돌기해삼 Apostichopus japonicus는 주요 양식 대상 무척추동물로서 우리나라 연안 해역에 서 식하고 있다. 본 연구는 방류 방법에 따른 단기간의 생리학적 스트레스 정도를 평가하기 위하 여 heat shock protein 90 (HSP90) 유전자의 발현 변화를 실시간 정량적 중합효소연쇄반응법 으로 조사하였다. 어린 돌기해삼을 비닐봉지에 산소 포장하여 30분간 수송하거나 방류 해역의 간조기에 1시간 공기 중에 노출된 실험군의 HSP90 유전자 발현은 대조군의 HSP90 유전자 발현에 비하여 통계학적으로 유의미하게 증가하였다(수송 후 실험군 p=0.001; 간조기 실험군 p=0.032). 어린 돌기해삼을 방류 후 6시간까지 분석한 결과, 선상에서 씨뿌림 방식으로 방류된 6시간째의 개체 및 호스를 통과하여 수중으로 방류된 2~6시간째의 HSP90 유전자 발현율은 대 조군에 비하여 약간 감소하는 경향을 보였다(씨뿌림 실험군 p=0.069; 호스 방류군 p=0.093). 한 편, 잠수부에 의해 수중에서 방류된 어린 돌기해삼은 방류 후 시간이 경과할수록 HSP90 유전 자 발현율은 증가하는 패턴이 관찰되었다(p=0.061). 이상의 결과는 방류된 어린 돌기해삼의 단기간 스트레스 반응 연구와 효과적인 방류 방법의 개발에 HSP90 유전자 발현이 유용하게 사용될 수 있음을 시사한다.

Sea cucumber, Aposticopus japonicus, is a major invertebrate species in the coastal regions of Korea. To evaluate the short-term stress levels according to the releasing methods, this study investigated the gene expression profiles of heat shock protein 90 (HSP90) by realtime quantitative polymerase chain reaction. When the juvenile sea cucumbers were packed in the vinyl bag with oxygen followed by transportation for 30 min or air-exposed for 1 h, the HSP90 gene expression levels in the experimental groups were significantly increased compared to those of the control groups (transported group, p=0.001; air-exposed group, p=0.032). The experimental group at 6 h post-release by seed-spreading method and at 2~6 h post-release by underwater hose-releasing method on board a fishing boat showed that the levels of HSP90 gene expression were not statistically significant but decreased slightly compared to the control group (seed-spreading group, p=0.069; hose-releasing group, p=0.093). On the other hand, the HSP90 gene expression showed an increasing pattern as the time passed (~6 h) after underwater release of juvenile sea cucumbers by divers (p=0.061). These results suggest that HSP90 gene expression can be used to investigate short-term stress response and effective releasing methods of juvenile sea cucumbers.

서 론
재료 및 방법
    1. 실험동물
    2. 방류 방법 및 샘플링
    3. HSP90 및 beta-actin cDNA 염기서열 분석
    4. Total RNA 추출
    5. 실시간 정량적 중합효소연쇄반응(real-time quantitativepolymerase chain reaction; RT-qPCR)
    6. 통계학적 분석
결 과
    1. HSP90 및 beta-actin 염기서열 비교
    2. 방류 방법에 따른 돌기해삼 조직의 RT-qPCR 분석
고 찰

• 손영창(강릉원주대학교 해양생명과학과) | Young Chang Sohn (Department of Marine Bioscience, Gangneung-Wonju National University, Gangneung, Gangwon-do 25457, Korea) Corresponding author
• 정동빈(강릉원주대학교 정보통계학과) | Dong-Bin Jeong (Department of Information Statistics, Gangneung-Wonju National University, Gangwon-do 25457, Korea)
• 이승헌(강릉원주대학교 해양생명과학과) | Seungheon Lee (Department of Information Statistics, Gangneung-Wonju National University, Gangwon-do 25457, Korea)
• 이동한(강릉원주대학교 해양생명과학과) | Dong-Han Lee (Department of Marine Bioscience, Gangneung-Wonju National University, Gangneung, Gangwon-do 25457, Korea)