선발된 ESTs의 품종간 발현 비교분석
초 록
사 사
REFERENCES
