혈청을 이용한 분석은 다양한 질병 진단의 지표로 이용 된다. 혈청의 분리 방법, 저장시간 및 온도에서 부적절한 혈액 처리는 사이토카인의 농도와 생화학 검사결과에 영 향을 줄 수 있다. 본 연구에서는 한우를 공시하여 혈청 분 리 시기, 저장 시간과 온도가 사이토카인 및 생화학 검사 결과에 미치는 영향을 조사 하였다. 혈액은 경정맥에서 채 취하여, 26±3℃에서 1~2시간 방치 후 분리조건을 다음과 같이 4개의 그룹 (a-d)으로 나뉘어 진행하였다. a) 혈청 분 리하여 보관(대조구), b) 혈청분리 후 아이스박스 2시간 방 치 후 보관, c) 아이스박스 2시간 방치 후 혈청분리, d) 24 시간 4℃ 방치 후 혈청분리, 이러한 조건으로 분리된 혈청 은 분석 전까지 –70℃ 보관 하였다. 혈청 분리시기, 아이스 박스 또는 4℃ 저장 시간 및 온도에 따라 IFN-γ는 유의적 인 차이를 보이지 않았고, TNF-α의 농도는 그룹 a-c에 비 해 그룹 d에서 유의적(p<0.05)으로 낮아졌다. 또한 albumin, total protein의 농도는 그룹 a보다 d에서 유의적 (p<0.01)으로 높았고, magnesium, calcium에서도 유사한 결과를 보였다(p<0.05). 그러나 G-GTP의 경우 다른 그룹에 비해 그룹 d에서 유의적(p<0.05)으로 가장 낮아졌다. 그러 므로 시료채취 시 농가와 실험실의 거리를 고려하여 온도와 저장시간이 혈청 내 사이토카인 및 생화학 농도에 미치 는 영향을 최소화 하여 연구 수행을 진행해야 될 것으로 사료된다.

소에서 설사 등의 소화기질환, 폐렴 등의 호흡기질환, 유산 등의 번식장애를 유발하는 소 바이러스성 설사병(Bovine Viral Diarrhea, BVD)은 소 사육농가에서 경제적인 손실을 입히는 대표적인 생산성 저하 질병 중의 하나인데, 특히 유산, 사산 및 수태율 저하를 유 발하여 번식우 사육농가에 직접적인 피해를 입히고 있는 실정이다. 농림축산검역본부에 서는 BVD로 인해 1마리당 50,000원 정도의 손실로 연간 손실액이 최소 1천억 이상이라 고 추정하였고, 미국은 급성 BVD 감염으로 소 1마리당 약 400달러의 피해가 발생한다고 할 만큼 소 사육농가에 막대한 피해를 입히고 있지만, 우리나라에서 아직 법정 가축전염 병으로 지정되지 않아 체계적인 발생 상황이 확인되지 않고 있는 실정이다. 본 연구에서 는 한우 및 젖소 사육 농가를 대상으로 소 바이러스성 설사의 항원 양성률을 분석하여 소 바이러스성 설사병의 발생 현황을 확인하고자 하였다. 본 실험을 위해 4개도(강원, 전 북, 경남, 제주) 9개 목장에서 사육하고 있는 한우 송아지 및 젖소 육성우를 대상으로 분 변을 이용하여 PCR 방법으로 농장별, 생후 일령별 항원 양성률을 조사하였다. 한우 송아 지의 BVD 바이러스 항원 양성률을 조사한 결과 전체 조사 두수의 60.0%가 양성을 나타 내었고, 농장별로는 10.0%∼81.8%를 나타내어 농장별로 양성률에 많은 차이를 나타내었 다. 젖소 육성우의 경우 28.7% 양성률을 나타내었는데, 농가별로는 0%∼65.0%로 한우 송 아지와 마찬가지로 농장별로 차이를 보이고 있었다. 한우 송아지의 생후 일령(주령)별 양 성률을 조사한 결과 조사된 한우 송아지의 54.8%가 항원 양성률을 나타내었는데, 1주령 80.0%, 2주령 33.3%, 3∼4주령 45.5%, 5∼8주령 60.0%, 9주령 이상 50.0%를 나타내어 송 아지의 전체 연령대에 다양하게 항원 양성반응을 나타내었다. 소에서 번식장애 등의 손실 을 입히고 있는 BVD는 우리나라에서 예방백신이 개발되어 활용되고 있지만 소 사육농가 에서는 구제역 등과 같은 전염병에 비해 현실적으로 피해를 실감하지 못하고 있는 질병 이기도 하다. 따라서 본 연구 결과를 바탕으로 농가에서 임신 예정우, 송아지를 대상으로 예방백신 접종을 권장함으로써 그 피해를 경감시킬 수 있는 질병으로 사료된다.

Oxygen consumption is a useful parameter for evaluating mammalian embryo quality, since individual bovine embryos was noninvasively quantified by scanning electrochemical microscopy (SECM). Recently, several approaches have been used to measure the oxygen consumption rates of individual embryos, but relationship between oxygen consumption and pregnancy rates of Hanwoo following embryo transfer has not yet been reported. In this study, we measured to investigate the correlation between oxygen consumption rate and pregnancy rates of Hanwoo embryo using a SECM. In addition to, the expression of pluripotent gene and anti-oxidant enzyme was determined using real-time PCR by extracting RNA according to the oxygen consumption of in vivo embryo. First, we found that the oxygen consumption significantly increased in blastocyst-stage embryos (blastocyst) compared to early blastocyst stage embryos, indicating that oxygen consumption reflects the embryo quality (Grade I). Oxygen consumption of blastocyst was measured using a SECM and total cell number of in vitro blastocyst was enumerated by counting cells stained by propidium iodide. The oxygen consumption or GI blastocysts were significantly higher than those of GII blastocysts (10.2 × 1015/mols—1 versus 6.4 × 1015/mols—1, p<0.05). Total cell numbers of in vitro blastocysts were 74.8, 90.7 and 110.2 in the oxygen consumption of below 10.0, 10.0∼12.0 and over 12.0∼1015/mols—1, respectively. Pregnant rate in recipient cow was 0, 60 and 80% in the transplantation of embryo with the oxygen consumption of below 10.0, 10.0∼12.0 and over 12.0 × 1015/mols—1, respectively. GPX1 and SOD1 were significantly increased in over —10.0 group than below 10.0 groups but in catalase gene, there was no significant difference. On the other hand, In OCT-4 and Sox2, pluripotent gene, there was a significant difference (p<0.05) between the below-10.0 (0.98 ± 0.1) and over 10.0 (1.79 ± 0.2). In conclusion, these results suggest that measurement of oxygen consumption maybe help increase the pregnant rate of Hanwoo embryos.

The objective of this study was to analyze the reproductive ability by strains and age in weeks of Korean native chicken and to compare the egg weight by body weight of Korean native chicken cock. Six strains (L=black, W=white, O=Ogol chicken, G=gray, R=red, and Y=brown) of Korea native chicken were used in this study. The fertility of strains W and Y were 89.6% and 86.3% respectively, and significantly higher than the other strains (p<0.05). Strains R and W showed high hatchability (90.7%, 89.6%, respectively) and strains L and O showed low rate (78.9%, 87.3%, respectively). There was no significant difference by weeks in each strain. The fertility was the highest at 28 weeks of age and the hatchability showed the highest value at 26 weeks of age. Egg weights of strains L and R were significantly high (p<0.05) but strains W and G were significantly low (p<0.05). Egg weight was higher in 1.65 ㎏ of Korea native chicken cock than in 2.00 ㎏ of Korea native chicken cock. These results suggest that the using average weight (1.65 ㎏) of Korea native chicken cocks could have an advantage for the feed cost savings and productivity improvement.

The study was conducted to investigate the comparison of pregnancy rate and transferable embryos produced by genetically superior Korean cows (Hanwoo) of livestock farms. Eighteen Hanwoo donors were superovulated with gonadotropin for 4 days combined with Progesterone Releasing Intravaginal. Embryos were recovered 7 days after the second insemination by flushing the uterus with embryo collection medium. No differences were observed in the efficiency of rate of superovulation in groups A (low nutrition) and B (highnutrition) it was observed to be 100.0% and 87.5%, respectively. The mean numbers of total embryos were 10.8±3.4 and 8.9±2.5, and transferable embryos were 7.5±3.3 and 4.0±1.5 in groups A and B, respectively. The pregnancy rates after embryo transfer were 23.5%, 20.0%, C 80.0% and 55.6% in farm A, B, C, and D, respectively. In conclusion, results suggest that superovulation could be used quite effectively to raise superior Hanwooembryos. However, physical and biological condition of recipients greatly affects the rate of pregnancy.

The objective of this study was to investigate the comparison of transferable embryos and pregnancy rate between Hanwoo and Chickso. The results obtained were as follows: No differences were observed in the efficiency of superovulation rates on Hanwoo 78%, and Chickso 85%, respectively. The mean number of total embryos are each 14.76± 2.16 and 6.23±1.07. So the mean number of transferable embryos are each 10.94±1.91 and 4.58±1.05. In addition, the mean number of total Hanwoo embryo from <10 and 10≤ of corpora luteum was 0.50±0.50, 11.56±1.92, respectively. In case of Chickso, The mean number of transferable embryo from <10 and 10≤ of CL was 2.75±1.39, 6.00±1.00, respectively. The pregnancy rates were Hanwoo 40%, and Chickso 37% following transfer of fresh embryos produced in vivo. Also, the pregnancy rates of Chickso 60% were significantly greater (p<0.05) than the Hanwoo 42.48% following transfer of following transfer of frozen embryos, respectively. In conclusion, these results suggest that Chickso may be effectively used for transferable embryos production in Hanwoo. Although the transferable embryos number was not enough, it seems the Chickso greatly affect pregnancy rate. The results indicated that the possibility of transferable embryos from Chickso for embryo transfer could be confirmed in this study. Based on the present findings, it was suggested that it is very important to evaluate in vivo embryo production and pregnancy rate of embryo transfer following superovulation for effective Hanwoo and Chickso production.

닭 정액의 주요성분인 glutamine은 정장의 주요 성분으로 정자의 생리 활성에 매우 중요 한 것으로 알려져 있으며 조류 정액 희석액의 주요성분으로 이용되어져 왔다. 그러나 glutamine은 액상의 배양액에서 변성이 일어날 수 있어 세포배양에는 alanyl glutamine을 이용하 여 장기 세포배양에 이용되고 있다. 본 연구에서는, alanyl glutamine을 이용하여 개발된 희 석제를 이용하고 닭 정액의 냉장보존에 이용하였으며, 닭 정자의 장기 생존성에 미치는 영 향을 조사하였다. 국립축산과학원 가축유전자원시험장에서 사양관리중인 오골계 수탉 또 는 레그혼에서 복부 마사지법으로 채취된 정액을 이용하였다. 채취한 정액은 96 mM L- Glutamine 또는 Alanyl Glutamine을 함유하는 희석액에 각각 1:8의 부피비율로 상온에서 희석하 여 상업용 냉장고와 4℃로 조절된 BOD 배양기에 보존을 실시하였다. 냉장되는 온도의 저 하 속도를 낮추기 위하여 상온에서 희석하는 온도와 동일한 온도의 증류수 300 ml을 비이 커에 담고 물위에 1.5 ml E-tube에 담아서 파리필름으로 밀봉하였다. 희석된 정자의 활력은 상업용 냉장고에 보존할 경우, 4일차까지 75.6%의 활력정자가 유지 되었으나 5일 이후에는 급격히 생존성이 저하되었으며 6일째에는 활력 정자의 수가 18%로 낮게 나타났다. 한편, BOD 배양기에서 보존된 동일한 정자는 9일까지 약 73%의 활력정자가 유지되었으며, 10일 이후에는 활력 정자의 수가 급격히 감소되는 현상을 관찰하였으며, 15일째에는 약 20%의 정자 활력이 유지되는 현상을 관찰하였다. 이러한 정자의 활성 유지는 정자의 미토콘드리 아 에 필요한 글루타민 에너지 공급원을 안정적으로 공급하는 기능에 의하여 유지 되는것으로 추정되며 특히 hyper activated sperm의 비율을 줄여주어 정자군의 노화를 방지할 수 있는 효과가 있는 것으로 추정되었다. 그러므로 조류 정액을 냉장 보존할 때, 알라닐글루타민을 희석액의 주요 성분으로 이용될 수 있음을 보여주고 있다.

소의 수정란 이식기술은 우수한 유전 형질을 가진 개체를 효과적으로 증식 시킬 수 있고, 형질이 동일한 다수의 자축을 단시간 내에 생산이 가능하므로 가축의 능력개량에 매우 유 용하게 이용할 수 있다. 최근, 일시적인 저영양 처리가 호르몬제 투여에 의한 과배란 유도 에 앞서, 한우 공란우 체내수정란 생산효율을 향상시킨다는 보고가 있다. 본 연구는 국립축 산과학원 가축유전자원 시험장에서 사양.관리 중인 한우를 공시동물(53두)를 이용했다. 총 16번의 과배란유도 처리를 시행하였고, CIDR삽입 1주전부터 채란 및 이식까지 23일간 번 식우 사양프로그램에 기준해 대조구(19두)는 배합사료 1 kg, 고영양구(13두)는 2.5 kg 그리 고 저영양구(21두)는 0 kg으로 일시적인 제한급여를 실시하고, 조사료는 자유채식을 하였 다. 과배란유도 처리는 공란우의 발정주기에 관계없이 CIDR삽입 0일을 기준으로 7일 전부 터 영양처리에 제한을 주고, 4일째부터 4일간 FSH를 근육주사 하였다. 그리고 투여 6일째 CIDR제거와 동시에 PGF2α를 오전 5 mL, 오후 3 mL를 근육주사 하여 과배란을 유도하였 다. 한편, 공란우의 인공수정(AI)은 8～9일째 12시간 간격으로 정액 2straw당 각각 2회 AI 를 실시하였으며, 16일째 비 외과적 방법(자궁관류법)으로 채란하였다. IETS 수정란 등급판 정 기준에 따라 CODE 1, CODE 2를 이식가능 수정란으로 판정하였다. 공란우 53두를 과 배란 처리 하여 Estrogen과 Progesterone의 농도를 분석한 결과, Estrogen의 경우 고영양 에 비해 저영양에서의 호르몬수준이 CIDR삽입 일에 30 IU 정도 더 높았다. 이 결과로부터 일시적인 저영양이 발육중인 난포수의 증가에 영향을 미침을 알 수 있었다. 한편, Progesterone 분비량은 두 처리구 간에 유의적인 차이는 없었지만, 수정 후 Progesterone의 농도 의 증가로부터 정상적으로 황체호르몬이 분비되었음을 알 수 있었다. 일시적인 영양처리에 따른 체내수정란 회수난 수와 이식가능 수정란 수(%)는 각각 대조구에서 8.56±2.11, 4.63± 0.98(%), 고영양에서 10.67±2.00, 7.33±2.18(68.69%) 그리고 저영양에서 14.76±2.11, 10.94 ±1.91(74.11%)로 저영양에서 더 높게 나타났다. 본 연구 결과들로부터 일시적인 영양수준 조절을 이용해 체내수정란 생산 극대화 기술을 확립할 수 있고, 이러한 기술개발을 이용하 여 고능력 한우의 조기번식, 한우개량 및 농가소득증대에도 크게 기여할 것으로 사료된다.

닭 정액의 동결보존기술은 유전자원 보존의 수단으로 이용될 수 있는 기술로서 고병원성 조류인플루엔자 같은 악성질병에 의한 멸실을 방지하는 매우 중요한 기술이다. 닭의 정자 는 동결보호제와 동결에 이용되는 희석액에 따른 융해 후 정자의 활성도, 수정율 및 부화율의 변이가 매우 큰 것으로 알려져 있다. 가장 널리 사용되는 동결보호제인 Glycerol은 동결 정 액 제조에 가장 많이 이용되며 융해 후 닭 정자의 생존성이 비교적 우수한 것으로 알려져 있으나, 인공수정에 직접 이용할 경우에 수정율의 저하현상이 나타난다. 본 연구에서는 동 결보호제중 하나인 N-Methylacetamide(MA)를 이용하여 한국 재래계인 오계 수탉의 정자 를 동결보존, 융해 및 인공수정을 실시하여 수정율과 부화율을 조사하였다. 복부 마사지법으 로 채취한 정액을 5℃ 저온수조에 담아 실험실로 이송하였으며 MA을 함유하지 않은 희석액 (HS-1)에 1:1의 비율로 희석하여 30분간 5℃ 온도로 유지시켰다. 2차 희석액은 14, 18 그 리고 22%의 MA가 함유된 희석제를 이용하였으며 1차 희석된 정액과 1:1 비율로 희석하여 0.5ml 스트로에 충진 하였다. 액체질소 표면 위 4 cm에 설치된 간이 지지대에 밀봉된 스트 로를 30분간 정치하여 동결하는 간이동결법을 이용하였다. 동결된 정액을 1～2주간 보관한 후, 5℃로 조절된 저온수조에서 융해하고 운동성 있는 정자와 활력이 우수한 정자의 비율 을 비교 분석하였다. 동일한 방법으로 융해한 정액으로 인공수정을 실시하고 7일 간 수정 란을 수집하여 부화기에 배양하여 7일차에 발생란을 검란하였다. 대조군에서 희석된 정액 의 경우 98.4% 수정율이 관찰되었으며 실험군에서는 7, 9 및 11% MA의 경우 각각 21.5 %, 34.7% 및 25% 수정율이 관찰되었다. 수정율에 대한 부화율은 대조군에서 88.9%를 관 찰하였고 실험군은 100%, 89.5% 및 87.5%로 관찰되었다. 이러한 결과로 유추해 볼 때, 오 계 정자의 동결보존에 유용할 수 있는 MA의 농도의 범위는 약 9% 내외로 판단되며 특히 MA는 오계 수정란의 수정율과 부화율에 미치는 영향이 낮은 것으로 사료되었다.

DNA methyltransferase 1 (Dnmt1) gene contains three different isoform transcripts, Dnmt1s, Dnmt1o, and Dnmt1p, are produced by alternative usage of multiple first exons. Dnmt1o is specific to oocytes and preimplantation embryos, whereas Dnmt1s is expressed in somatic cells. Here we determined that porcine Dnmt1o gene had differentially methylated regions (DMRs) in 5’-flanking region, while those were not found in the Dnmt1s promoter region. The methylation patterns of the porcine Dnmt1o/Dnmt1s DMRs were investigated using bisulfite sequencing and pyrosequencing analysis through all preimplantation stages from one cell to blastocyst stage in in vivo or somatic cell nuclear transfer (SCNT). The Dnmt1o DMRs contained 8 CpG sites, which located in —640 bp to —30 bp upstream region from transcription start site of the Dnmt1o gene. The methylation status of 5 CpGs within the Dnmt1o DMRs were distinctively different at each stage from one-cell to blastocyst stage in the in vivo or SCNT, respectively. 55.62% methylation degree of the Dnmt1o DMRs in the in vivo was increased up to 84.38% in the SCNT embryo, moreover, de novo methylation and demethylation occurred during development of porcine embryos from the one-cell stage to the blastocyst stage. However, the DNA methylation states at CpG sites in the Dnmt1s promoter regions were hypomethylated, and dramatically not changed through one-cell to blastocyst stage in the in vivo or SCNT embryos. In the present study, we demonstrated that the DMRs in the promoter region of the porcine Dnmt1o was well conserved, contributing to establishment and maintenance of genome-wide patterns of DNA methylation in early embryonic development.

We inoculated a spent mushroom substrate from Flammulina velutipes (SMSF) with a microbial additive and assessed the effects on chemical composition, ruminal fermentation parameters, and total-tract nutrient digestibility. In Exp. 1, three cannulated Hanwoo steers were used in an in situ trial to determine the degradation kinetics of dry matter (DM) and crude protein (CP). In Exp. 2, three Hanwoo steers were randomly assigned to experimental diets according to a 3 × 3 Latin square for a 3-week period (2 weeks for adaptation and 1 week for sample collection). Experimental diets included the control diet (3.75 kg/d formulated concentrate mixture + 1.25 kg/d rice straw), SMSF diet (3.19 kg/d formulated concentrate mixture + 1.25 kg/d rice straw + 0.56 kg/d SMSF), and inoculated SMSF (ISMSF) diet (3.19 kg/d formulated concentrate mixture + 1.25 kg/d rice straw + 0.56 kg/d ISMSF). The chemical composition of ISMSF did not differ from that of SMSF. Microbial additive inoculation decreased pH (P<0.05) and improved preservation for SMSF. The percentages of DM, neutral detergent fiber (NDF), and acid detergent fiber (ADF) in ISMSF were slightly lesser than those in SMSF. Ruminal fermentation characteristics and total-tract nutrient digestibility were not affected by diet. Overall, microbial additive inoculation improved preservation for SMSF and may allow improved digestion in the rumen; however, the total digestible nutrients (TDN) of SMSF and ISMSF diets were slightly lesser than the control diet. The ISMSF can be used as an alternative feedstuff to partially replace formulated concentrate feed.