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pp.39-45
Cherry leaf roll virus(CLRV)는 group IV positive sense ssRNA viruses, Nepovirus로 분류되는 식물병원성 바이러스이다. CLRV는 체리 등 목본 및 완두 등 콩과 작물을 자연 기주로 하며, 실험적으로 약 36개 과 이상의 넓은 기주 범위를 가지고 있어 국가적, 경제적 및 농가 개인적 피해를 야기 할 가능 성이 보고되고 있다. 현재 CLRV를 검출하는 방법으로 역전사(reverse transcription; RT)-nesdted 중 합효소연쇄반응(polymerase chain reaction; PCR) 이 활용되고 있으며, 다양한 기주로부터 CLRV를 검출하기 위해서는 검출 감도, 특이성, 반응 시간, 단순성 등이 중요 요소였다. 그러나 RT-nested PCR은 두 단계로 구성되어 있어 단순하지 않고, CLRV를 검출하는데 약 10시간 이상의 반응 시간이 소 요되었다. 이번 연구에서는 등온증폭법을 이용하여 단순하고 신속하게 CLRV를 검출하는 방법을 개발하 였다. 등온증폭 반응은 RT-nested PCR과 동등한 검출 감도로 CLRV를 검출 하였다. 그러나 반응 시간 을 약 2시간 수준으로 단축하였으며, 6개 영역을 사용하는 등온증폭 프라이머의 사용으로 더욱 특이적 으로 증폭 할 수 있었다.
Cherry leaf roll virus(CLRV) is a plant virus of belonging to Nepovirus, group IV positive sense ssRNA viruses. CLRV has a wide host range, and it has been found in up to 36 families, including cherry, woody plant and pea families. When related crops were infected by CLRV, it cause to significant national, economic and farm damage. Reverse transcription (RT)-nested polymerase chain reaction(PCR) is used as the major technique for the detecting CLRV from various hosts being that important of sensitivity, specificity, reaction time and simple. However, two-steps nested PCR was not simple and need more ten hours reaction time for detecting CLRV. For simple and rapid detection of CLRV, using the loop-mediated isothermal amplification(LAMP) assay was developed, this study. In the results, LAMP reaction showed similar sensitivity compare with RT-nested PCR. However, running time was reduced to approximately two hours, and can more specific detection of CLRV using six regions LAMP primers.
재료 및 방법
1 시료수집 및 cDNA의 합성
2 등온증폭법을 위한 특이적 프라이머 디자인 및반응조건
결과 및 고찰
References
