톱다리개미허리노린재의 약충(1령, 3령, 5령)과 성충(암컷, 수컷)의 침샘에서 발현되는 대표전사체로 총 26,761contigs, 총 길이 68,046,779 bp (N50 contig: 3,097 bp; Min: 308 bp; Max: 6,121 bp)를 확보하였다. 이중 21,496 contigs가단백질 코딩 영역으로 추정되었다. NCBI nr과 UniProt database에서 BLASTX (e-value ≤1.00E-10) 검색 결과 총 20,622contigs가 hit되었고, 이중 썩덩나무노린재와 톱다리개미허리노린재의 유전자 정보가 약68%로 높은 유사도를 보였다.GO와 KEGG DB에는 각각 16,195와 7,422 contigs가 hit되어 기능별로 분류되었다. 침샘 분비단백질로는 2,623 contigs가추정되었다. 대표전사체에 각 발육단계별 침샘샘플은 평균 약62%가 맵핑되었으며 DESeq으로 normalization 수행후 발육단계별 유전자 발현 차이(DEG)를 비교하였다. 1령 약충 대비 암컷, 수컷, 3령, 5령에서 각각 2,945, 2,920,2,244, 2,371 contigs가 up-regulation된 반면, 1,286, 1,437, 774, 1,382 contigs가 down-regulation되었다.

In the previous molecular cloning study from human salivary gland cDNA l ibrary a novel clone (C77-091) was known as a candidate gene for antimicrobial protein by GenBank database search and RNA in situ hybridization. This study is aimed to identify the molecular characteristics of C77-091 protein, which showed an antimicrobial activity on E.coli, thereby named as salivary antimicrobial protein (SAMP). SAMP consisted of a typical hydrophobic amino acid rich domain in the N-terminus, a cluster of basic amino acids, carbohydrate attachment site, a possible transglutaminase catalyzed cross-linking site, and multiple consensus sequences of phosphorylation site in the C-terminus. Western blot analysis of human organs and tissue with the monospecific antibody to the synthetic SAMP peptide showed strong interacting protein from the extracts from submandibular gland and parotid saliva but absent in the mixed saliva, and the immunohistochemical staining detected a strong positive regions in the secretory granules in the luminal cytoplasm of interlobular ductal cells of salivary gland. The SAMP was also distributed in the human sebaceous gland and prostate. These data suggest that C77-091 named SAMP gene is a novel antimicrobial protein in human salivary gland, which may play a role for the innate immunity by protecting and stabilizing the mucosal epithelium to maintain homeostasis of oral mucosa.

In order to unravel unidentified genes from human salivary gland, a cDNA library of human submandibular gland was constructed in the Uni‐ZAP XR vector by use of mRNA from human submandibular gland and ZAP‐cDNA® Gigapack® III Gold Cloning Kit. cDNA of salivary gland was subtracted with cDNA of immortalized human keratinocyte cell line, Rhim Human Epithelial Keratinocyte cell line. The phage cDNA library was converted into a pBluescript phagemid cDNA library, which was subsequently plated on LB plates with ampicillin, IPTG, and X‐gal, and white colonies were selected for sequencing. Among 200 clones analyzed, four clones containing C77‐091, C75‐014, C76‐022, and C76‐012 designated orphan genes that are intensely expressed in the interlobular ductal and serous acinar cells of human submandibular gland. Particularly C77‐091 gene expresses 46 amino acids peptide (pI=9.45). C75‐014 and C76‐022 genes were characterized as those expressing excretory basic proteins primarily consist of alanine, proline, and leucine residues, mimicking a basic proline‐rich protein (bPRP) showing helical structures and having multiple consensus sequences of phosphorylation sites. The strong expression of C76‐012 mRNA in the nuclei of salivary ductal and acinar cells suggests a role of C76‐012 gene as a DNA binding RNA/protein. These data suggest that the identification of four orphan genes from the human salivary glands may add further understanding of greater role of salivary proteins providing innate immunity by protecting and stabilizing the mucosal epithelium in the maintaining homeostasis of oral mucosa.

테크네슘을 이용한 침샘검사의 시간-방사능 곡선에서 다양한 기능매개변수지표를 획득하여 환자 군과 건강한 정상군과의 비교를 통해 유용성을 알아보고자 하였다. 2014년 12월부터 2015년 2월까지 구강 건조증으로 침샘검사를 시행한 환자군 30명과 건강한 정상군 10명을 대상으로 하였다. 99mTc-과산화테크네슘 370 MBq을 정맥으로 주사 후 20분에 비타민C 파우더를 입안에 투여하여 10분 동안 촬영하였다. 분석방법은 귀밑샘과 턱밑샘의 관심영역을 정하여 시간-방사능 곡선을 그린 후 곡선의 각 위치에서 다양한 기능매개변수 지표를 획득하고, 구강 건조증 환자군와 정상군을 비교하였다. 비교 및 측정에 적용된 방법으로는 섭취율(uptake ratio, UR), 최대 방사능 시간(time at maximum counts, Tmax), 최소 방사능 시간(time at minimum counts, Tmin), 최대 축적율(maximum accumulation, MA), 축적속도(accumulation velocity), 최대 배출율(maximum secretion, MS), 최대 자극 배출율(maximum stimulation secretion, MSS), 배출속도(secretion velocity, SV)를 사용하였다. 환자군과 정상군간의 기능매개변수지표 비교에서 환자군의 최소 방사능 시간(Tmin)을 제외한 모든 지표에서 건강한 정상군이 환자군에 비하여 유의한 차이를 보였고, 시간에 따른 변화량에서도 정상군이 환자군에 비하여 유의한 차이를 보였다. 결론적으로 침샘검사에서 다양한 기능매개변수지표를 이용한 정량분석은 구강 건조증 환자의 침샘 기능을 객관적이고 표준화된 정보로 평가하는데 유용할 것으로 사료된다.