We have previously produced transgenic (TG) mice expressing the human lactoferrin (hLF), interleukin-10 (hIL-10), and thrombopoietin (hTPO) proteins in the milk. In this study, we examined whether simple crossbreeding between two kids of a single transgenic mouse can produce double transgenics co-expressing two human proteins.. The hLF male, and the hIL-10 male were crossbred with the hIL-10 and hTPO females, and the hTPO female, respectively. PCR analysis for genotyping showed 32%, 23% and 24% double transgenic rates for hLF/hIL-10, hLF/hTPO, and hIL-10/hTPO transgenes, respectively. We analyzed the expression levels of the human proteins from double transgenic mice and compared those with their single transgenic siblings. All double transgenic co-expressed two human proteins at comparable levels to singles', unless hTPO was not co-expressed: for hLF, 1.1 mg/ml in hLF/hIL-10, whereas 0.5 mg/ml in hLF/hTPO; for hIL-10, 4.1 mg/ml in hIL-10/hLF, whereas 1.4 mg/ml in hIL-10/hTPO. Ihe downregulation of hTPO to half level of singles' was observed in double transgenic mice. The possible reason why hTPO co-expressed might lead to down-regulation of another human protein was discussed. These results suggested that double transgenic generated by crossbreeding between two singles' could be useful system for bioreactor.

인유, 조제 분유 및 시유의 인 지방질의 지방산 조성을 가스 크로마토그래피로 분석하여 비교하였다. 조제 분유는 인유에 비하여 8 : 0, 10 : 0, 18 : 0, 20 : 0, 22 : 0 등의 지방산들이 유의하게 높았다. 18 : 2Ω6은 조제 분유가 인유에 비하여 2.3배나 많은 18% 수준을 유지하였다. 대체로 보아 Ω9계, Ω6계 및 Ω3계 대사산물들은 조제 분유가 낮은 경향을 보였다. 인유에 비하여 시유도 조제 분유와 유사한 경향을 나타내었다.

인유, 조제 분유 및 시유의 트리글리세리드의 구조를 비교하기 위하여 트리글리세리드의 지방산 조성, 아실 탄소수 및 종을 박충 크로마토그래피 및 가스 크로마토그래피를 사용하여 분석하였다. 인유에서는 단쇄 지방산이 검출되지 않은 반면 조세 분유와 시유에서는 1% 미만의 수준들로 검출되었다. 인유에 비하여 조세 분유는 8 : 0, 22 : 0, 24 : 0 등이 유의하게 높은 반면 10 : 0, 14 : 0 등의 지방산들은 유의하게 낮았다. 시유는 인유에 비하여 8 : 0, 10 : 0, 18 : 0, 22 : 0, 24 : 0 등이 유의하게 높았고 12 : 0, 20 : 0 등이 유의하게 낮았다. 18 : 2Ω6은 인유가 12.0%, 조제 분유가 15.0%로 서로 비슷한 반면 시유는 3.8%로 가장 낮았다. 탄소수 20개 이상의 Ω6계 및 Ω3계 장쇄 고도 불포화 지방산들은 인유에 비하여 조제 분유와 시유에서 유의하게 낮았다. 인유는 아실 탄소수 44-52, 조제 분유는 50-54, 시유는 36-40 을 가진 글리세드가 주종을 이루고 있었다. 조제 분유에서는 아실 탄소수 50과 52, 시유에서는 42만 제외하고 나머지의 탄소수들은 인유의 그것들과 모두 유의한 차이를 보였다. 조제 분유의 saturates 는 인유의 그것에 비하여 2 배 가량 높았을 뿐 기타 종에서는 모두 유의하게 낮았다. 시유에서도 dienes를 제외한 모든 종에서 조제 분유에서와 동일한 경향이 나타났다.

총지방질의 함량은 인유(성숙유), 조제 분유 및 시유 다같이 비슷한 수준치를 보였다. 조제 분유는 인유에 비하여 인 지방질, 유리 지방산, 콜레스테롤 에스터 등이 유의하게 높은 반면 트리글리세리드는 유의하게 낮은 수준이었다. 시유와 인유는 트리글리세리드 함량에서는 비슷하였지만 기타 지방질 성분에서는 차이가 있었다. 조제 분유의 인 지방질/트리글리세리드의 비, 콜레스테롤/트리글리세리드의 비, 총토코페롤 그리고 총토코페롤 / 총지방질의 비 모두 인유는 물론 시유의 그것들에 비하여 유의하게 높은 수준이었다. 총토코페롤 / 18 : 2 Ω6의 비는 조제 분유, 시유 다같이 인유에 비하여 유의하게 높았다. 인유, 조제 분유 및 사유의 비타민 E 함량은 미국 유아 식이의 기준치를 상회하였다. 조제 분유의 포화 지방산 중에서 탄소수 8개 이하의 직쇄의 우수 지방산들은 인유의 그것들에 비하여 유의하게 높았으며, 10개 이상의 탄소수를 갖고 있는 직쇄의 우수 지방산들은 인유의 그것들과 대체로 비슷한 수준들이었다. 시유에서도 역시 탄소수 10개 이하의 것들과 18 : 0 등의 직쇄의 우수 지방산들 그리고 직쇄 및 측쇄의 기수 지방산들이 높은 경향이었고 12 : 0 은 낮았다. 불포화 지방산의 경우 인유의 18 : 2Ω6은 조제 분유와는 거의 비슷한 수준인 반면 시유의 그것에 비하여 4.5 배 높은 수준이었고 탄소수 20개 이상의 장쇄 고도 불포화 지방산들은 조제 분유, 시유 다같이 낮은 수준치를 갖고 있었다.

Human lactoferrin (hLF) is an 80 kDa iron-binding glycoprotein that is expressed in high concentration in milk and in lesser amount in the secondary or specific granules of neutrophils and in plasma, LF is classically considered to be related to the binding, transport, and storage of iron. The transgenic mice carrying the human hLF gene in conjunction with the bovine -casein promoter produced the human hLF in their milk during lactation. To screen transgenic mice, PCR was carried out using chromosomal DNA extracted from tail or toe tissues. In this study, stability of germ line transmission and expression of hLF were monitored up to generation Fl7 of a transgenic line. When female mouse of generation F9 was crossbred with normal male, generation F9 to Fl7 mice showed similar transmission rates (, respectively), implying that the hLF gene can be transmitted stably up to long term generation in the transgenic mice For ELISA analysis, hLF expression levels were determined with an hLF ELISA kit in accordance with the supplier's protocol. Expression levels of human hLF from milk of generation F9 to Fl3 mice were , respectively. These expression levels were lower than that of founder (6.6 mg/) mouse. We concluded that transgenic mice faithfully passed the transgene on their progeny and successively secreted target proteins into their milk through several generations.