This study attempted to establish an ultra performance liquid chromatography (UPLC) analysis method for standard determination of silymarin as a health functional food material in Silybum marianum extraxt (milk thistle). UPLC was performed on a Waters Acquity BEH C18 (50×2.1 mm, 1.7 μm) column using a gradient elution of distilled water and methanol at a flow rate of 0.21 mL/min and detection wavelength of 288 nm. The UPLC method showed high linearity in the calibration curve at a coefficient of determination (r2) of >0.9999, and limit of detection and quantitation for 6 flavonolignans were 0.0167-0.2469 and 0.1648-1.2931 μg/mL, respectively. The recovery of each flavnolignan was in the range of 99.96-100.81%, and the relative standard deviation for precision of each flavonolignan was less than 1.0%. The UPLC method established in this study was more specific for the quantitative determination of silymarin than the HPLC method. Also, since the UPLC method is shorter in the equipment operation time and smaller in the amount of used solvent than the HPLC method, UPLC is expected to have higher energy efficiency and lower environmental impact compared with HPLC.

본 연구에서는 UPLC를 이용한 밀크씨슬추출물의 지표 물질인 실리마린의 신규 분석법을 확립하였으며, 건강기능식품공전의 HPLC 분석법과 비교하여 UPLC 분석법을 검증하였다. UPLC를 이용한 신규 분석법을 검증은 특이성, 직선성, 정확성, 정밀성, 실험실 내 정밀성, 완건성 등 6개의 검증 항목을 선정하여 실시하였다. HPLC 및 UPLC 분석법 모두에서 6가지 실리마린 표준물질이 선택적이며 특이적으로 정확하게 검출됨을 확인하였으며, 실리마린 25-400 μg/mL의 농도에서 결정계수 값이 0.9999이상으로 높은 직선성을 갖음을 확인하였다. 정확성에서 UPLC를 이용한 신규 분석법의 회수율은 평균 99%이상으로 HPLC분석법보다 높은 회수율을 보였으며, UPLC 분석법의 회수율편차가 HPLC 분석의 회수율편차의 절반 이하임을 확인하였다. UPLC 분석법에서 얻어진 피크 면적의 상대표준편차가 HPLC 분석법의 그것과 비교하여 절반 이하였으며, UPLC 분석법의 정밀성 및 실험실 내 정밀성이 HPLC 분석법의 정밀성 및 실험실 내 정밀성보다 높음을 확인하였다. 분석법 검증 결과, 모든 검증 항목에서 HPLC와 UPLC 분석법 모두 적합하게 검증되었으며, 검증 항목 중 정확성, 정밀성, 실험실 내 정밀성 및 완건성 항목에서 UPLC 분석법의 검증값이 HPLC 분석법보다 뛰어났다. HPLC 분석법으로 검체 100개를 분석할 경우, 총 분석시간은 95시간 30분 (기기 안정화 시간 포함한 분석시간은 약 96 시간), 총 이동상 소모량은 6,215 mL이고 이동상 소모량 중 methanol 함량은 2,450 mL이었으나, UPLC 분석법의 총 분석시간은 약 13시간 (기기 안정화 시간 포함한 분석시간은 약 14시간), 총 이동상 소모량은 168 mL이며 이동상 소모량 중 methanol 함량은 74 mL에 불과하였다. 이상의 결과를 통해 UPLC를 이용한 실리마린 신규 분석법은 건강기능식품의 실리마린을 분석하는데 적합하며, 건강기능식품공전의 HPLC 분석법과 비교하여 효율적인 분석법이라고 판단할 수 있다.