Lyophyllum decastes has been used for culinary purpose. The present study was conducted to evaluate the antioxidant and anti-inflammatory effects from methanol, acetone, and hot water extracts of L. decastes fruiting bodies. The acetone and methanol extracts showed the higher 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazy radical scavenging activities than that of the hot water extract at 0.5–2.0 mg/mL and was comparable to the BHT, the positive control. The ferrous ion chelating effects of the mushroom extracts at 0.5–2.0 mg/mL were significantly higher than that of BHT. The reducing power of acetone extract (2.12) was significantly lower than that of BHT (2.73) at 2.0 mg/ mL. The mushroom extracts also showed inhibitory effects on production of nitric oxide (NO), and expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS) in lipopolysaccharide-induced murine macrophage cells in a concentration dependent manner. In vivo anti-inflammatory experiment on carrageenan-induced hind-paw edema of rat model, the acetone extract of the mushroom significantly suppressed the carrageenan-induced rat hind paw edema of rats in a dose dependently. The results suggest that the fruiting bodies of Lyophyllum decastes are a good natural resource of antioxidant and anti-inflammation.

본 연구에서는 기 확보한 균주에 대하여 활성이 좋은 균주를 1차 선발하였고, 활성이 우수한 균주는 변이체 유도법을 통한 육종으로 17종의 균주를 새로 확보한 뒤 반복적인 현장 재배를 통해 복토와 수피 사용이 필요 없는 재배실험을 진행하였다. 1차 재배실험에서는 복토와 수피의 사용 없이도 재배가 가능한 품종 선정에서 주배지로서 후숙 미송톱밥의 사용이 좋은 결과를 보였으며, 2차로 이어서 후숙 미송톱밥과 영양제 실험으로 미강, 밀기울, 면실피등을 배합하여 재배 실험을 반복적으로 진행함으로서 실험결과 발효 미송톱밥 71.0%와 영양제로 밀기울을 29.0%를 사용한 실험군에서 가장 균사 성장이 빠르고 복토와 수피 사용 없이 잿빛 만가닥버섯 재배할 수 있음을 확인하였다. 또한 육성된 품종에 따라 동일한 조건에서 갓의 색깔과 모양에서 차이가 있음을 확인하였으며, 이상의 실험결과 복토와 수피사용 없이 잿빛 만가닥버섯을 재배할 수 있는 있음이 가능함을 반복적인 재배실험을 통해 확인하였으며, 향후 첨가제 등 보충 실험을 통해 수확량 증가와 시장에 적합한 모양의 규격을 설정하는 등 현실적으로 경제성을 갖춘 잿빛 만가닥버섯을 재배할 수 있을 것으로 기대한다.

잿빛만가닥버섯의 인공재배법을 개발하고자 국내·외에서 수집한 균주의 균사배양 특성을 검정하고 자실체 발생을 위한 다양한 재배방법을 구명하였다. 잿빛만가닥버섯 9균주를 공시하여 선발한 결과는 다음과 같다. 균사생장속도가 빠르고 균사밀도가 양호한 SPA 202 및 SPA 205균주를 선발하였으며 선발배지는 BC배지가 가장 양호하였다. 인공재배시 참나무톱밥과 포플러톱밥이 균사생장속도가 가장 빠르고 균사밀도가 가장 치밀하였으며 최적배지는 발효톱밥을 사용한 참나무톱밥(Quercus aliena )40%+포플러톱밥(Populus deltoides )40%+미강(Rice bran)10 %+밀기울(Wheat bran)10% 배지로서 이 때균사배양적온은 20-25℃이며 배양기간은 접종 후 50일, 복토 후 7일이 소요되었으며, 원기형성 및 자실체생육기간은 17-18℃에서 각각 10~11일, 7~8일이 소요되었다. SPA 202균주의 수확적기의 자실체는 갓의 직경이 60㎜, 대의 길이가 67㎜이며, 수량은1,100㎖병당 130g이었으며 SPA 205균주의 수확적기의 자실체는 갓의 직경이 51㎜, 대의 길이가 81㎜, 129g이었다. 잿빛만가닥버섯 인공재배 결과, 배지는 발효톱밥 처리구가 미발효톱밥 처리구보다 수량이 많아 SPA 202균주와 SPA 205균주가 가장 양호한 균주로 선발되었다.

인공재배된 만가닥버섯(Hypsizygus mamoreus )과 잿빛만가닥버섯(Lyophyllum decastes )을 ITSⅠ^Ⅳ 부위의 염기서열에 의해 종속간 유연관계 및 RAPD 다형성을 분석하였다. ITSⅠ^Ⅳ영역부위 종속간 유연관계에서 Group1(SPA 100, 101, 102)은 만가닥버섯 에 속하였으며, Group2(11균주) 잿빛만가닥버섯 의 대조 분리군 11균주는 동일한 종으로 동정되었다. ITS결과 14개 균주 시 4개 그룹으로 분류되었으며, ClusterⅠ과 ClusterⅡ는 58%의 유사도를 ClusterⅢ과 ClusterⅣ는 41%의 유사성을 보였다. 또한 인공재배한 잿빛만가닥버섯의 종 다양성을 분석하기위해 RAPD를 수행한 결과 가장 수량이 양호하며 우량계통인 SPA 202는 잿빛만가닥버섯인 Lyophyllum decastes SPA 203과 그룹화 되었으며 75%의 유사성을 보여주었고, Lyophyllum decastes 공시균주인 SPA 103과 SPA 104의 유사성은 65%로 나타났다.

These experiments were carried out to determine the optimal culture conditions for nine collected strains of Lyophyllum decastes(Fr.:Fr.)Sing. Bottle cultivation was used as a technique to characterize and develop new substrates as possible substitutes of sawdust. Nine kinds of Lyophyllum decastes were selected SPA 202 and SPA 205 fungus that mycelium grow fast and have high density. All cultures were incubated on Burke compost for 20 days. Growth of hyphae was optimal at temperatures between 20-25℃ and pH of 5.0-6.0. The best nutrient additives tested were lactose, yeast extract and MgSO4- 7H2O as carbon source, nitrogen source and mineral salt respectively. Collected strains of Lyophyllum decastes were incubated for 7 to 20 days after inoculation on agar medium followed by 45 to 75 days on sawdust substrate. The ideal optimal moisture percentage in sawdust media was 65%. The optimal species used was Quercus aliena , followed by Populus deltoides. Addition of 10% of Rice bran to Quercus aliena sawdust makes mycelial growth fast. Spawn running on the fermented sawdust media required 50 days at 20 to 25℃ and another 7 more days after covering the media with soil for promoting formation of fruitbodies. This was followed by cultivation for 10 to 11 days at 17 to 18℃ for initiation and 7 to 8 days for development of fruitbodies. The length of pilei and stipes which were harvested in optimal stage showed 60㎜ and 67㎜, respectively. Yields of strain SPA 202 grown on fermented sawdust medium could be up to 130g. The yields of strain Lyophyllum decastes used for fermented composition sawdust was the most appropriate recording 86% among them especially in SPA 202 artificial cultivation. Among 14 pleurotus eryngii , to identify the similarity ITS sequences and RAPD polymorphism are analyzed. ITS region sequences of 14 strains ,which have similar reqion sequences SPA 100, 101, 102 belong to Hypsizygus . 11strains belong to Lyophyllum decastes group. After classify 3 subgroup genus relationships among is analyzed. To analyzing diversity of artificial cultivated mushroom, after RAPD analysis excellent strains SPA 202 and SPA 203 show 75% similarity and pleurotus eryngii of Lyophyllum decastes SPA 103 and SPA 104 show 65%. As a result , SPA 202 which is cultivated in nature is estimated to Lyophyllum decastes by molecular biology method.

인공재배된 공시균주 14개에서 분자생물학적 동정을 확 인하기 위하여 ITS부위의 염기서열을 사용하여 종속간 유연 관계 및 RAPD 다형성을 분석하였다. ITS영역부위 종속간 유연관계는 염기서열의 유사성이 SPA 100, 101, 102은 만 가닥버섯인 Hypsizygus 에 속하였으며, 11균주는 잿빛만가 닥버섯 Lyophyllum decastes 그룹에 속하였고 다시 3개의 subgroup으로 분류되어 속간 유연관계로 분석되었다. 또한 인공재배한 버섯의 종 다양성을 분석하기위해 RAPD를 수행 한 결과 가장 수량이 양호하며 우량계통인 SPA 202는 SPA 203와 75%의 유사성을 보여주었고, Lyophyllum decastes 의 공시균주인 SPA 103과 SPA 104와는 유사성이 65%로 나타났다. 결론적으로, 자연에서 채집하여 인공재배가 확립 된 SPA 202는 분자생물학적 분석 방법에 의해 Lyophyllum decastes 로 추정 할 수 있다.

잿빛만가닥버섯의 인공재배법을 개발하고자 자연에서 채 집, 분리된 균주의 배양적 특성을 검정하고 자실체 발생을 위 한 다양한 방법을 수행하였다. 잿빛만가닥버섯의 9균주를 공시하여 선발한 결과, 균사생장이 빠르고 균사밀도가 좋은 SPA 202, SPA 205균주를 선발하였다. 한천배지의 경우는 BC배지에서 가장 양호하였다. 톱밥발효배지에서 인공재배 하였을 때 20-25℃에서 균배양은 종균 접종 후 50일, 복토 후 7일이 소요되었으며, 원기형성 및 초발이는 17-18℃에 서 7-8일이 소요되었다. SPA 202의 수확적기는 갓이 형성 되기 전의 자실체는 갓 60㎜, 대 67㎜ 으로 단단하였고, 인공 재배한 수량은 130g이었다. 인공재배에서 일반톱밥보다 발 효톱밥이 수확량이 86% 증가하였으며 SPA 202가 가장 양 호한 것으로 나타났다.