Reactive oxygen species (ROS) production and F-actin cytoskeleton dynamics play important roles in the survival rate of blastocysts after the vitrifiedwarming process. However, the protective effects of Mito-TEMPO against cryo-injury and viability through F-actin aggregation and mitochondrial-specific ROS production in vitrificated-warmed bovine embryos have not been investigated. The aims of the present study were to: (1) determine the effects of Mito-TEMPO on embryonic developmental competence and quality by F-actin stabilization during in vitro culturing (IVC), and (2) confirm the effects of Mito-TEMPO through F-actin structure on the cryotolerance of vitrification-warming in Mito-TEMPO exposed in vitro production (IVP) of bovine blastocysts. Bovine zygotes were cultured with 0.1 μM Mito-TEMPO treatment for 2 days of IVC. Mito-TEMPO (0.1 μM) exposed bovine embryos slightly improved in blastocyst developmental rates compared to the non-treated group. Moreover, the viability of vitrified-warmed blastocysts from Mito-TEMPO treated embryos significantly increased (p < 0.05, non-treated group: 66.7 ± 3.2% vs Mito-TEMPO treated group: 79.2 ± 5.9%; re-expanded at 24 hours). Mito-TEMPO exposed embryos strengthened the F-actin structure and arrangement in the blastocyst after vitrification-warming. Furthermore, the addition of Mito-TEMPO into the IVC medium enhanced embryonic survival and quality through F-actin stabilization after the vitrification-warming procedure. Overall, our results suggest that supplementing the culture with 0.1 μM Mito- TEMPO improves the embryonic quality and cryo-survival of IVP bovine blastocysts.

Vitrification methods are commonly used for mammalian reproduction through the long-term storage of blastocyst produced in vitro. However, the survival and quality of embryos following vitrification are significantly low compared with blastocyst from in vitro production (IVP). This study evaluates that the survival of frozen-thawed bovine embryos was relevant to mitochondrial superoxide derived mitochondrial activity. Here we present supplementation of the cryopreservation medium with Mito- TEMPO (0.1 μM) induced a significant (p < 0.001; non-treated group: 56.8 ± 8.7%, reexpanded at 24 h vs Mito-TEMPO treated group: 77.5 ± 8.9%, re-expanded at 24 h) improvement in survival rate of cryopreserved-thawed bovine blastocyst. To confirm the quality of vitrified blastocyst after thawing, DNA fragmentation of survived embryos was examined by TUNEL assay. As a result, TUNEL positive cells rates of frozenthawed embryos were lower in the Mito-TEMPO treated group (4.2 ± 1.4%) than the non-treated group (7.1 ± 3.5%). In addition, we investigated the intracellular ROS and mitochondrial specific superoxide production using DCF-DA and Mito-SOX staining in survived bovine embryos following vitrification depending on Mito-TEMPO treatment. As expected, intracellular ROS levels and superoxide production of vitrified blastocysts after cryopreservation were significantly reduced (p < 0.05) according to Mito-TEMPO supplement in freezing medium. Also, mitochondrial activity measured by MitoTracker Orange staining increased in the frozen-thawed embryos with Mito-TEMPO compared with non-treated group. These results indicate that the treatment of Mito-TEMPO during cryopreservation might induce reduction in DNA fragmentation and apoptosis-related ROS production, consequently increasing mitochondrial activation for developmental capacity of frozen-thawed embryos.

본 연구의 목적은 제자리딛기 템포와 돌려차기 유형이 응답시간에 미치는 영향을 비교 분석하는데 있다. 본 연구에는 태권도 4단이며 10년 이상 수련한 남자 15명이 참여하였다. 실험 과제는 메트로놈의 템포에 맞춰 제자리딛기를 하다가 불빛 자극이 제시되면 최대한 빠르게 돌려차기를 하는 것이다. 5가지 의 제자리딛기 템포(100, 120, 140, 160, 180 bpm)와 4가지의 돌려차기 유형(앞발 몸통 돌려차기, 앞발 얼굴 돌려차기, 뒷발 몸통 돌려차기, 뒷발 얼굴 돌려차기)에서 3회씩 총 60회를 실시하였다. 통계분석은 반복 측정 이원분산분석을 실시하였으며, 주효과의 대응별 비교는 Bonferroni를 실시하였다. 제자리딛기 템포와 돌려차기 유형의 상호작용효과가 나타났으며, 제자리딛기 템포와 돌려차기 유형에 따른 주효과도 나타났다. 160 bpm의 제자리딛기 템포에서 돌려차기의 응답시간이 제일 빠른 것으로 나타났다. 하지만 140과 160 bpm의 제자리딛기 템포에서 돌려차기 응답시간은 거의 차이가 나타나지 않았다. 앞발 몸통 돌려차기의 응답시간이 빨랐다. 그리고 제자리딛기 템포와 돌려차기 유형에 따라 140 bpm의 제자리딛기 템포에서 앞발 몸통 돌려차기의 응답시간이 가장 빠른 것으로 나타났다. 결론적으로 돌려차기의 응답시간은 140과 160 bpm의 제자리딛기 템포에서 효과적이며, 뒷발보다는 앞발, 얼굴보다는 몸통 돌려차기가 효과적인 것으로 나타났다. 본 연구를 통해 도출된 결과는 수행 향상에 유용한 정보를 제공할 것이며, 태권도 경기를 위한 전략에 도움이 될 것이다.

Morphology of cumulus-oocyte-complexes (COCs) at germinal vesicle (GV) stage as one of the evaluation criteria for oocyte maturation quality after in vitro maturation (IVM) plays important roles on the meiotic maturation, fertilization and early embryonic development in pigs. When cumulus cells of COCs are insufficient, which is induced the low oocyte maturation rate by the increasing of reactive oxygen species (ROS) in porcine oocyte during IVM. The ROS are known to generate including superoxide and hydrogen peroxide from electron transport system of mitochondria during oocyte maturation in pigs. To regulate the ROS production, the cumulus cells is secreted the various antioxidant enzymes during IVM of porcine oocyte. Our previous study showed that Mito-TEMPO, superoxide specific scavenger, improves the embryonic developmental competence and blastocyst formation rate by regulating of mitochondria functions in pigs. However, the effects of Mito-TEMPO as a superoxide scavenger to help the anti-oxidant functions from cumulus cells of COCs on meiotic maturation during porcine oocyte IVM has not been reported. Here, we categorized experimental groups into two groups (Grade 1: G1; high cumulus cells and Grade 2: G2; low cumulus cells) by using hemocytometer. The meiotic maturation rate from G2 was significantly (p < 0.05) decreased (G1: 79.9 ± 3.8% vs G2: 57.5 ± 4.6%) compared to G1. To investigate the production of mitochondria derived superoxide, we used the mitochondrial superoxide dye, Mito-SOX. Red fluorescence of Mito-SOX detected superoxide was significantly (p < 0.05) increased in COCs of G2 compared with G1. And, we examined expression levels of genes associated with mitochondrial antioxidant such as SOD1, SOD2 and PRDX3 using a RT-PCR in porcine COCs at 44 h of IVM. The mRNA levels of three antioxidant enzymes expression in COCs from G2 were significantly (p < 0.05) lower than COCs of G1. In addition, we investigated the anti-oxidative effects of Mito-TEMPO on meiotic maturation of porcine oocyte from G1 and G2. Meiotic maturation and mRNA levels of antioxidant enzymes were significantly (p < 0.05) recovered in G2 by Mito-TEMPO (0.1 μM, MT) treatment (G2: 68.4 ± 3.2% vs G2 + MT: 73.9 ± 1.4%). Therefore, our results suggest that reduction of mitochondria derived superoxide by Mito-TEMPO may improves the meiotic maturation in IVM of porcine oocyte.

In general, the shape of cumulus-oocyte-complexes (COCs) at germinal vesicle (GV) stage is important roles on meiotic maturation of porcine oocyte during in vitro maturation (IVM). Then, mitochondria produce reactive oxygen species (ROS) such as superoxide from electron transport system during oocyte maturation. ROS levels on oocytes are regulated by various antioxidant enzymes in cumulus cells (CCs). However, the effect of mitochondria derived superoxide production from CCs during IVM of porcine oocyte has not been reported. Firstly, we divided groups according to large number of CCs (Grade 1: G1) and small number of CCs (Grade 2: G2). Then, we counted cumulus cells of G1 and G2 oocyte by using haemocytometer. The oocyte maturation rate was significant decreased (p < 0.05) in G2 oocytes than that of G1 oocytes. We measured mitochondria derived superoxide in G1 and G2 COCs by using Mito-SOX staining. Mitochondrial superoxide was higher in G2 COCs than G1 COCs. Then, the mRNA expression levels of antioxidant enzymes (SOD1, SOD2 and PRDX3) in G2 COCs were decreased compared to G1 COCs. To reduce mitochondria derived superoxide, we used Mito-TEMPO as mitochondrial superoxide scavenger. Oocyte maturation rates in both G1 and G2 groups treated with Mito-TEMPO were increased than that of non-treated groups. Mitochondrial superoxide was lower in G1 and G2 groups treated with Mito-TEMPO than that of non-treatment groups. The mRNA expression levels of antioxidant enzymes in G1 and G2 COCs treated with Mito-TEMPO were increased compared to non-treated groups. Based on these findings, we suggest that reduction of mitochondria derived superoxide by Mito-TEMPO assists maturation competence in porcine oocytes.

본 연구는 느린 장단과 빠른 장단이 연이어 연주되는 ‘긴·자진 형식’의 민요들을 활용하여 연주 형태와 장단의 유형과 같은 음악적 요인들이 학생들의 빠르기 인지반응에 미치는 영향을 살펴보는데 목적을 두었다. 템포 인지 실험을 위해 연구자는 긴·자진 형식의 대표적인 사례로 사용되는 민요, ‘쾌지나 칭칭나네’와 ‘강강술래’를 실험 악곡으로 선정하였으며, 느린 장단인 굿거리 장단과 중중 모리 장단 그리고 빠른 장단인 자진모리장단을 사용하였다. 170명의 초등학교 학생들은 악곡의 빠르기 변화(느림에서 빠름, 빠름에서 느림, 변화 없음), 장단의 유형(기본박 장단, 전체 장단), 연주형 태(노래, 악기반주, 노래와 악기반주)의 세 가지 요인들이 조합된 18개의 샘플을 청취한 후 빠르기 변화에 대한 설문에 응답하였다. 긴·자진 형식인 느린 장단에서 빠른 장단으로 진행하는 샘플들에 해당하는 학생들의 응답을 살펴보면, 전체 장단 보다 기본박 장단에서 정답률이 높았으며, 노래 또는 악기반주만 포함된 음원보다 노래와 악기반주가 모두 포함된 음원의 정답률이 낮았다. 이러한 결과는 리듬의 활동성이 증가할수록, 또 연주 형태가 복잡해질수록 학생들의 빠르기 변화 인지에 혼란이 가중됨을 보여준다. 본 연구의 결과는 교사들이 긴·자진 형식으로 연주되는 민요의 템포 변화에 대한 학생들의 인지 반응을 즉각적으로 살펴 이를 적극적으로 반영하는 유연한 교수학습 전략을 설계할 것을 촉구한다.

본 연구는 자동화 MPN 분석 장비인 TEMPO (TEMPO BC)와 MYP 배지법을 이용한 바실러스 정량 시험 결과에 대한 상관관계와 유의성을 연구하였다. 자연적으로 오염 되어 있는 B. cereus 다빈도 검출 식품을 선별하여(N = 384) 두 시험법으로 정량 시험한 결과값의 차가 1 log CFU/g 미 만이 95.3%였으며, B. cereus가 검출된 시료에서는 92.5% 였다. 통계학적으로 TEMPO BC 시험법과 MYP 배지법은 유의적 차이가 없었다(p < 0.05). 국내 정량 규격이 있는 식품에 인위적으로 B. cereus를 접종하고 두 시험법을 비교 하였다. R2값은 소스류(0.98), 조림식품류(0.98), 젓갈류(0.96) 에서 유의적인 차이가 없었으나, 생식류(0.94), 청국장류 (0.86), 된장류(0.71)는 시험법 간의 유의적인 차이가 있었다. 콩, 메밀 등의 곡류 제품은 TEMPO BC 결과값의 오류가 날 수 있는 재료로 명시되어 있으므로 선식류와 청국 장류, 된장류는 자동화 시험법인 TEMPO BC로 사용하기 위해서는 시험법을 추가적으로 검증 할 필요성이 있다고 생각된다. 자연적으로 오염되어 있는 식품 시료와 인위적 으로 접종한 시료에 대한 선형 방정식은 log(TEMPO BC) = 0.8453 × log (MYP배지) + 0.1642이며 paired t-test를 이용 하여 검증한 결과 유의적인 차이가 없었다. 최근 식품의 안전성에 대한 소비자의 관심이 증가하여 식품공전 및 국제 기준에 정량기준이 강화되고 있는 추세이므로 TEMPO BC의 수요증가가 예상된다. 따라서 본 연구는 이에 대비 하여 식품의 안전성 평가에 사용되는 기존의 실험법과의 비교 및 타당성 연구 기초 자료로 쓰일 것이라 생각된다.

표준 평판배지 정량검출법과 TEMPO STA를 이용한 황색포도상구균 정량 분석에 대한 상관성과 유의성을 평가 하기 위해 복합조리식품에 황색포도상구균을 인위적으로 접종하여 결과값을 통계 처리하여 유의성을 조사한 결과 두 실험방법간에는 유의적 차이가 없었다(p < 0.05). 상관 계수(r2)는 0.9672로 두 실험간에는 높은 연관성을 보였다. TEMPO STA를 466개의 시료에 적용한 결과 454개 (97.4%)의 시료는 문제가 없었으나 이중 12개의 시료에서는 error가 발생하였다. 그러나 TEMPO법은 실험 단계 간편하고 사용이 쉬우며 신속한 결과를 얻을 수 있으며 자동화된 장비로 실험 과정에 의한 오류를 최소화 할 수 있는 장점이 있으며 표준시험법인 표준 평판 배지법과도 유의적인 차이가 없어 정확한 정량검출이 가능할 것으로 생각된다. 최근 식품의 안전성확보를 위해 검사 품목이 다양해지며 수도 증가하는 추세이기 때문에 황색포도상구균의 정량 검사가 정확하고 신속해야 할 필요가 있으므로 TEMPO STA법의 필요성은 앞으로 크게 늘어날 것으로 보인다.

We compared between an automated most-probable-number technique TEMPO®TVC and traditional plating methods PetrifilmTM for estimating populations of total aerobic bacteria in various livestock products. 257 samples randomly selected in local retail stores and 87 samples inoculated with E. coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 12868 were tested in this study. The degree of agreement was estimated according to the CCFRA (Campden and Chorleywood Food Research Association Group) Guideline 29 and the agreement indicates the difference of two kinds methods is lower than 1 log base 10(log10). The samples of hams, jerky products, ground meat products, milks, ice creams, infant formulas, and egg heat formed products were showed above 95% in the agreement of methods. In contrast, proportion of agreement on meat extract products, cheeses and sausages were 93.1%, 92.1%, 89.1%, respectively. One press ham and five sausages containing spice and seasoning, two pork cutlets containing spice and bread crumbs, two meat extract product and two natural cheeses and one processing cheese with a high fat content, and one ice cream containing chocolate of all samples showed the discrepancy. Our result suggest that TEMPO®TVC system is efficient to analyses total aerobic bacteria to compare manual method in time-consuming and laborious process except livestock products having limit of detection.

The aim of this study was to evaluate the TEMPOⓇ STA automated most probable number (MPN) system for the enumeration of Staphylococcus aureus (S. aureus) in comparison with a standard culture method. Artificially inoculated food products with S. aureus - triangle kimbap, sliced spring onion, dried filefish fillet, danpatjuk (sweet red-bean porridge with small rice dumplings)- were tested in this study. Twenty-five grams of each of food samples were added into 225 ㎖ of sterilized phosphate buffered saline in a TEMPOⓇ stomacher bag followed by stomaching for 2 min. One milliliter of the stomached sample was added to a bottle of culture medium. Cards were filled and sealed in the automated filler and then were incubated for 24 h at 37℃. After incubation, the cards were placed in the automated TEMPOⓇ reader and MPN results were generated. For comparison with a culture method, decimal dilutions were prepared from the same homogenized samples described above, transferred onto Baird Parker and Baird Parker-Rabbit Plasma Fibrinogen (BP-RPF) agar plates, and then incubated at 37℃ for 24 h. The performance of TEMPOⓇ STA method is equivalent to the culture method using Baird Parker or BP-RPF agar count plate for the enumeration of S. aureus in foods, eliminating a time-consuming and laborious process.

To evaluate the performance of a new automated coliform enumeration system (TEMPO® CC) for the quantitative test of coliform bacteria contaminated in domestic livestock processed foods, a total of 507 samples of livestock foods were tested by the TEMPO® CC method, the most probable number (MPN) method, and Petrifilm method, respectively. The results of those three methods were compared to each other. Of 507 samples of livestock processed foods used in this study, 217 samples were contaminated artificially with coliform bacteria and the rest (n=290) were contaminated naturally. The results of the TEMPO® CC method for all samples were equivalent to those obtained from the MPN method, except 8 samples. In addition, 496 (97.8%) out of 507 samples made agreement between the TEMPO® CC method and the Petrifilm method. The correlation coefficients between TEMPO® CC and MPN methods as well as between TEMPO® CC method and Petrifilm method were above 0.9, and the slope and intercept of the linear regression model was different in less than 1 value. In conclusion, there were statistically equivalent levels of performance between the TEMPO® CC and the reference and alternative methods for the enumeration of coliform bacteria in livestock processed foods in this study.

이 연구는 동기화-지속 과제(synchronization-continuation task)를 수행할 때 발생하는 타이밍 제어 특성을 무용 숙련성과 템포의 측면에서 규명하는 데 목적이 있다. 방법: 연구참여자는 국내 직업무용단에서 활동하고 있 는 무용 숙련자 12명과 비숙련자 12명이다. 실험과제는 각기 다른 템포 조건(60, 120, 180bpm)에서 주기적으로 제공되는 청각자극에 맞춰 손가락 태핑(finger tapping)을 동기화하는 것과 청각자극 없이 기존 템포를 지속하며 태핑하는 것이다. 청각자극이 제시되는 동기화 과제에서 비동기성의 절대오차는 타이밍 정확성으로, 비동기성의 표준편차는 타이밍 가변성으로 산출하였다. 청각자극이 없는 지속 과제에서는 탭 간 간격(inter-tap interval, ITI)과 목표시간 간 차이를 타이밍 정확성으로, ITI의 표준편차는 타이밍 가변성으로 산출하였다. 결과: 동기화 과제에서 타이밍 정확성은 120bpm 조건에서 가장 높게 나타났고, 무용 숙련자의 타이밍 가변성은 비숙련자와 비교하여 60bpm, 120bpm 조건에서 유의하게 낮게 나타났다. 지속 과제에서 나타난 타이밍 가변성은 숙련자가 비숙련자보 다 낮게 나타났으며, 60bpm 조건에서 다른 템포 조건보다 높게 나타났다. 결론: 이러한 연구결과를 통해 무용 숙 련자는 주기적인 리듬에 맞춰 일관적으로 움직이는 것뿐만 아니라 청각자극 없이 규칙적인 움직임을 생성하고 유 지하는 데 특화되어 있으며, 오랜 무용훈련 경험이 이러한 능력을 촉진하는데 긍정적인 효과를 가져왔음을 짐작 할 수 있다.