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pp.459-465
지금까지 많은 연구가 되어 있지 않던 Bacillus thuringiensis serover. darmstadiensis의 내독소를 Rengorafin-76 단계적 기울기 원심분리로 분리하여 전자 현미경으로 관찰하여 이중피라미드 구조를 가진 독소 단백질을 확인하였으며 B. thuringiensis serover. kurstaki HD1의 독소 생성유전자와 B. thuringiensis serovar. darmsladiensis의 유전자가 유사성이 있다는 보고를 근거로 하여 B. thuringiensis serovar. HD1의 독소생성유전자를 가진 프로브(pUYBT 9044)로 이용하여 colony hybridization 및 southern hybridization한 결과 2.6Kb EcoRI 단편 및 Southern hybridizationg한 결과 2.6Kb EcoRI 단편 및 3.6Kb HindⅢ 단편을 선발할 수 있었다. 이들 단편들은 B. thuringiensis serovar.kurstaki HD1 독소 유전자와 hybridization시 유사성이 있었다. 특히 3.5Kb HindⅢ 단편은 2.6Kb EcoRI 단편에 클로닝되어 있는 1.8Kb의 HD1 독소유전자와 유사성이 있는 부분을 공유하고 있었으며 1.0Kb정도의 EcoRI-HindⅢ 부분이 더 삽입한 것을 알 수 있었다.
Bacillus thuringiensis serovar. darmstadiensis produced bipyramidal endo-toxin. The toxin protein was purified by Renografin-76 step gradient centrifugation and investrigated by electron microscope. Analysis of totoal plasmid DNA patterns showed that four different size of plasmids existed in wild type B. thuringiensis serovar. darmstadiensis. Total plasmids DNA was isolated and transformed into pst I site of pBR322 cloning vector. Ten clones containing crystal toxin gene were forst screened colony hybridization by using PUYBT 9044 probe ontained B. thuringiensis kurskaki HD 1 toxin gene. Cloned-DNA was digested with EcoR1 and HindⅢ and transformed to pIBI30 sequencing vector. Finally, 2.6kb and 3.6kb size fragments contatined toxin-gene were cloned with restriction analysis.
