Map-based cloning is a basic method for identifying the mutated gene in plants. We selected the gametophytic mutant, named as AP-26-09, in activation-tagging pool. Mutant plant showed various kinds of pollen phenotype, such as the different number of nucleus or abnormal shapes. For the map-based gene cloning, we conducted phenotypic analysis of F2 mapping population through the screening of DAPI-stained pollen using fluorescence microscopy. Genomic DNA of F2 plants is prepared from leaves of approximately 1000 plants. In order to define chromosomal region where mutation is located, we designed SSLP markers and performed PCR amplification. In this study, we characterized gametophytic mutant and determined the chromosomal location using map-based approach.

비동형분열을 포함한 식물화분 발달과정에 관여하는 유전자를 탐색하기 위하여, Activation tagging vector를 이용 하여 조성된 3,500여개의 애기장대 T1세대 약 3,500개의 형질전환체 집단으로부터 4종의 화분 변이형을 보이는 돌 연변이체를 선발하였다. 4종의 변이체들은 20-40% 빈도의 성숙화분 변이표현형을 보였다. 변이체에서는 정상적 인 화분으로 발달하지 않은 aborted pollen type, 한 개의 핵만이 관찰되는 tio type, 비정상적으로 분열된 gemini type 등 다양한 변이표현형들이 관찰되었다. TAIL-PCR을 통하여 T-DNA의 삽입부위의 염색체 부위를 동정하여, co-segregation분석을 수행한 결과, 4종 모두 T-DNA삽입과 무관한 자연발생적 돌연변이로 밝혀졌으며, 현재 map-based cloning방법에 의해 변이유발 유전자를 탐색중이다. 이들 유전자들은 향후 식물의 화분발달에 핵심적 인 역할을 하는 유전자를 발굴하고 이를 이용한 기작을 이해하는데 매우 유용한 정보를 제공할 것으로 판단된다.