Tooth development involves bud, cap, bell and hard tissue formation stages, each of which is tightly controlled by regulatory molecules. The aim of this study was to identify genes that are differentially expressed during dental hard tissue differentiation. Sprague-Dawley rats at postnatal days 3, 6 and 9 were used in the analysis. Differential display RT-PCR (DD-PCR) was used to screen differentially expressed genes between the 2nd (root formation stage, during mineralization) and 3rd (cap stage, before minerali-zation) molar germs at postnatal day 9. The DNA detected in the 2nd molar germs showed homology to osteonectin only (GenBank accession no. NM_012656.1). The level of osteonectin mRNA expression was much higher in the 2nd molar germs than in the 3rd molar germs and was found to increase in a time-dependent manner from the early bell stage to the root formation stage in the 2nd molar germs. The pattern of osteonectin protein expression was consistent with these RT-PCR results. Osteonectin protein was found by immunofluorescent analysis to localize in odontoblasts and preodontoblasts rather than the dentin matrix itself. Further studies are needed to validate the involvement of osteonectin in mineralization and root formation.

This research was designed to investigate changes of growth factors and bone matrix proteins during the bone healing processes using immunohistochemistry and in situ hybridization. Especially this study was focused on the changes of bone matrix and growth factors around the titanium implant. Threaded implants were introduced into the long bone of tibia. Time dependent changes of several bone associated protein and and its mRNAs were observed. Proteins investigated in this study are collagen, osteonectin(ON), osteopontin(OPN), osteocalcin(OC). Expression of the proteins were measured using immunohistochemistry. VEGF and ON were measured using in situ hybridization, and northen blot technique. Bone regeneration were observed as early as the third day of experiment. Matrix proteins and growth factors observed around implant were identical to the proteins observed in the control group. The expression of the ON, OC and VEGF were observed mainly in the osteoblast-like cell on the surface of new bone around the implant and the cells lining the margin of bone defect apart from the implant. The observation may not result from direct osteoconducting activities of titanium but by passive adsorption of extracellular factors which has bone inducing capacities. These passive adsorption results in the immobilization of the growth factors and consequent prolongation of the activities.

본 연구는 SPARC(osteo n ect in) 이 석회화 물질의 형성에 밀접한 연관을 가진다는 짐 애 착안하여 골조직 재생 괴정 중의 기질-세포 상호자용에 있어 SPARC의 역할 석회화 조직 형성과 연관된 SPARC의 발현조절과 기능을 규명하고자 시행되었다 l꾀서 태자 두개관 배양세포로부터 SPARC cDNA를 합성하였으며 이를 이용하여 백서 SPARC 단백질을 합성하였다 SP때C 단맥 질을 이용해 백서 조골 세 포의 증식 에 미치는 영호노을 관찰하였다 동시 에 백서 장골에 인위적인 골결손을 형성하고 형성과정에서의 골기질 관련인자의 분포를 관찰하고 SPARC 의 분포를 in situ hyb ridiz a tion법을 이용하여 관찰하였다 백서에서 분리 합성된 cDNA 조각은 1231bp 크기 였으며 40kD 크기의 단백질을 발현하였다 백서 태자 두개관 세 포의 증식에서 SPARC과 콜라겐 으로 처리된 표띤은 콜리겐 단독으로 표면처 리된 t111 양표연보다 증가힌 세포증식과 단백질 합성 콜라겐 합성을 나티내 었다 백서 -?I-골이1 형성힌 골조직 지| 생괴정에서 SPARC을 투여힌 백서 ;<J-골의 경우 결손부 전체에 걸쳐 증가한 SPARC의 합성을 보였디 SPARC이 투여된 군에서는 질손부의 중심 에서부터 SPARC과 콜라겐의 합성이 증기한 양상을 나타내었으며 대조군과 뚜렷한 차이를 나타내었다 in siLu h yb ricli za Li o n 깨 을 이용한 관칠 에서 골결손부 중잉에 있는 세 포에서의 SPARC 발현이 증가하였으며 그 싱패는 1 4 일 까지 대 조군에 비해 높게 니티났디 이싱의 연구 에서 얻은 결론은 디음과 같다 SPARC은 콜라겐과 결합하여 백서태자 두개관세 포의 배양에서 세 포증식 및 단백질 한성 ‘ 콜라겐 합성 의 뚜렷한 증가를 나타내었으며 . 이 같은 OJ상은 SPARC 단독으로 표연 처리하였을 때 는 관찰되지 않았다. SPARC의 골절손부 투여는 골조직 의 재생을 촉진허며 초기 세 포외 기질의 합성을 증가시켰으며 특히 SP뻐C의 형성이 초기애 증가하는 앙싱 융 나타내었다 이상 의 결과로 볼 떼 SPARC의 투여는 골조직 손상회복 시 초기 골기질 형성과 석회화에 영향을 미치며 SPARC 자치1 의 형성 증가에도 영향 을 미치는것으로보인다