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식품에서의 LAMP 시험법을 이용한 bceT 유전자 함유 장독소 바실러스균 검출 KCI 등재
Detection of Enterotoxigenic Bacillus cereus and B. thuringiensis carring BceT Gene using Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP) in Foods
pp.517-524
Loop-mediated isothermal amplification (LAMP)는 PCR 보다 빠르고 간편한 새로운 분자 검출 방법이다. 본 연구 에서는 식품에서 오염된 Bacillus cereus 그룹 중 식중독 을 유발할 수 있는 bceT 유전자를 가진 B. cereus와 B. thuringiensis를 신속하게 검출하기 위한 LAMP 방법을 개 발하고 평가하였다. LAMP 방법은 외부 프라이머와 내부 프라이머를 포함한 4개의 프라이머를 사용하기 때문에 다 른 검사 방법보다 특이성이 높다. 시험결과, LAMP의 특 이도는 100%였으며, 검출한계는 10(CFU/반응)이었다. 이 분석은 다양한 식품에서 인위적으로 접종하여 장독소 유 전자 함유 B. cereus 그룹을 분석하는 데 사용하였다. 일 반가공식품 뿐아니라 즉석조리식품 중 전투식량, 냉동볶 음밥 등 포함한 20개의 모든 식품에서 적용하여 검출하였다. 결론적으로, 장독소 유전자 함유 B. cereus 와 B. thuringiensis 특이적 LAMP는 소상공인 제조업체뿐만 아 니라 식품 관련 기관 등에서도 진단방법으로 유용하게 사 용될 수 있을 것으로 판단된다.
Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) is a novel molecular detection method that is faster and simpler than polymerase chain reaction (PCR). A LAMP method for rapidly detecting enterotoxigenic Bacillus cereus and B. thuringiensis in food was developed and evaluated. Four primers, including outer and inner primers, were specifically designed to recognize the bceT gene of B. cereus and B. thuringiensis. The specificity and limit of detection (LOD) of the LAMP assay were 100% and 10 CFU/reaction, respectively. The developed assay was used to analyze enterotoxigenic (bceT) B. cereus strains in various artificially inoculated food samples. All 20 foods, including Sunsik and combat rations, contaminated with enterotoxigenic B. cereus strains were identified as positive. In conclusion, the proposed enterotoxigenic B. cereus-and B. thuringiensis-specific LAMP assays provide robust, innovative, and powerful molecular diagnostic methods that can be used in food safety testing services and by public health authorities.
Materials and Methods
특이성 및 검출한계 확인을 위한 균주 및 DNA 추출
Primer 디자인 및 LAMP, PCR, Real-time PCR 조건
시료 준비 및 미생물 접종
Results and Discussion
LAMP 특이성 분석
LAMP 방법의 검출한계 분석
인위적으로 접종시킨 식품에서의 LAMP 분석
Acknowledgement
국문요약
Conflict of interests
ORCID
References
