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        검색결과 2

        1.
        1996.06 KCI 등재 구독 인증기관 무료, 개인회원 유료
        흰쥐의 뇌로부터 읽는구조 전체를 포함하는 1.8kbp 크기인 IP_3K를 암호화 하는 IP_3KcDNA 유전자속의 NotⅠ부위 GCGGCCGC를 GCAGCCGC로 site-directed mutagenesis 하여 얻은 변이 IP_3KcDNA를 pSP72·Not2 운반체의 EcoR I 부위에 클로닝하여 증폭시키고, 유전자 재조합 과정을 거쳐서 포유동물의 발현 운반체인 pZIP·NeoSV(X)의 NotⅠ부위에 IP_3KcDNA를 서브클론하였다. 이것을 CCL39 hamster lung fibroblasts 세포에 transfection 하여 발현시키고, anti-IP_3K antibody를 사용하여 Western blot 법으로 효소량과 활성도를 각각 측정한 결과, 효소량은 5배, 효소의 활성도는 무려 16배로서 기대하였던 것보다 훨씬 발현효율이 높았다. 또한 흰쥐의 각 조직속에 IP_3K의 분포와 생화학적인 특성이 논의되었다.
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        2.
        1993.03 KCI 등재 구독 인증기관 무료, 개인회원 유료
        흰쥐로부터 뇌, 심장, 관장, 폐, 신장 및 흉선 등 12종류의 기관을 계통별로 해부하여 homogenates를 만들고 cytosol을 분획한 다음, 이것을 효소원으로 하여 inosltol phosphates 대사회로에서 핵심효소인 PLC, IP_3K 및 Ins(1, 4, 5)P_3 5-phosphatase의 활성도를 조직별로 비교 측정하였다. 흰쥐의 뇌에서 분리 정제된 53KDa의 IP_3K를 Balb/c 마우스에 면역 후 비장 세포를 얻어서 골수암세포인 myeloma cells (SP_2/Ag 0-14)에 세포융합, 스크리닝 및 클로닝과정을 거쳐서 anti IP_3K murine monoclonal antibodies를 만들었다. 이 과정에서 18개의 hybridoma clone이 얻어졌고 그 중 10개의 clone만이 nonspecific binding에 기인되는background가 낮았다. Ascitic fluid를 생산시킨 후 그 Ab를 Affi-gel 15로 정제하여 IgG의 subtype을 결정하였다. 이 항체들 중에서 IgG_1과 IgG_2b를 함께 사용하여 조직의 IP_3K에 대한 immuno 반응성을 검증한 결과 대체로 비슷한 비경쟁적 저해를 보였으며 뇌조직의 IP_3K가 예민한 반응을나타내었고, 심장조직에서는 현저히 activity가 낮았다. 흰쥐의 뇌로부터 16, 100배로 정제된IP_3K효소를 사용하여 얻어진 Km값은 1.8mM, 최대반응속도V_max 값은 5.41μ㏖/mln/㎖이었다. Western blot 결과 심장조직에서는 40KDa의 IP_3K만이 관찰되었으며, 뇌속에는 면역학적으로 서로 다른 3가지의 IP_3K(53, 51 및 40KDa)가 존재하였다. 그 중 53KDa의 단백질이 활성이 큰 주 효소이며, 1.8Kb의 IP_3K gene을 완전히 encoding하는 ^32P-labeled cDNA를 probe로 만들어 Northern blot법으로 IP_3K의 mRNA를 정량한 결과 성장단계별로 이들은 모두 transcriptional 수준으로 조절받고 있음을 밝혔다.
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