안토시아닌(Anthocyanin)은 플라보노이드계 화합물의 한 부류로 항산화, 항암 및 항궤양, 항당뇨, 중금속해독, 시력보호, 콜레스테를 저하 등의 다양한 생리활성을 가지는 것으로 보고되어 있다. 죽상경화과정은 염증성 사이토카인의 분비 또는 혈관손상으로 인한 백혈구의 부착과 이동을 통해 시작된다. 본 연구는 이러한 죽상경화의 초기과정에서 안토시아닌 혼합물 중 single compound인 delphinidin chloride (DC) 인간혈관 내피세포

당뇨망막병증은 서구에서 성인들의 실명을 일으키는 원인이다. 당뇨병이 있을 때 고혈당증은 여러 세포 형태에서 세포자연사를 유도하지만 그 기작은 명확하게 밝혀지지 않았다. 본 연구의 목적은 인간망막 내피세포에서 고혈당 포도당이 세포자연사에 미치는 영향에 대하여 알아보았다. 망막 내피세포는 5, 25, 50 mM 포도당이 포함된 IMDM배지에서 37℃, 5% CO2조정된 항온기에서 24, 36, 48시간 동안 배양하였다. 여러 농도의

Naringenin은 flavonoid구조의 감귤류 과피에 다량 함유되어 있으며 항암 및 항산화 등의 다양한 생리활성을 가지는 것으로 보고되었다. 이에 본 연구에서는 HT-1080 섬유육종세포의 전이에 대한 영향을 조사하였다. 먼저 Naringenin이 암세포의 이동에 미치는 영향을 알아보기 위해 migrationassay를 한 결과, Naringenin이 암세포의 이동을 농도 의존적으로 억제시켰다. 암의 전이에 있어서 매우 중요한 역할을 하는 단백질분

전라남도에 위치한 무안만 연안습지를 4개 영역(동암, 구로, 복룡 및 완산 갯벌)의 갯벌로 구분하여 수조류의 서식지 이용, 갯벌의 가치 및 등급평가를 위해 2007년 2월부터 10월까지 계절별로 4회에 걸쳐 이 지역에 도래하는 수조류를 조사하였다. 논병아리류 2종, 백로류 7종, 수면성 오리류 7종, 잠수성 오리류 6종, 섭금류 20종, 갈매기 3종 및 기타 9종 등을 포함하여 54종 15,755개체의 수조류가 관찰되었으며, 9,291개체가 관찰된 섭금류가 우점 분류군으로 나타났다. 이들 분류군에서 갈매기류와 섭금류는 동암갯벌을 이용하는 비율이 높았으며, 구로갯벌을 이용하는 분류군은 주로 수면성 및 잠수성 오리류와 논병아리류로 나타났다. 종과 개체수를 고려한 UPGMA 군집분석 결과, 동암갯벌과 복룡갯벌이 밀접한 유사성을 보였으며 구로갯벌과 왕산갯벌이 유사하게 나타났다. 수조류의 다양도지수, 풍부도지수, 우점도지수 등의 생태적 지수, 법적보호종 및 최대 개체수 등을 기준으로 해서 갯벌등급을 살펴보았을 때, 복룡갯벌의 가치 및 중요도 순위가 다른 3개 갯벌보다 높게 나타났다. 이와 같이 수조류에 의한 갯벌 등급화는 중요한 갯벌지역의 판단 및 지정, 그에 따른 효율적인 보전과 관리에 있어서 객관적인 자료를 제시할 순 있을 것으로 판단된다.

In August 2003, the water quality of offshore waters along the Incheon coast of Korea was evaluated by biological evaluation using gametes, embryos and early development systems of a starfish species (Asterina pectinifera). As the result of performing bio

현재 안과에서 점안마취제로 Alcaine싼Proparacaine Hydrochloride 0.5%) 이 주로 많이 사용되고 었다. 점안 마취제는 안압 측정， 이물 제거， 전방각경 검사， 봉합， 결막 과 각막 수술 둥 진단 및 치료를 시행하는데 이용되고 있다. 점안 마취제를 눈에 정 안했을 때 각막 상피 에 미 치 는 영 향올 알아보고자 Alcaine@ 0.5%(Proparacaine Hydrochloride 0.5% + Benzalkonium Chloride 0.01%)을 사량의 눈에 직접 점안하여 챔안 후 각막 상피세포에 미치는 영향옳 Rose Bengal로 염색하여 Slit lamp로 조사 하였다. 또한 결막세포 (done 1- 5c -4)를 배양하여 점안 마취제가 세포에 미치는 영향 얄아보고자 Alcaine@과 Proparacaine Hydrochloride를 각각 0.125-0.5% 농도로 15분 처 리 하여 12시 간과 24 시 간 후에 회 복효과를 조사하기 위 해 MTT assay와 LDH assay 방법을 사용하여 세포 증식 저해 정도첼 측정하였다. 형태적 변화를 조사하기 위해 Hematoxylin-eosin 염색 후 광화현미정으로 관찰하고， 세포자연사 (Apoptosis) 를 관찰하기 위해 Flow cytometry를 실시하였다. Alcaine@을 눈에 점안하면 15분 후에 각막 상피가 괴사되고， 결막의 손상올 관찰 할 수 있었으며， MTT assay 결과， 세포독성판 Alcaine@처리군(0.125， 0.25, 0.5%) 에 서는 세포증식 저해가 70% 률 넘는 것으로 나타났으며， Proparacaine hydrochloride 0.1 25% 는 대조군과 유사하고， 0.25%에서는 많5% ， 0.5% 에서는 65%로 농도 의존쩍으 화 세포 증식저해를 나타냈다. LDH 유출량은: Alcaine@ 0.25% 처리군에서는 1.8배， 0.5%에서는 4.1 배의 유출량이 나타났으며， Proparacaine hydrochloride를 처리한 군에 서는 대조군과 유사하게 나타났다. 세포자연사를 관찰하기 위해 Flow cytometry를 설사한 결과 AIcaine@ 0.125% 처리군과 Proparacaine hydrochloride 처리군에서는 세 포자연사 (Apoptosis) 에 의해， 고농도 Alcaineæ; 처리군(0.25， 0.5%) 에서는 세포괴사 (Necrosis)를 유도한 것으로 나타나 점안 마취제의 사용에 유의해야 할 것으로 사료 된다.

생태계를 평가하기 위한 평가법으로 주로 사용되는 이화학적 측정 평가법은 객관적인 측정치를 제시하는데는 용이하다. 그러나 단지 측정치의 단순한 평균이나 최고치만으로는 타 인자와의 복합 효과 또는 지속 시간에 의한 가중 효과 때문에 실상을 나타낼 수 없는 경우가 많다. 이에 따라 이화학적 측정치들을 객관적으로 종합하여 생태계의 상태를 파악할 필요성이 보다 중요하다. 즉 key factor나 trigger factor와 같은 생물체의 내성과 관련이 있는 인자

콘돼트렌즈 관리 용액의 세포독성올 검사하기 위한 방법이 여러 가지 이용되고 았 으나， 직접 소프트콘택트렌즈에 홉수된 관리용액의 독성을 조사하기는 어려운 실정이 었다. 따라서 본 연구에서는 관리용액이 홉수원 렌즈 위에 세포를 직접 배양하여 용 출된 관리용액으로 언한 세포독성을 평가하고자 시행하였다. 여러 가지 콘돼트헨즈 관련 용액 중 보존제 성분으로 가장 많이 사용되고 있쓴 Benzalkonium chloride (BAC)와 Multipurpose solutions(MPS) 빛 AOSept에 Etafilcon A(FDA공인 W 그룹， Acuvue) 재질인 소프트콘태트렌즈콜 4시간 동안 담구어 용액이 홉수되도록 한 후 배양 결막세포 (clone 1- 5c -4) 룹 콘택트렌즈 위에 직접 배양하여 2 시간 통안 용출액에 의한 세포독성을 조사하였다. 또한 같은 용액에 세포를 2시간 직접 배양하여 독성 정 도를 비교하였으며， Monolayer cell 에 같은 용액올 15분 직접 처리하여 독성올 비교 하였다. 그리고 계대 배양 시 25% 농도로 같은 용액을 세포 혼탁액에 혼합하여 부착 률과 증식률을 조사하였다. 세포독성은 세포를 계수하는 방볍과 시l 포활성올 조사하는 방법올 이용하였으며 형광염색을 통해 세포 생존용플 비교하였다. 콘택트렌즈 용출액에 의한 세포 독성은 MPS는 거의 독성이 없었으며， BAC (0,00 1%-0，α)5%) 처리군에서는 40% 의 세포 증식저해가 였으벼. BAC 0， 01% 와 AOSept (0α)()5 -0.oo1%)에서는 70%이상의 증삭저해를 나타냈다. 또한 세포를 실험 용액에 직 접 2시간 배양하여 세포뜰 계수한 결과 대조군인 식염수에 비교하변 MPS 는 40% 이상， BAC 0.001%는 70% 이상， AOSept는 80% 이상 세포 뚱식 서해가 있으며， BAC (O.α)5， 0.01%) 에서는 세포의 생존율이 없는 것으로 사료된다. MTT assay 와 LDH assay를 한 결과 세포룰 계수 하는 결과와 유사하게 나타났다. 형광염색을 이용한 생존율 조사 결 과， BAC 0.01% 처리군에서는 세포가 사멸하는 것을 확인할 수 았었다.

본 연구는 안과에서 주로 사용되는 생체 염색시약으로 Fluorescein, Rose Bengal, Erythrosin B, Lissanúne Green B 올 인간의 결박세포인 Clone1-5c-4 cell line올 배 양하여 cytotoxicity릎 조사하기 위하여 1%, 0.25% 의 농도보 5분， 15분 동안 처리하 여 MTT assay, SRB assay를 실시하였다. 각 염색사약의 세포독성올 바교 검정한 결과， Rose Bengal과 Lissamine Green B에서 서I 포 증식 저해용이 30% 이상 나타났 고， 회복효과를 보기 위하여 시약 제거 후 1 일 배양하여 Ml‘T. SRB assay를 실시한 결과는 Rose Bengal에서 거의 비슷한 수준이었으나 Lissamine Green B 에서는 더 증 가하였다. 또한 5, 15분 동안 시약처리 직 후 subculture활 실시한 후 세포의 부착과 중식정도를 관찰하였고， 회복효과를 보기 위해 3 잊 후에 세포의 형태를 관찰한 결과， Rose Bengal은 거의 차이 가 없었으나 Fluorescein 에서는 회복효과를 보였다.0.25% trypsin을 처리하여 세포에 영향을 주어 세포의 인위적인 손상올 형태학적으로 비교 한 염색상 세포 저해 정도는 Rose Bengal 이 가장 높-았고， Fluorescein 이 제일 낮았 다. 이러한 결과로 볼 때 일부 생체 염색시약이 인간의 결막세포인 Clone1•5c -4 세 포증식을 저해하는 것으로 사료된다.

콘태트렌즈 다목적 용액 내에는 보존제， 소독제， 세척제， 윤활제 둥이 포함되어 있 으며 콘택트렌즈 표면에 침착하는 단백질올 제거하기 위해 물질의 계변에 홉착되어 그 표면 장력을 현저하게 저하샤키고 수액 내에 열정 농도이상으로 폰재할 때 미젤 구조를 형성하여 정상적으로 용해되지 않는 물질을 미첼구조내에서 용해시키는 특성 올 갖판 계면활성제를 사용한다. 본 연구논 계면활성제의 세척 효과와 세포독성 판계를 연구하고자 소프트 콘택트렌즈 의 세척용으로 사용되는 여러 가지 계변활성제 (Tyloxapol， Tromethamine, Poloxamine, Poloxamer40η) 가 생쥐의 섬유모세포인 L• 929 cell line에 미 치찬 저해 효과를 알아보 았다. 계면활성제를 농도별 <0,001-10%, w/w) 토 처리한 후 시간별 (24h， 48h)로 MTT 와 LDH 분석 방법올 사용하여 측정하였다. 단백칠 제거효과는 친수성 콘택트 렌즈 FDA공인 W 그룹의 렌즈 etafilcon A (함수융 58%) 를 인공누액에 65시간 담근 후 꺼내어 계면활성제의 농도와 처리시간이2， 24h) 에 따라 단백절 제거효과를 조사하였 는데 단백질이 침착된 친수성 콘택트렌즈가 각각의 계면활성제에 의해 제거된 단백질 량의 정량은 Bradford 정량 방법올 이용하여 측정하였다. 세포증식 저해효과는 24시간 처리결과 Poloxamine의 ;성우 0.1%이하에서. Poloxamer407은 5% 이하에서. Tyloxapol 은 0.1%이하에서， Tromethamine은 1% 이하의 농도에서는 세포독성윷 나타내지 않았 으나， Poloxamine의 경우 1% 에서， poloxamer407은 7% 에서， Tyloxapol은 1% 에서， Tromethamine은 1.5%에서 세포독성을 나타내었다. 세포소지판을 중심으로 평가된 MTT 분석 방법은 LDH 유리 분석 방법보다 민감하게 나타났다. 계면활성제의 세포독성이 없는 농도에서 단백질 제거효과눈 Tylox따Xll > Poloxamer-때7> Tromethamine > Poloxamine 순으로 콘택트렌즈에 침착된 단백질 제거량이 높았으며， 농도 의존적으로 효과가 높은 것으로 조사되었다. 이러한 결파똘 통해 미래의 계면활 성제는 세포독성이 낮고 세척효과가 뛰어나야 할 것으로 사료된다.

콘택트렌즈 관리용액의 보존제 성분 중 Benzalkonium Chloride<BAC) 가 L929세포 주에 세포독성과 세포 자연사룰 유도하는지 조사하고자 시행하였다. 생쥐 섬유모세포 인 L929 cell line을 배양하여 양성 대조군으로 0.01% H20~， 음성 대조군으로 Media 를 처리하였으며 세포독성은 BAC룰 배양세포에 시간별 (24， 때hr) ， 농도별(0.0001 ， 0.001, 0.005, 0.01, 0.05, 0.1%) 로 처리하여 대조군과 처리꾼올 비교하여 세포독성 농 도를 산출하였다. Hematoxylin-Eosin Staining후 광학현미 경으로 형태적 변화를 관 찰하고， MTT Assay와 LDH Activity 로 검정하였으며， MTT 정량과 LDH(Lactate Dehydrogenase) 활성도로 세포독성 농도룹 산출하였다. MTT 정량결과， 세포 독성이 0.0001% 에서는 8%, 0.005% 에서는 30%, 0.001%에서논 65%5'_ 농도 의존적으로 독성 이 나따났으며， 0.001% 에서 LDH 유출정도가 대조꾼과 비교하여 차이를 나타내지 않 았으나， 0.01% 의 농도에서 2.9 배， 0.1%의 농도에서 대조군에 비해 3.35배정도 높은 LDH 의 유출율을 보였다. 세포자연사 (Apoptosis) 륜 관찰하기 위 해 Hoechst33342와 DNA Laddering과 Flow cytometry를 실시한 결과， 0.1%에서쓴 세포괴사 (necrosis) 에 의해， 0.001%-0.01%에서는 세포자연사(apoptosis) 에 의한다는 것을 알 수 있었다.

콘택트렌즈 소독제로 쓰이는 H2Û2올 중화용 백긁 판올 이용하여 수회 반복 중화한 용액이 배양 각막상피세포의 Apoptosis룰 유도하는지 여부룹 조사하기 위해 본 연구 를 시행하였다 3% H202(AOSept)를 6시간 동안 9회에 걸쳐 통일 백금 판으로 풍화 한 용액을 배양 각막 상피세포에 배양액의 25% 농도로 1--2 띤 동안 처리하여 처음 중화한 용액과 9번째 중화한 용액음 중심으로 세포독성과 Apoptosis를 조사하였다. 세포똑성은 MTT assay를 이용하였으며 lnverted pþase-contrast microscope로 형 태 를 확얀하고 Toluiclin blue 염 색으로 Apoptotic Cell올 확언하였으며 Hoechst 33342 로 형광 염색하여 Apoptotic Index를 조사하였다. 또한 Annexin V - FITC깨ropiclium Iodide(PDstaíning, DePsipher TM assay. M30 CytoDEATH. TUNEL (TdT-dUTP terminal nick-end labelling) assay를 통해 형태적인 변화될 확인하였다. 생화학적 변 화인 DNA Fragmentation은 Agarose gel electrophoresis룹 사 행하였으며 Fas Antigen 의 발현을 조사하기 위하여‘ Irnmunocytochemistry와 Westem blotting올 시 행하 였다. H20z의 독성올 약화시키기 위해 사용되는 백금 판을 수회 재사용하여 중화한 용액닫 25% 농도로 1-2 일간 처리하였을 때 각막 상피세포의 Apoptosis가 유도되는 것 이 형 광 염 색， DNA ladder. Irnmunocytochemistry. Westem blotting등의 방법 으로 확인되었다. 따라서 중화된 H써2룹 25% 농도로 1-2 일 동안 처리한 결과， 세포 증식 저해와 Apoptosis 가 유도되므로 중화용 백금 판의 이용 횟수활 세한하거나 중화시간 을 증가시킬 필요가 있는 것으로 사료된다. 또한 완전하게 중화된 소독용 H202는 더 이상 소독효파가 없으므로 장시간 동안 렌즈의 소쪽보관 용액으로 사용해서는 안 된 다는 교육이 반드시 펼요할 것으로 판단된다.

본 연구는 콘택트렌즈의 세척용으로 사용되는 여러 가지 계면활성제중 널리 사용 되고 있는 Tyloxapol과 Tromethamine의 단백질 게거 효과와 L-929세포에 미치는 저해효과를 서로 비교하기 위하기 위해 먼저 렌즈를 인공누액에 65시간 담근 후 계 면활성제의 처리시간에 따라 단백질 제거효과를 UV Photo-spectrometer를 이용하여 측정하였다. 또한 계면활성제의 L-929세포에 미치는 저해효과는 MTT assay, LDH assay 방법으로 측정하였다. 연구 결과 계면활성제가 L-929세포에 미치는 저해효과는 통일 농도에서 Tyloxapol 이 Tromethamine보다 높은 것으로 나타냈으며， 세포 수도 농도 의폰적으로 감 소하였다. 독성의 차이는 LDH assay 보다 MTT assay가 더 민감도를 보였다. 침착 된 단백질에 대한 세척효과는 동일농도에서 Tyloxapol 이 Tromethamine보다 뛰어났 다. 단백질 제거효과는 농도 의존적으로 효과가 높은 것으로 조사되었으며， Tyloxapol과 Tromethamine의 세포증식 저해를 나타내는 최저농도에서 Tyloxapol 이 Tromethamine보다 단백칠 제거효과는 월둥히 뛰어났다.

본 연구는 시중에 유통되고 있는 콘택트렌즈 단백질 제거제로 4개회사의 제품(국 내 2종， 국외 2종)을 선별한 후， 세포 독성과 단백질 제거 효능의 관계를 조사하였다. 단백질 제거제가 녹아 있는 식염수에 12시간 동안 담근 콘택트렌즈를 L929 세포주 (생쥐섬유모세포주) 위에 직접 올려놓아 용출된 용액으로 인한 세포 생사를 Trypan blue 염색올 통해 판별하는 USP Elution Assay 법을 사용하였다. 그리고 단백질 제거 제를 직접 배양세포에 15분간 처리하여 MTT Assay 인 세포 독성을 검정하였다. 또 한 단백질 제거제 효능을 조사하기 위해 FDA에서 분류한 IV group lens를 조성한 인공누액에서 단백질을 홉착시킨 Bradfod Assay 법을 통해 측정 비교하였다. MTT 결과는 1 종류의 제품에서 40% ， 3종류의 제품은 70% 이상의 세포증식 저해율이 나타 났다. USP Elution Assay에서는 동물성 단백질 제거제 Pancreatin 이 주성분인 1 종 류의 제품은 1 등급， 나머지 3종류는 O등급을 나타내였다. 또한 Bradford Assay 방법 을 이용하여 단백질 제거제의 효능을 겁정하였는데， Subtilisin A가 주성분인 A사 8 시간， Subtilisn 이 주성분인 B사 5분， Pancreatin 이 주성분인 C사 6 시간， Papain 이 주 성분언 D사는 8시간이 지난 후에 단백질 제거제 효능이 최대 효과가 나타났다.

L929 세포를 배양하여 현재 시중에서 유통되고 있는 8 개 회사의 Alcon Optiso와， Ciba SOLO care hard, Allergan Total Care, Boston Simplicity, B&L Wetting and Soaking Solution, Menicon pharma 02 Care, 새 한 Aquas - multi, 중외 제 약 앵 피 에스액 둥 8종류의 가스투과성 경성 콘택트렌즈를 위한 MPS를 25% 농도로 배양세 포에 처리하고 48시간 동안 배양한 후 MTT, SRB assay 그리고 NR assay로 세포 수준의 독성을 검정하였다. L929세포에 MPS를 처리하여 MTT assay한 결과 4종류 의 MPS 에서 세포 중식 저해율이 30% 이상으로 나타났고， 3종류의 MPS는 대조군과 유사하였다. SRB assay의 경우는 2종류를 제외한 모든 제품에서 30% 이하의 세포 중식 저해율이 나타났다. NR assay는 6종류의 MPS 에서 세포 증식 저해용이 30% 이상으로 나타났고 2종류의 MPS는 대조군과 유사하였다. 이러한 결과로 볼 때 일부 제품의 RGP 렌즈용 MPS가 L929세포 중식올 저해하는 것으로 사료된다.

본 연구는 시중에서 유통되는 눈물분비 부족 및 접액부족으로 인한 안구건조증상 의 해소와 하드 콘택트렌즈의 윤활제로서 사용되는 인공누액(Artificial Tears) 10종 류와 렌즈 세척 후 행꿈과 습용 및 안구 세척에 이용되는 둥 가장 전반적으로 많이 사용되고 있는 점안제인 생리식염수(S머ine) 7종류를 배양 생쥐섬유모세포(L929 cell)에 25% 농도로 처리하고 48시간 동안 배양한 후 ELISA Reader(multi well microplate reader)를 사용해 MTT와 SRB Assay로 세포증식 저해 정도률 검정하였다. MTT Assay 결과， 인공누액의 경우 10종류 중 6종류 제품에서， 40% 이상의 세포증식 저해 가 나타났으며 식염수에서는 7종류 중 3종류에서 40% 이상의 세포중식 저해를 나타 냈다. SRB Assay결과， 인공누액 5종류에서 60% 정도의 세포중식의 저해와 식염수 3 종류에서 40% 이상의 세포중식 저해가 나타났다. 이러한 결과로 볼 때 일부 제품의 인공누액과 식염수에서 L929 세포중식올 저해하 는 것으로 사료된다.

소프트 콘돼트렌즈의 재질파 보관용액에 의한 세포독성과 홉수 스펙트럼에 대한 홉광도를 비교하여 상호간에 관련이 있는지 여부를 조사하기 위해 본 연구롤 시행하 였다.7 개 제품의 각 제품별로 16 개 렌즈를 5ml의 증류수가 들어있는 병에 넣어 12 1 "C에서 1 시간 동안 용출하였다. 전에 연구한 배양세포 증식저해 시험에 대한 결과를 토대로 용출액과 보관용액에 대한 홉광도를 UV Spectrophotorne따를 이용하여 220- 350nm에서 측정하였다. 고함수 이온성 재질인 2 개 제품의 용출액과 보관용액의 홉 광도는 220-240nm에서 기준값보다 높게 나왔으나 241-350nm에서는 모두 훨씬 낮은 값올 나타내어 투명한 것으로 판명되었다. 이러한 결과로 용출액과 보관용액의 세포독성과 홉광도와는 거의 관련이 없는 것으로 판단된다.