방선균은 토양 속에 다양하게 존재하는 미생물의 일종으로 그람 양성 진정세균으로 이차 대사산물을 생산하는 시기와 포자 착생이 시작되는 세포분화의 시기가 밀접한 관련이 있다. S. griseus는 streptomycin을 비롯한 다양한 종류의 endopeptidase 및 exopeptidase들을 생산한다. 방선균에서의 protease 생산은 많은 경우에 이차대사산물이 형성되거나 형태분화가 유도되는 시기에 동시에 시작된다는 점에서 protease가 이차대사물질 생산 및 세포분화에 일정한 기능을 수행할 것이라는 점을 시사하고 있다. 본 연구에서는 S. griseus IFO 13350에서 클로닝한 SGPE protease가 각 strain에서 형태학적으로나 생리적으로 어떠한 gene dosage 효과를 미치는지 조사하는 것이었다. sprD 유전자가 S. lividans를 숙주로 사용한 시스템에서 대량발현이 성공적으로 되는 것을 확인한 후, 본 유전자를 클로닝한 S. griseus IFOI3350 균주와 이의 A-factor 결손주인 S. griseus HHI에 형질전환하였다. S. griseus HHI과 S. griseus IFO13350 에서는 protease activity가 벡터만 도입된 대조군과 sprD 유전자가 들어간 형질전환체에서 큰 차이를 보이지 않았다. 또한 S. griseus IFO13350 및 HHI 모두에서 생리학적·형태학적 분화의 차이를 발견하지 못하였다. Chymotrypsin 계열의 protease를 암호화하는 유전자만이 S.griseus에서 발현이 repression 된다는 사실을 본 연구 결과를 통하여 알게 되었다. 이를 바탕으로 sprD 유전자와 동일계열의 chymotrypsin 계열의 유전자들이 공통적으로 S. griseus 에서 repression되는 일반적인 기전이 있을 것으로 판단, chymotrypsin 계열 유전자들의 promoter 부분의 염기 상동성을 조사하였다. 번역개시부위 바로 상부 유전자부터 상동성을 조사한 결과 적어도 상당부분의 염기배열이 잘 보존되는 지역이 존재함을 알게 되었다. 향후 이들 발현 기구의 조절기구를 연구함으로서 protease의 기능을 밝히는데 좋은 단서를 제공할 것으로 판단된다.

Sreptomyces shows a eukaryotic characteristic that vegetative cell can grow into mycelial form and has morphological and physiological differentiation at a certain period during its life cycle. Streptomyces has been used for the production of many biologically active compounds, such as antibiotics and pronase. Production of second metabolites and differentiation of the vegetative cell share the certain period of its life cycle. therefore, second metabolites may effect the differentiation of the vegetative cell. One of the microbial hormone, called A-factor, regulates the production of second metabolites, sporulation and differentiation of the cells. Streptomyces griseus produces streptomycin as well as many different kinds of proteinase. As mentioned, period or proteinases production overlaps with period of differentiation of the vegetative cells. Protease may play a important role for the differentiation of the cells. In this paper, function of the SGPD gene cloned from S. griseus IFO 13350 tested whether it affects for the differentiation of A-factor mutated S. griseus HHI and S. griseus IFO 13350. pWHM3 and pWHM3-sprD plasmid was transformed into S. griseus HHI and S. griseus IFO 13350. Chymotrypsin activity of the cultured medium of the transformants with pWHM3- sprD plasmid didn`t show any change with that of the transformants with plasmid only. The transformants with pWHM3-sprD plasmid didn`t show the increase of the production of actinorhodin as well as morphological change in S. griseus IFO 13350 and HHI, as well. The promoter sequences of the SGPA and SGPB gene which encode chymotrypsin-like protease, were compared with that of SGPD gene. Regulatory mechanism of gene expression of proteinase genes will be studied for the development of high production system for protease as well as the function of the proteases.

• 윤미숙 | Mi Suk Yun
• 이정훈 | Jeong Hoon Lee