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여러 표적세포에서 Retrovirus Vector의 내부 Promoter의 종류와 WPRE의 유무에 따른 GFP 유전자의 발현 효율성 비교
Expression Comparison of the GFP Gene under the Controls of Several Internal Promoters in the Retrovirus Vectors with or without WPRE Sequence
본 실험에서는 외래 유전자의 효율적인 발현을 위하여 GFP 표지유전자를 이용하여 여러 종류의 promoter를 검정하였다. 또한, retrovirus vector에 WPRE 서열을 도입함으로써 GFP 유전자의 발현 증가 여부를 확인하였다. 모든 표적 세포에 있어서 UbC와 β-actin promoter에 비해 RSV와 CMV promoter 통제하의 GFP의 발현이 더 강하게 나타났으며, 특히 CEF 세포에서는 RSV promoter가 가장 우수한 것으로 확인되었다. WPRE의 도입으로 인한 발현율의 증가는 CEF를 제외한 세포주에서 promoter의 종류에 관계없이 확인되었다. 이상의 결과로 각 세포주는 promoter에 따라 발현 양상이 약간의 차이를 보이고 있으나 RSV와 CMV promoter에서 유전자의 발현이 보다 효율적이며, WPRE 서열이 도입된 경우에 HeLa와 PFF 세포에서 발현이 현저히 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 연구 결과는 효율적인 유전자의 발현 체계를 확립하는데 기여함으로써 더 나아가 유전자 치료나 형질전환 동물생산에 적극적으로 활용되어질 수 있을 것이다.
In this study, to construct more effective retrovirus system, we compared four internal promoters (RSV: Rous sarcoma virus, UbC: Ubiquitin C, β-actin, CMV: human cytomegalovirus) in the retrovirus vector by measuring GFP (green fluorescent protein) expression. The effect of WPRE (woodchuck hepatitis virus posttrans-criptional regulatory element) sequence on transgene expression was also investigated. Experiments were conducted with cells derived from three different species (human, pig and chicken) and evaluated the activity of each promoter and the effect of WPRE sequence by fluorometry and Western blotting. In all cells tested, RSV and CMV promoters were superior to UbC and β-actin promoters, and RSV promoter was the best one in chicken cells. The boosting effect of WPRE sequence on GFP expression was evident in human and porcine cells but not in chicken cells.
