목 적: 세균성 각막염 치료에 주로 사용되는 퀴놀론계 항균제의 감수성 저하로 나타난 Serratia marcescens 균주에 대해 내성기전에 관여하는 주요 target인 gyrA와 parC 유전자를 분석하여 감수성 저하의 원인을 파악하고자 한다. 방 법: 퀴놀론계 항균제 감수성 저하 Serratia marcescens 균주들을 대상으로 genomic DNA를 추출 하여 PCR를 통해 증폭한 후 gyrA와 parC 유전자 QRDR의 DNA sequencing을 분석하였다. 결 과: parC 유전자 분석에서 SM5 균주는 Tyr51→His, Thr59→Asp으로 이중 아미노산 변이가 나타났 으며, SM6 균주는 Thr59→Asp으로, SM13 균주는 Tyr51→His으로 단일 아미노산 변이가 나타났다. 그리고 3 균주 모두 gyrA와 parC 유전자에 다수의 silent mutation이 관찰되었다. 결 론: target 유전자의 변이로 인한 항균제의 감수성이 저하되고 있다는 것을 확인할 수 있었으며, 특히 parC 유전자가 퀴놀론계 항균제의 감수성 저하를 일으키는 주요 표적임을 확인할 수 있었다. 앞으로도 세균성 각막염 치료에 퀴놀론계 항균제의 사용이 계속될 것이며, 많은 내성 균주들이 발생할거라 예측된다. 따라서 항균제를 사용할 때 내성에 대한 주의가 반드시 필요할 것으로 사료된다.

A reversed-phase high-performance liquid chromatography with tandem mass-spectrometric detection was developed and validated for the simultaneous analysis of 13 quinolones (orbifloxacin, sarafloxacin, marbofloxacin, ofloxacin, enrofloxacin, danofloxacin, pefloxacin, ciprofloxacin, norfloxacin, difloxacin, oxolinic acid, flumequine, nalidixic acid) in pork. The drugs were extracted from homogenized sample using acidic buffer (2% trichloracetic acid) and acetonitrile with ethyl acetate. Analysis was performed by liquid chromatograph with tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) in positive mode for all quinolones. Mass spectral acquisition was performed in the multi reaction monitoring mode (MRM), selecting two structurally significant transitions per compound. Good linear relationship (R2=0.999) was observed at 6 concentrations of 2.5～100 ng/g. Satisfied recoveries (73.3～105.4%) of all quinolones were demonstrated in spiked pork at three levels from 5 to 20 ng/g. The limits of quantitation (LOQs) for quinolones ranged from 0.25 to 5.0 ng/g.

본 논문에서는 식품 중 퀴놀론계(QNs) 합성항균제(marbofloxacin, norfloxacin, danofloxacin, ciprofloxacin, enrofloxacin, difloxacin, sarafloxacin, oxolinic acid 그리고 flumequine) 9종을 분석하기 위하여, 액-액 추출 과정을 거쳐서 형광검출기가 장착된 액체크로마토그래피를 이용하여 QNs를 효율적으로 동시분석하는 방법을 확립하였다. 컬럼은 Zorbax Eclipse XDB-C8(150 mm×4.6 mm, 5 μm), 이동상 용매는 200 mM ammonium acetate buffer (pH 4.5)와 ACN로 기울기 용리를 사용하였으며, 유속은 1.5 ml/min, 그리고, 주입량은 10 μl로 설정하여 분석하였다. 확립 된 분석조건으로, 표준검정 곡선은 10-500 μg/kg의 농도범위에서 상관계수가 0.9989 이상의 양호한 직선성을 나타내었으며, 회수율은 50, 100 그리고 500 μg/kg의 농도에서 89.6-106.5 %로, 향상된 추출효율을 나타내었다. 검출한계는 1-16 μg/kg이었고, 정량한계는 3-47 μg/kg이었으며, 일내(intra-day)와 일간(inter-day) 정밀도(CV%)는 0.2-15.0 %, 0.5-11.7 %이었다. 따라서, 확립된 분석방법은 광어 및 계란 중의 QNs을 효과적으로 분석하는데 이용될 수 있을 것으로 사료된다.

1. 닭고기에서 4종의 플루오로퀴놀론계 합성항균제(ofloxacin, norfloxacin, ciprofloxacin, enrofloxacin)를 액상추출법으로 추출하여 형광검출기와 HPLC를 이용하여 동시 정량분석하는 방법을 확립하였으며 분석조건으로서 컬럼은 Symmetry C18(250×4.6 mm id, 5 ㎛), 이동상은 0.4% triethylamine 및 0.4% phospholic acid 수용액, methanol 및 acetonitrile 혼합용액(800:100:100, v/v/v)을 사용하였으며, 형광검출기는 여기파장 278 nm, 측정파장 456 nm으로 그리고 유속은 1.0 ml/min., 주입량은 50 ㎕로 하였다. 확립된 분석조건으로 측정한 ofloxacin, norfloxacin, ciprofloxacin, enrofloxacin 표준품의 표준곡선식에서 모두 상관계수 0.999이상의 양호한 직선성을 보였으며, 첨가한 닭고기의 크로마토그람에서도 각각의 nfwlfquf 분리시간대에 방해 피크 없이 양호한 분리도를 나타내었다. 0.05~0.2 ㎍/g 첨가한 시료에서 평균 회수율은 ofloxacin 92.0~95.4%, norfloxacin 84.2~87.3%, ciprofloxacin 78.3~82.2%, enrofloxacin 91.3~95.3%이었으며 변이계수(CV)는 2.7~9.4%이었다.4종의 동시분석법의 검출한계 및 정량한계는 각각 ofloxacin 23.5 ppb, 35.3 ppb, norfloxacin 3.4 ppb, 5.1 ppb, ciprofloxacin 3.0 ppb, 4.5 ppb, enrofloxacin 2.5 ppb, 3.8 ppb 수준이었다. 2. 인천 지역에서 돛구한 닭고기 총 1,523수를 EEC-4-plate법으로 검사한 결과 양성반응을 보인 닭고기는 15수(육계 10, 토종닭 5)였으며, HPLC를 이용한 정밀검사결과 육계 5수에서 ciprofloxacin이 불검출~0.04 ppm, enrofloxacin이 0.01~0.69 ppm수준으로 검출되었으며, 토종닭 5수에서는 ciprofloxacin이 0.02~0.12 ppm, enrofloxacin이 0.36~6.79 ppm수준으로 검출되었다.