Somatic cells nuclear transfer (SCNT) is a useful tool in studies of developmental biology and animal cloning. However, SCNT experiments only are allowed to skilled technical experts. In this experiment, laser-assisted zona pellucida piercing tool (LASER) was applied in murine SCNT. LASER minimized the use of piezo-driven micromanipulator (PIEZO), reducing chances of problems caused by PIEZO pulses. LASER reduced time that took to pierce zona pellucida in removal of nucleus from oocyte and somatic cell injection, which might have taken longer time with PIEZO. Time and difficulties that took researcher of equivalent skilled for their experiments were decreased with LASER, and this might affect the improvement of embryonic development. (LASER, 6.2% versus PIEZO, 2.9%; P<0.05). Thus, these data support that the use of LASER can be used for zona pellucida piercing in murine SCNT program as an alternative to PIEZO.

This study was conducted to evaluate the effect of cytochalasin B (CB) treatment in the activation medium on the development of somatic cell nuclear transfer (SCNT) rat embryos. Fetal fibroblast cells were isolated from a Day 14.5 fetus, and the oocytes for recipient cytoplasm were recovered from 4-week old Sprague Dawley rats. After enucleation and nuclear injection, the reconstructed oocytes were immediately exposed to activation medium consisting of 10 mM SrCl2 with or without CB for 4 hr, and formation of pseudo-pronucleus (PPN) was checked at 18 hr after activation. Then, they were transferred into day 1 pseudopregnant recipients (Hooded Wistar) or cultured for 5 days to check their developmental competence in vivo or in vitro. The number of PPN was not affected by CB treatment during the activation. However, CB treatment supported pre-implantation development of rat SCNT embryos. Embryos generated by the procedures of SCNT were also capable of implanting, with 1 implantation scar found from a recipient following the transfer of 87 SCNT embryos to four foster mothers. The result of the present study shows that rat SCNT embryo can develop to post-implantation stage following treatment with CB.

This study was carried out to investigate the effects of cryoprotectants, warming solution and removal of lipid on open pulled straw vitrification (OPS) method of porcine embryos produced by nuclear transfer (NT) of fetal fibroblasts. All solutions used during vitrification were prepared with holding medium consisting of 25 mM Hepes buffered TCM199 medium containing 20% fetal bovine serum (FBS) at 38.5℃. The blastocysts derived from NT with or without lipid were vitrified in each medium of different concentrations of dimethyl sulfoxide (DMSO) and ethylene glycol (EG). Also, blastocysts after cryopreservation were warmed into different concentrations of sucrose in warming solution. The optimal concentrations of cryoprotectants in vitrification solution were 10% DMSO + 10% EG in vitrification solution 1 (VS1) and 20% DMSO + 20% EG in vitrification solution 2 (VS2). The optimal concentrations of sucrose were 0.3 M sucrose in warming solution 1 (WS1) and 0.15 M sucrose in warming solution 2 (WS2). Lipid removal from oocytes before NT enhanced the viability of NT embryos after vitrification. Our results show that use of the OPS method in conjunction with lipid removal provides effective cryopreservation of porcine nuclear transfer embryos.

본 연구는 재래 산양의 체세포 핵이식에 의하여 생산한 복제 산양(진순이)의 조직으로부터 공여 핵을 배양하여 다시 핵이식을 실시하여 재복제에 따른 융합율과 분할율, 이식 후의 수태율 등을 조사하여 재복제 가능성 여부를 검토하기 위하여 실시하였다. 공여 세포는 귀 유래 섬유아세포를 분리 배양하여 사용하였으며, 체내 성숙 난자는 성숙한 미경산 재래 산양에 과배란을 유기하여 외과적인 방법으로 난관 관류를 통해 회수하여 핵이식을 실시하였다. 핵이식란의 융합은 전

본 연구에서는 방사성폐기물의 화학처리공정에 자주 사용되는 유동관식 장치 중 튜브형 반응기, 다단식 용매추출 장치, 흡착탑 등 물질전달이 수반되는 장치에 있어 각종 매개변수들이 반응수율이나 물질전달수율에 미치는 영향과 민감도를 살펴보았다. 먼저 각 장치에 대한 거동을 묘사하기 위하여 수학적 모델링을 수행하였고 전산모사를 통하여 해당 장치의 거동을 예측하였다. 그리고 그 결과로부터 해당 공정의 고유한 매개변수들이 반응수율 또는 물질전달수율에 미치는 영향과 민감도를 분석하였다. 튜브형 반응기에서는 확산계수, 반응속도상수 등이 반응수율에 미치는 영향을, 다단식 용매추출 장치에서는 연속상과 분산상의 분배계수, 연속상 흐름의 역혼합 등이 추출수율 및 장치 내 농도 분포에 미치는 영향을 고찰하였다. 또 흡착탑에 있어서는 흡착평형상수 및 유체-흡착재간 물질전달계수 등이 흡착 속도에 미치는 영향을 조사하였다.

본 연구는 소 체외수정란과 체세포 복제란의 초자화 동결 및 융해 후 생존능을 검토하였다. 배반포로 발육된 체외수정란 및 체세포 복제란을 초자화 동결법에 의해 동결하였다가 융해하여 생존율 및 배양 후 부화율을 검사하였다. 체외수정란 배반포를 초자화 동결 융해한 결과, 확장배반포가 배반포기 난자에 비하여 생존율(82.1%, 96/117)과 부화율(64.1%, 75/117)에서 모두 유의적으로 높았다(p<0.05). 핵이식 배반포 복제란을 초자화 동결 융해한 경우도 체외수정란과 비슷한 경향을 보여 확장 및 부화배의 생존율과 부화율이 각각 81.1%(30/37)와 78.3%(29/37)로, 배반포(각각 71.8 및 53.8%)에 비하여 다소 높게 나타났다. 본 연구의 결과는 초자화 동결 방법에 의해서 소 체외수정란과 체세포 복제란을 성공적으로 동결할 수 있으며, 특히 후기 배반포기 단계에서 초자화 동결 시 높은 생존율과 부화배 형성율을 얻을 수 있음을 보여준다.