Pituitary-specific transcription factor (PIT1) 유전자는 동물의 성장을 조절하고 근육 형성에 관여하는 유전자로서 최근에는 단일염기다형성 변이가 한우를 비롯한 동물에서 관찰되었으며, 한우의 경제 형질과 연관성이 보고되었다. 본 연구는 PIT1 유전자의 단일염기다형성 변이가 한우에서 성장 인자에 미치는 영향과 경제 형질에 대한 유전자형간 육종가와의 상관성에 대해 알아보고자 하였다. 도체 성적을 보유하고 있는 한우 후보종모

본 연구는 후보 유전자의 경제형질에 미치는 염기 변이 효과를 검증하기 위해 국내에서 사육된 듀록 품종 96두와 한국 재래 돼지 86두를 활용하였다. 검증에 활용된 4개의 후보 유전자는 MC4R, PA-KAG3, FABP3 그리고 ESR 유전자였다. 각 후보 유전자들의 유전자형 분석 결과 두 집단 간에 유전적 특성의 차이가 분명히 나타나고 있음을 확인하였다. MC4R 유전자의 A 대립 유전자는 두 집단 모두에서 성장 형질과의 유의한 연관성이 검출되었고,

It is possible to apply DNA sequencing data of A. oryzae RIB40 (Tominaga et al, 2006) to investigation of genomic structure of homologous gene cluster in 210 A. oryzae RIB strains. Using PCR technique, 210 A. oryzae RIB strains were easily classified into groups 1, 2, and 3, and others according to amplified patterns with seven aflatoxin homologous genes. Group 1 (122 strains, 58.1%) strains conserve intact aflatoxin biosynthesis gene homolog cluster. Group 2 (77 strains, 36.7%) and group 3 strains (9 strains, 4.3%) reveal large deletions of the aflatoxin gene homolog cluster, which is more than half. It is possible that the breakpoint within the cluster of group 2 strains would be near the ver-1gene, as described by Kusumoto et al. (2000). Two strains (0.9 %) that could not be classified into group 1, 2, and 3 were called "others". The majority of A. oryzae RIB strains (94.8 %) are categorized as groups 1 and 2. Murakami (1971) has evaluated 20 mycological characters of RIB strains, graded them from 1 to 6 and also proved no aflatoxin production in all strains. To examine the differences between group 1 and group 2 based on phenotype, analysis of variance was performed. Significant differences among 19 characters except for the aflatoxigenic character were recognized with 5 characters (length of stalk, color of old slant culture, roughness of conidia, coloration of hydroquinone, and pink color of conidia in medium with anisic acid). The length of stalk of group 1 was longer than that of group 2 at level of p<0.01 (data not shown). Therefore, this PCR analysis is a useful method for classification at intra-species level. Furthermore, it is safe for the food fermentation and enzyme industry to use A. oryzae especially groups 2 and 3 strains since these strains revealed absolute lack of aflatoxigenic ability at the molecular level. From the results of DNA sequencing analysis between A. oryzae RIB40 belonging to group 1 and RIB62 belonging to group 2, RIB62 shows a large deletion upstream of ver-1 homolog with more than half of the aflatoxin homologous gene cluster being missing. Adjacent to the deletion of the aflatoxin homologous gene cluster, RIB62 has a "unique sequence" of about 8-kb and a telomere. We investigated whether homologues of the unique sequence region of A. oryzae RIB62 were present in other group strains with Southern blot analysis. At first, we performed Southern blot analysis of 210 A. oryzae RIB strains with "no-hit" probe of unique sequence. The results showed that all group 2 strains had an identical size of signal of about 9.4-kb, while in other group strains different size of hybridizing signals from that of group 2 strains or with no signal were detected (data not shown).Subsequently, to confirm the presence of the unique sequence, Southern blot analysis with the four kinds of probe, which were derived from the unique sequence of RIB62 was performed for 16 selected strains from group 1, 2, and 3. Group 1 strains showed various signal patterns; double or single band(s) in most strains and with no signal in RIB40. In addition, the signal pattern of group 1 strains was different according to the probe used. However all group 2 strains showed an identical band of about 9.4 kbin all the cases when the four probes were used. In the group 3 strains, no signal was detected with the four probes. Therefore, 8-kb unique sequence of RIB62 is conserved in A. oryzae group 2 strains and present partially in some group 1 strains. To investigate the chromosomal position of the unique sequence, chromosomal Southern analysis was performed using four kinds of probe, US 1 to 4. Separation of the chromosomes of selected eight of A. oryzae group 1 and group 2 strains by clamped homogeneous electric field (CHEF) revealed different karyotype (data not shown). Among them, RIB62 showed a unique band of about 3 Mb, whereas other strains have no this chromosome. The detected signal(s) in A. oryzae group 1 strains were revealed in two or one chromosome(s) and in no signal in RIB40, while that of group 2 strains showed in single chromosome with four kinds of probes. The signal patterns of group 1 strains were different according to the probe used, while those of group 2 strains were identical. These results are almost identical to those of genomic Southern blot analysis To confirm the structure of the region flanking the partial aflatoxin homologous gene cluster in A. oryzae group 2 strains, we investigated the pattern of PCR amplification in 210 A. oryzae RIB strains with a set of primers designed to amplify between ver-1 and the unique sequence. The oligonucleotide primer for the ver-1 side was common to both RIB 40 and RIB62, while that of the unique sequence side was derived from RIB62. From the results of PCR with this set of primers, a fragment of about 1 kb was amplified from all group 2 strains and none of strains from other group generated PCR products. Therefore, it is possible to distinguish group 2 strains from other group strains with this set of primers. Southern blotting and PCR analysis resulted that all group 2 strains has the identical "unique sequence" and genomic structure of deletion including flaking region. In addition, this characterization of group 2 strains could be applied to distinguish this group strainsfrom the other group strains. The result of chromosomal Southern analysis (data not shown) suggested that the aflatoxin homologous gene cluster and the "unique sequence"existed on the same chromosome in groups 1 strains having these two portions. Taken together, A. oryzae group 2 strains might have differentiated from the ancestral strain due to chromosomal breakage. Although it is extremely difficult to determine the reason for the non-aflatoxigenicity of A. oryzae from the analysis of the genomic structure, this dissertation may provide basic molecular information for the profound approaches. In succession, further research on aflR protein activity or other related signal transduction pathway and the deleted aflatoxin biosynthesis gene homolog cluster of group 2 strains together with group 3 strains may help in clarifying the mechanism of the cluster deletion and differentiation.

Cell response to genotoxic agents is complex and involves the participation of different classes of genes including cell cycle control, DNA repair and apoptosis. In this report, we presented a approach to characterize the cellular functions associated wit

본 연구에서는 감마선으로 유도된 돌연변이체들에서 공통으로 발현되는 방사선 관련 유전자들의 발현을 연구하기 위하여, B. lentimorbus WJ5 의 방사선 유도 돌연변이체에서 발현되는 유전자를 DNA microarray로 동시에 탐색하였다. DNA microarray는 B. lentimorbus WJ5 genome을 무작위로 절단하여 2,000 단편으로 구성하였으며, 감마선 (60/Co)으로 유도된 7 돌연변이체의 발현을 정량적으로 관찰하였

PCR법은 특정 유전자를 증폭하는 기술로 작물 및 식품에서 유전자 변형체 함유 여부를 가리는 효과적인 방법이다. 그러나 핵산의 추출법에 따라 PCR의 감도가 크게 달라지므로 정확한 추출법의 선정이 매우 중요하다. 본 연구는 현재 컬럼형 상용화 키트와 기존의 용매 추출방법을 이용하여 콩과 옥수수가공식품에 대한 각 유전자 부위의 검출감도를 비교 분석하였다. 핵산의 추출효율과 도입유전자의 증폭효율면 모두 상용화 키트인 Wizard™, DNeasy™ 추출법이 우수하였다. DNeasy법은 대부분의 식품에서 우수한 추출효율을 보였으나, 옥수수가공식품에서 수율이 감소하는 단점을 나타내었다. Wizard법은 모든 가공식품에서 고른 추출효율을 보였으며, PCR반응에 의한 증폭산물도 잘 보존되어 가공식품의 GMO검출에 적합한 것으로 나타났다. 한편 CTAB법은 콩가공식품에서 약간 효율이 좋은 것으로 나타났으나 대부분의 경우 효율이 낮았으며, 식품의 종류에 따라 편차가 심하게 나타났다. pheno/chloroform법은 대부분의 식품에서 핵산의 분리가 어려운 방법으로 나타나 GMO분석에는 적합하지 않은 방법으로 확인되었다.

There is considerable evidence that ionizing radiation (IR) mediates checkpoint control, repair and cell death. In this study, we have used a high density microarray hybridization approach to characterize the transcriptional response of human breast carci

호열균 B. stearothermophilus으로부터 단백질 고차구조 형성을 촉진하는 내열성 PPlase를 정제하기 위해, 이 균체를 대량으로 배양 집균, 파쇄하여 효소활성을 측정하였다. 효소의 활성측정은 N-succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilide(pAN)를 기질로 사용하였다. chymotrypsin은 기질 이성체 (cis-trans 형) 의 한쪽 (trans)만을 특이적으로 분해하는 반응을 이용하여 PPlase 활성을 측정하였다. 호열균 추출시료로부터 효소활성을 확인한 후, DEAE-sepharose CL-6B, Sephadex G-75로 정제 후, 최종적으로 Superose TM-12 (FPLC) gel-필트레이션으로 분자량 18kDa의 본 효소를 정제하였다. 정제한 효소의 화학적 특징을 조사한 결과 pH 7.5 ~ 8.0 사이에 안정하였으며, 최적 pH는 8.0으로 나타났다. 그리고 65℃에 30분간 열처리 후, 효소활성을 측정한 결과 50% 이상의 잔존 활성을 갖는 내열성 효소임을 확인하였다. 정제 단백질의 N-말단 아미노산 분석은 Edman 분해법으로 39 아미노산 잔기를 결정하였다. 그리고 PPIase의 재구성(refolding) 반응은, 요소로 변성시킨 기질 RNase 1을 이용하여 이 단백질의 재구성 (refolding) 실험을 조사한 결과, PPIas는 변성 기질 RNase 1의 재구성(refolding)을 촉진하는데 높은 효과를 가지고 있었다. 호열균 유전자 라이브러리로부터 PPIase 유전자 약 3kb을 클로닝하였다. 재조합 플라스미드 pPI-40에서 프라이머 (A-1, B-2)를 이용하여 PPIase N-말단을 코드하는 유전자를 PCR법으로 증폭하여, 염기배열을 결정한 결과 증폭된 단편은 165염기로 형성된 55 아미노산 잔기를 코드하는 open reading frame(ORF)가 연속되고 있었다. 그리고 Edman법으로 결정한 PPIase의 39 아미노산 잔기가 이 배열내에 완전히 보존되어 있었다. 이 결과로부터 이 ORF는 PPIase 구조 유전자의 1/3에 해당하는 단편임을 확인하였다.