Tributyltin (TBT) used world-wide in antifouling paints toy ships is a wide-spread environmental pollutant. At low doses, antiproliferative modes of action have been shown to be involved, whereas at higher doses apoptosis seems to be the mechanism of toxi

본 연구는 착상전 이배체 단위발생 돼지난자를 체외 배양시 우태아혈청 (FBS), 우혈청 알부민 (BSA) 및 상피세포성장인자 (EGF)를 배양액에 첨가하였을 때 배반포, 총 세포수, 세포사멸 및 세포사멸에 관여하는 유전자의 발현을 조사하고자 수행하였다. 0.4% BSA를 배양액에 첨가하였을 때 2세포기 단위발생 난자의 배반포까지의 발달율이 증가되었다(P<0.01). FBS는 배반포의 총세포수를 감소시 켰고 세포사멸을 증가하였다(P<0.01). 그리고 EGF는 BSA가 존재하는 조건하에서 배반포의 총세포수를 증가하였는데 EGF와 BSA가 각각 단독으로 존재할 때는 이런 작용이 없었다. 세포사멸도 이와 이슷한 경향을 보였는데 EGF와 BSA가 각각 존재할 때에는 비처리군과 차이가 없었지만 함께 존재할 때에는 세포사멸을 감소시켰다. RT-PCR의 결과에 의하면 EGF는 BSA가 존재하는 배양액에서 Bcl-xL 유전자의 상대적 발현량을 증가시키고 Bak 유전자의 상대적 발현량에는 영향을 주지 않는 과정을 통하여 세포사멸을 감소시키는것 같다. 반면에 FBS는 Bcl-xL의 발현량을 감소시키고 Bak 유전자의 상대적 발현량을 증가시킨다. 이러한 결과는 세포사멸에 관여하는 유전자의 발현은 배양액의 첨가물에 따라 유의적으로 영향을 받으며, 체외배양시 배아의 초기발달에 관여함을 시사한다.

Odontogenic keratocysts(OKCs) are frequently associated with erupted or impacted tooth. In such instances, the radiographic features simulate those of a dentigerous cyst. The purpose of this study was to evaluate a comparative immunohistochemical expression of Ki-67 as a proliferative marker and apoptotic signals in the OKC associated with or without impacted tooth. In addition, we have also been investigated with regard to the proliferative activity and apoptosis comparing the unilocular and multilocular varieties of the OKC. The material for this study consisted of thirty-two cases of OKCs (OKC with impacted tooth, n=16；OKC without impacted tooth, n=16) and ten cases of dentigerous cysts as a comparison. The results revealed that the proliferative activity and apoptosis of OKCs with impacted tooth was higher than those of dentigerous cysts. However, there was no correlation between Ki-67 immunoreactivity or apoptosis and association with or without impacted tooth in 32 cases of OKCs. In addition, this present study showed that there was no correlation between the unilocular and multilocular varieties of the OKCs in proliferative activity and apoptosis.

Identification of spermatogonial stem cell-specific surface molecules is important in understanding the molecular mechanisms underlying the maintenance and differentiation of these cells. We have found that spermatogonia from busulfan treated mice expressed an autoantigen that distinguishes between undifferentiated and differentiated spermatogonia. Four to six weeks after busulfan treatment, germ cells located in the basal compartment of seminiferous epithelium show isotype-specific IgG deposits that form due to autoimmunity. Before busulfan treatment, the level of testicular IgG was very low but IgG levels began to increase after week 4 and peaked at week 6. When cells from the busulfan treated testis were analyzed using laser scanning cytomeoy (LSC), the frequency of cells positive for IgG deposits, 6-integrin, and 1-integrin were 16.53.8%, 11.82.6%, and 9.0 1.4%, respectively. Immunofluorescent staining suggested that most, if not all of the cells with IgG-deposits isolated from a laminin-coated dish, were also positive for a spermatogonial stem cell marker \ulcorner6-integrins as well as for a germ cell-specific marker TRA 98. We determined serum and intratesticular IgG levels and the soundness of seminiferous tubule basement membrane from busulfan treated mice using electron microscopy, in order to study the mechanism responsible for IgG deposits in spermatogonia. We found that the basement membranes of seminiferous tubules from busulfan treated mice were severely impaired when compared to those of normal adult, neonates and w/wv mice. Furthermore, new blood cells were observed in the surface of the damaged basement membrane along the seminiferous tubules. These results suggest that the IgG in spermatogonial stem cells accumulates from circulating blood through the impaired basement membranes induced by busulfan treatment. Taken together, our study suggests that IgG can be used as a new marker for undifferentiated spermatogonia cells.

콘택트렌즈 관리용액의 보존제 성분 중 Benzalkonium Chloride<BAC) 가 L929세포 주에 세포독성과 세포 자연사룰 유도하는지 조사하고자 시행하였다. 생쥐 섬유모세포 인 L929 cell line을 배양하여 양성 대조군으로 0.01% H20~， 음성 대조군으로 Media 를 처리하였으며 세포독성은 BAC룰 배양세포에 시간별 (24， 때hr) ， 농도별(0.0001 ， 0.001, 0.005, 0.01, 0.05, 0.1%) 로 처리하여 대조군과 처리꾼올 비교하여 세포독성 농 도를 산출하였다. Hematoxylin-Eosin Staining후 광학현미 경으로 형태적 변화를 관 찰하고， MTT Assay와 LDH Activity 로 검정하였으며， MTT 정량과 LDH(Lactate Dehydrogenase) 활성도로 세포독성 농도룹 산출하였다. MTT 정량결과， 세포 독성이 0.0001% 에서는 8%, 0.005% 에서는 30%, 0.001%에서논 65%5'_ 농도 의존적으로 독성 이 나따났으며， 0.001% 에서 LDH 유출정도가 대조꾼과 비교하여 차이를 나타내지 않 았으나， 0.01% 의 농도에서 2.9 배， 0.1%의 농도에서 대조군에 비해 3.35배정도 높은 LDH 의 유출율을 보였다. 세포자연사 (Apoptosis) 륜 관찰하기 위 해 Hoechst33342와 DNA Laddering과 Flow cytometry를 실시한 결과， 0.1%에서쓴 세포괴사 (necrosis) 에 의해， 0.001%-0.01%에서는 세포자연사(apoptosis) 에 의한다는 것을 알 수 있었다.

One-step System으로 6시간 동안 중화된 H202의 배양 각막상피 세포에 대한 세 포독성과 Apoptosis를 조사하기 위해 세포에 15분간 직접 처리하여 세포의 형태적 변화， 생화화적 변화 그리고 면역화학적 발현 여부 등올 확인하였다. 세포독성은 형 태적 변화와 MTT Assay률 시행하였고 Apoptosis는 Hoechst 잃342의 형광염색으로 산 정 한 Apoptotic index, DePsipher™ assay를 이 용한 mitochondria 활성 과 변화를 확인하였으며 immunocytochemistry로 각막 상피세포 막의 수용체인 FAS 의 발현 여 부도 조사하였다. 중화된 H202를 15분간 처리 후 세포독성을 조사한 결과， 같은 디스크로 중화를 반 복한 경우 독성이 높게 나타났으며 세포증식도 느리게 나타났다.24시간 동안 세포를 정상 배양액으로 환원시켜 조사한 결과， 세포 독성에서 회복효과가 거의 없고 Apoptotic index도 높게 나타났다. 또한 미토콘드리아 활성과 초기 Apoptosis 에 대 한 검증도 모두 양성으로 나타났다. 그리고 Apoptosis 유도의 가장 중요한 경로인 FAS-FAS ligand system에 대 한 조사에 서 중화된 H20z를 처 리 한 세 포의 FAS 가 정 싱세포에서 보다 강하게 발현되는 것을 immunocytochemistry로 확인할 수 있었다. 이상의 결과로 강력한 apoptosis 유도 물질인 H202를 콘태트렌즈 소독을 위해 One-step system으로 중화한 경우에도 불완전하게 중화된 Hz02에 의해 각막상피세 포의 Apoptosis가 유도되 므로 중화용 백금 디 스크의 반복된 사용올 금지 하거 나 반복 사용 시에는 시간을 더 늘려야 할 것으로 사료된다.