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pp.175-186
콘택트렌즈 관리용액의 보존제 성분 중 Benzalkonium Chloride<BAC) 가 L929세포 주에 세포독성과 세포 자연사룰 유도하는지 조사하고자 시행하였다. 생쥐 섬유모세포 인 L929 cell line을 배양하여 양성 대조군으로 0.01% H20~， 음성 대조군으로 Media 를 처리하였으며 세포독성은 BAC룰 배양세포에 시간별 (24， 때hr) ， 농도별(0.0001 ， 0.001, 0.005, 0.01, 0.05, 0.1%) 로 처리하여 대조군과 처리꾼올 비교하여 세포독성 농 도를 산출하였다. Hematoxylin-Eosin Staining후 광학현미 경으로 형태적 변화를 관 찰하고， MTT Assay와 LDH Activity 로 검정하였으며， MTT 정량과 LDH(Lactate Dehydrogenase) 활성도로 세포독성 농도룹 산출하였다. MTT 정량결과， 세포 독성이 0.0001% 에서는 8%, 0.005% 에서는 30%, 0.001%에서논 65%5'_ 농도 의존적으로 독성 이 나따났으며， 0.001% 에서 LDH 유출정도가 대조꾼과 비교하여 차이를 나타내지 않 았으나， 0.01% 의 농도에서 2.9 배， 0.1%의 농도에서 대조군에 비해 3.35배정도 높은 LDH 의 유출율을 보였다. 세포자연사 (Apoptosis) 륜 관찰하기 위 해 Hoechst33342와 DNA Laddering과 Flow cytometry를 실시한 결과， 0.1%에서쓴 세포괴사 (necrosis) 에 의해， 0.001%-0.01%에서는 세포자연사(apoptosis) 에 의한다는 것을 알 수 있었다.
The cytotoxicity and induction of apoptosis by Benzalkonium chloride<BAC) in preservatives of contact lens care solution were examined on cultured L929 fibroblast cells. The cytotoxicity of cells treated with BAC for 24 or 48 hours at various concentrations<O.OOOl, O.아H ， O.아)5， 0.01, 0.05, 0.1%), was measured by Hematoxylin-Eosin staining for morphological changes, MTT assay , and LDH activity assay for cell viability. lnduction of apoptosìs by BAC was detected by Hoechst 33342 staining and DNA laddering. This result shows that BAC ìnduced apoptosis at lower concentrationsW.OOl%, 0.01%) whereas necrosis at high concentration<O.l%). This study suggests that BAC is toxic to cells, so we need to develop non-toxic preservatives or decrease the cytotoxicity of BAC containing eye• drops.
