In general, zona pellucida (ZP) of the blastocyst has to be removed first, then either isolated the inner cell mass (ICM) or ZP-removed whole blastocyst, which is then cultured on the feeder layer to induce ICM outgrowth for the generation of embryonic stem cells (ESC). However, it is unclear whether ICM isolation before seeding on feeder layer is beneficial or not because the interaction between ICM and trophoblasts may affect cellular growth and/or pluripotency during the culture on the feeder. In the present study, two ZP removal methods (mechanically by splitting with a 28-gauge needle versus chemically by the treatment of acid-Tyrode's solution) and two ICM isolation methods (ZP-free whole blastocyst seeding versus mechanical isolation of ICM) were evaluated for the efficient isolation and culture of putative parthenogenetic bovine ESC. The number of maintained outgrown colonies was counted in each experimental group. As the result, mechanical removal of ZP with a needle and followed by whole ZP-free blastocyst seeding on feeder cells tended to attach more on the feeder layer and resulted in more outgrown colonies with its simple and less time-costing benefits. Currently we are generating ESC lines in HanWoo cattle by using this method for initial outgrowth of the parthenogenetic bovine blastocysts.

Optimization of the preimplantation mammalian embryo culture condition was widely focused on refining medium composition under the name of chemically defined media. However, recent research revealed that the alteration of physical environment can be a crucial factor to a successful embryo development. In this study, under the same embryo density, a novel culture device named oil-free micro tube culture (MTC) system was evaluated using porcine parthenogenetic embryos. The activated oocytes were placed into the 0.2 ml thin-wall flat cap PCR tube and cultured to the blastocyst stage. As a preliminary step, embryo density and culture medium volume were optimized under a standard drop culture system. The optimal embryo density range for in vitro culture was 0.5 embryos per in drop (20.5%) and 1.0 embryos per in drop (20.6%). Based on these results, we compared drop culture system and 'MTC' system in terms of the developmental rate to the blastocyst stage. In medium volume, the 'MTC' system showed similar blastocyst formation rate when compared with drop culture system (20.2% versus 20.5%, respectively) while the 'MTC' system showed lower blastocyst formation rate than drop culture system in one (12.7% versus 20.0%, respectively). Therefore the MTC system may be an alternative incubation system for short-distance embryo transport without carrying the incubator and this provides novel embryo culture device to clinical veterinary embryologists.

This study was designed to investigate the effect of kinetin on in vitro development of parthenogenetic porcine oocytes exposed to demecolcine prior to activation. In vitro matured metaphase II stage oocytes were incubated in 0 or 2 g/ml demecolcine supplemented defined culture medium for 3 h and the oocytes were activated electrically. The parthenogenetic porcine embryos were then cultured in 0 or 200 M kinetin supplemented defined culture medium for 7 days. Regardless of demecolcine treatment, kinetin supplementation increased blastocyst rates significantly (7.0% versus 12.1% and 4.9% versus 8.5%; Control versus Kinetin and Demecolcine versus Kinetin + Demecolcine, respectively, p<0.05). Demecolcine treatment before activation tended to decrease blastocyst rates regardless of kinetin supplementation although it is not statistically significant. Total cell numbers in the blastocysts also tended to be elevated in embryos when supplemented with kinetin, however only the result between Kinetin and Demecolcine groups is statistically significant (37.6 7.2 versus 28.1 9.5, respectively, p<0.05). In conclusion, the present report shows that kinetin enhances developmental competence of parthenogenetic porcine embryo regardless of demecolcine pre-treatment before parthenogenetic activation when they were developed in defined culture condition.

This study was designed to investigate the effect of essential amino acids (EAA) and/or non-essential amino acids (NEAA) on the development of parthenogenetic and somatic cell nuclear transfer (SCNT) porcine embryos in vitro. To evaluate the timing of amino acids supplementation, activated oocytes were cultured in NCSU23-PVA with EAA, NEAA or NEAA+EAA (AAs) during specific periods as below: EAA, NEAA or AAs were supplemented during Day 0 to 6 (whole culture period: ALL), Day 2 to Day 6 (post-maternal embryonic transition period: POST-MET), Day 5 to Day 6 (post-compaction period: POST-CMP), Day 0 to Day 2 (pre-maternal embryonic transition period: PRE-MET), or Day 0 to Day 4 (post-compaction period: PRE-CMP). Supplementation of NEAA decreased cleavage rates in PRE-MET and PRE-CMP and also decreased blastocyst rates in POST-CMP. On the other hand, EAA significantly enhanced blastocyst formation rate in POST-MET and no detrimental effect on embryonic development in other groups. Interestingly, NEAA and EAA had synergistic effect when they were supplemented to the medium during whole culture period. Supplementation of AAs also enhanced SCNT porcine embryo development whereas BSA-free medium without AAs could not supported blastocyst formation of SCNT embryos. In conclusion, existence of EAA and NEAA in defined culture medium variously influences the development of parthenogenetic and SCNT porcine embryos, and their positive effect are only occurred when both EAA and NEAA are supplemented to the medium during whole culture period. Additionally, AAs supplementation enhances the blastocyst formation of SCNT porcine embryos when they are cultured in the defined condition.

우리나라 도로중 PMS가 구축된 도로는 현재, 고속도로와 국도가 있다. 그러나 많은 시(市)에서 도로의 효율적인 관리를 위해 요구되는 시도로 PMS는 아직 없는 실정이다. 따라서, 본 논문에서는 시단위에 적용가능한 Prototype PMS 전산시스템을 개발 제시하였다. 개발한 PMS는 기본적으로 PC 수준에서 운영 가능하도록 구성하였으며 GIS 기능을 이용하여 사용자가 쉽게 포장상태나 유지보수 현황 및 계획을 이해할 수 있게 하였다. 본 PMS의 기능상 구성은 크게 조회, 분석, 자료관리, 출력 부분으로 구축하였다. 특히, 분석과정의 주논리(보수우선순위결정, 보수공법결정)부분은 필요시 사용자가 각 항목의 criteria 값을 수정 할 수 있게 하여 시스템운영이 경직되지 않도록 배려하였다. PMS 데이터베이스의 항목은 시도로 PMS의 규모 및 목적을 고려하여 선정하였다. 또한 PMS에서 사용된 도로 관리길이 및 위치 지정체계는 노선을 기준으로 기본 100m길이의 section으로 분할관리하였으며, 위치 지정체계 방식은 reference points 방식을 기본으로 사용하였다.

우롱차의 에탄올 추출 특성을 조사하기 위하여 추출농도 및 온도별로 우롱차의 품질에 미치는 유효성분들을 분석, 조사하였다. 우롱차엽의 에탄올 추출물은 추출시 80~85℃, 50%이상의 에탄올 농도에서 대체적으로 높은 수율을 나타내었다. 추출물의 유효성분 분석에서 유리당은 sucrose가 37.2~55.0 mg/100 g로 가장 함량이 많았으며 반면에 arabinose는 3.3~5.6 mg/100g로 가장 낮은 함량을 나타내었다. 에탄올 추출물의 유기산 함량은 furmaric acid가 0.2477~0.7842 mg/g, citric acid가 0.2047~0.6204 mg/g malic acid가 0.1619~0.4382 mg/g로 주요 유기산으로 나타났다. 유리아미노산은 aspartic acid, glutamic acid, serine, histidine 등 15종류가 나타났으며 그 중에서 proline이 0.693~1.681 mg/g으로 가장 많이 나타났고 tyrosine, glutamic acid, valine, aspartic acid 등도 다른 유리아미노산보다 많은 양을 보였다. 추출조건에 따른 탄닌의 함량은 물과 25% 에탄올농도에서 38.6, 38.5 μg/100 g을 나타냈고 추출용매의 농도가 높을수록 탄닌의 함량은 낮아져 95% 에탄올 농도에서는 24.2 μg/100 g을 나타내었다. 카페인의 함량은 추출용매의 차이에도 뚜렷한 변화를 나타내지 않았고 그 함량은 12.65~14.08 mg/g이었으며 ascorbic acid의 함량은 물과 25% 에탄올농도에서 6.95 μg/g과 6.50 μg/g을 나타냈고 추출용매의 농도가 높아질수록 ascorbic acid의 함량은 낮아져서 95% 에탄올에서는 2.78 μg/g을 나타내었다. 추출용매의 농도에 따른 관능검사 결과 떫은 맛과 쓴맛이 전체적인 기호도에 가장 높은 상관계를 나타내었으며 에탄올 농도를 25%로 하여 추출한 우롱차의 전체적인 기호도가 가장 높게 나타났다.

본 연구에서는 생강의 유효성분을 비교분석하기 위하여 한국재래종생강과 조직배양생강의 일반성분, 무기성분, 유리당, 지방산, 휘발성 성분, 그리고 6-gingerol과 6-shogaol 등을 분석하여 평가하였다. 일반성분(조회분, 조지방, 조단백질, 탄수화물)함량은 한국재래종 생강이 조직배양생강보다 다소 높게 나타났다. 무기성분(Cu, Fe, Mn, Zn) 함량은 조직배양생강이 한국재래종 생강보다 높게 나타났다. 무기성분 중에서 가장 많은 것이 K이었으며, P와 Mg, Na, Ca 순으로 많았다. 유리당(fructose, glucose, sucrose)은 조직배양생강이 한국재래종 생강보다 높게 나타났다. 생강은 C14 미만의 지방산이 주요 지방산이었다. Citral 성분은 한국재래종 생강이 조직배양생강 보다 생강의 고유향이 더 강하게 나타났으며, gingerol 함량은 경정배양에 의하여 증가하였다.

쑥 수집종 80개를 대상으로 형태적 형질과 RAPD 분석을 하였고, 유전적 다양성을 이용하여 유연관계를 분석하고 이를 기초로 품종군을 분류하였다. 주요 형태적 형질을 이용하여 쑥 수집종에 대한 군집분석 결과, 군집간의 치대거리 0.82를 기준으로 하여 분류하였을 때 5개 군으로 분류하였는데, I군에 10개 (15%), II군에 30개 (37.5%), III군에 20개 (25%), IV군에 3개 (4%), V군에 4개 (5%)를 나타내었다. RAPD분석에 이용한 10-mer primer 에 대하여 98개의 밴드를 얻었고, 그 중 다형성을 보인 밴드는 68개로 69%였는데, 선발된 Primer에서 증폭된 밴드 수는 8~11개로 다양하였으며, 평균 9.8개였다. RAPD에 의한 군집 분석에서 유연계수 0.63을 기준으로 하여 구분한 결과 6개의 군으로 분류되었다. I, II군이 각각 전체의 34%, 36%를 차지하여 가장 큰 군으로 분류되었고, 나머지 III~V군은 모두 소군으로 15%가 속하였다. 특히 I군에는 약쑥이 많았고, II군에는 뺑쑥이 많이 분포하였다.