This study was to evaluate the protein profile of seminal plasma using 2-DE in Hanwoo. Seminal plasma was harvested from five mature Hanwoo, and seminal plasma protein was extracted by M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent. Proteins were refined by clean-up kit and quantified by Bradford method until total protein was . Immobilized pH gradient (IPG) strip was used 18 cm and 3~11 NL. SDS-PAGE was used 12% acrylamide gel. Each gels were visualized by comassie brilliant blue and silver staining. These spots were analyzed by MALDI-TOF MS and searched on NCBInr. The result, 20 proteins of 36 protein spots were searched through peptide sequencing on the NCBInr. 8 proteins profiled by 2-DE were proved through previous bovine studies and the name of each protein was albumin, nucleobindin, clusterin, TIMP-2, spermadhesin Z13, spermadhesin-1 and BSP proteins (BSP 30 kDa and BSP A1/A2). 12 new proteins were ATP synthase, protein MAK16 homolog, Transmembrane protein 214, E3 ubiquitin-protein ligase BRE1A, dual serine/threonine and tyrosine protein kinase, tissue factor pathway inhibitor 2, alpha-actinin-4, RUN domain-containing protein 3B, catenin alpha-1, protein-glutamine gamma-glutamyltransferase 2, plakophilin-1 and inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H1 has not been previously described in the bovine seminal plasma study. These proteins may be contribute to define the type of proteins affecting fertility of male and improve the fertilizing ability of semen in Hanwoo.
형광 염료와 레이저 겔스캐너 장비를 이용하여 변성아크릴 아마이드 겔에서 전기 영동된 DNA를 신속하고 간편한 방법으로 기존의 은염색법과 비슷한 감도로 검출하고자 하였다. 변성아크릴아마이드 겔을 형광 염료인 SYBR Green (Molecular Probes)이나 Vistra Green (Amersham Bioscience) 0.01 X 희석액 (pH 8)으로 염색한 후 480nm 레이져, 520nm filer 옵션으로 스캔하여 DNA를 검출하였으며, 검출감도는 기존의 은염색법과 비슷하면서 염색 단계를 한 단계로 줄일 수 있었다.
건조분말상태의 인삼 및 유사 숙근성 식물간의 구별방법을 확립하기 위하여 단백질 추출과 분리방법을 달리하여 전기영동법에 의해 각 식물의 단백질 pattern 및 분자량을 추정하였던바 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 단백질분리는 증류수와 phosphate buffer로 추출하였을 때 가장 잘 되었으며 비교하기가 용이하였다. 2. 단백질추출방법에 따라 각 식물의 minor band는 약관의 차이가 있었으나 major band는 차이가 없었다. 3. 각 식물을 구별할 수 있는 band는 인삼이 45,000 및 66,000 Kd이며 사삼은 32,000∼39,000kd이고 도라지는 39,000Kd에서 double band가 특징적인 band로서 각 식물을 구별할 수 있는 단백질이었다.