차 중에 있는 살균제 tridemorph의 잔류량을 검사하기 위해 LC-ESI-MS/MS를 이용한 정확하고 감도가 좋은 분석방 법을 개발하였다. Tridemorph 잔류물은 샘플을 수화한 후 acetonitrile로 추출하고, NaCl을 이용한 액-액 분배, NH2 카트리지 정제를 거쳐 기기분석을 수행하였다. 직선성은 0.02~1.0 μgmL−1 범위에서 상관계수(r2) 0.9999로 높은 직선 성을 보였다. 0.02와 0.05 mgkg−1 처리수준으로 회수율을 실험한 결과는 75.0~84.7% 이었으며, 상대표준편차는 10% 미만이었다. 분석방법의 검출한계와 정량한계는 각각 0.01 와 0.02 mgL−1 이었다. 이러한 결과들을 통해 확립된 분석법은 차 중 tridemorph의 잔류량 분석에 적합함을 확인할 수 있었다.
LC-DAD-ESI/MS를 이용하여 국내 자색벼 품종에 대해 개별 안토시아닌 조성 및 함량을 평가한 결과는 다음과 같다.
1. 자색벼 품종에서 분리된 모든 개별 안토시아닌의 화학구조는 MS fragment 패턴을 확인하여 cyanidin을 base로 한 unknown 화합물 1종을 포함, cyanidin 3,5-diglucoside, cyanidin 3-glucoside, peonidin 3-glucoside의 총 4가지 개별성분이 분리 및 동정되었다.
2. Cyanidin 3-glucoside 및 peonidin 3-glucoside이 주요성분으로 cyanidin 3-glucoside의 경우 90% 이상의 가장 높은 함량 비중을 나타냈으며, 개별성분별 평균 함량은 cyanidin 3-glucoside > peonidin 3-glucoside > cyanidin 3,5-diglucoside > unknown(cyanidin based)의 순으로 나타났다.
3. 흑진주벼의 총 안토시아닌 함량은 408 mg/100 g으로 흑남벼보다 약 6배 정도 높은 함량을 나타내었다.
Bacillus thuringiensis (B. t.) strains are important microorganism because they produced a large amount of δ-endotoxin protein per bacterial cell and their toxins are highly toxic to Lepidoptera, Coleoptera, and Diptera depending on B. t. To date, more than a hundred Cry proteins have been identified and classified into 195 holotypes, based on the amino acid sequence identity. The Cry proteins or cry genes from the Korean native B. t. isolates in this study were not identified yet. The electrospray ionization of quadrupole time of flight mass spectrometry (ESI Q-TOF MS) was used to get the internal amino acid sequences of the endotoxin-spore culture mixtures of B. t. isolates, for which polymerase chain reaction (PCR) techniques were unable to detect the cognate genes. Most of Cry proteins seperated, excized, and extracted from the one dimensional - polyacrylamide gel electrophoresis (1D-PAGE), instead of 2D-PAGE, were matched with protein databases using MS-MASCOT search program. The internal amino acid sequences which were submitted to protein BLAST (basic local alignment search tool) had partially homology with the Cry protein databases. Hence, present data strongly suggest that the de novo amino acid sequencing and ESI Q-TOF/MS analysis along with MASCOT search could be used as a simple and rapid method for detection of novel Cry toxins from B. t. isolates and identification of B. t. isolates.