Heme oxygenase-l (HO-l) exhibits cyt oprotective effects in many different cell types and is induced by nicotine exposure in human gingival fibroblasts‘ However‘ therole of HO- l in cancer cells exposed to nicotine has not previously been descnbed We investigated the effects of nicotine on HO-l protein expression and cell viability in immortalized (IHOK) and malignant (HN12) human ora l keratinocyte cells using the MTT assay and Western blotting. We al so examined the involvement of t he phosphoinosit ide-3-0H- kinase (PI3K), mitogen-acti vated protein kinase (MAPK) , and nucJear factor-κ B (NF-κ B) signaling pathways in nicotine-induced cytotoxicity and HO- l levels in IHOK and HN12 cell s‘ Nicotine induced HO- l pro ducti on and had cytotoxic effects on cells in both a concentration- and time-dependent manner. Nicotine-induced cytotox icity and accumulation of HO- l were greater in JJ-IOK cells than in HN12 cells Molecular inhibitors of the ERK, p38 MAP kinase, PI3K, and NF-κ B signaling pathways blocked the cytotoxic effects and induction of J-IO-l expression by nicotine. Treatmen t with an t ioxida nts (bil irubin, N-acetyl cysteine) protected cells against nicotine-induced cytotoxicity and blocked the upregula tion of J-IO- l, the effects of which were more pronounced in II-IOK cells than in HN12 cells Collecti vely, these results suggest that J-IO- l plays a principal role in the protective response to nicotine in oral cancel and immortalized keratinocytes. Moreover, the addition of exogenous antioxidants may help to protect oral epithelial cells as chemopreventive agents against nicotine-induced oxidative stress.

The aim of t his study was to investigate the cytotoxic and ni t ric oxide (NO)-inducing effects of bismuth oxide (Bi203)-containi ng Portland cement (BPC) on human dental pulp cells. We also assessed whether heme oxygenase-l (HO-l) is involved in BPC-induced cytotox.icity in dental pulp cells Cytotoxicity and NO production induced by BPC were higher than those induced by Portland cement (PC) at 12 and 24 hours, and the former grad ua lly decreased to the level observed for PC. HO- l and inducible nitric oxide synthase (iNOS) mRNA expressions in the BPC group showed maximal increase at 24 hours. and it gradually decreased with increasing cultivation tlme Hemin treatment reversed the BPC-induced cytotoxicity ‘ whereas zinc protoporphyrin IX treatment increased the cytotoxicity. These results suggested that NO production by BPC correlates with HO-l exp1'ession in dental pulp cells Moreover ‘ BPC- induced HO-l expression in dental pulp cells plays a protective 1'ole against the cytotox.ic effects of BPC.

In this study, the cytotoxicity of commonly used local anesthetics was evaluated on odontoblasts which are essential for pulpal homeostasis in vitro. Local anesthetics, such as articaine, bupivacaine, levobupivacaine, lidocaine, mepivacaine, prilocaine, and procaine, were tested on the odontoblast cell line, MDPC-23. The concentration-and time-dependent cytotoxic effects of local anesthetics on odontoblasts were measured by MTT assay. Among local anesthetics treated for 18 h, only bupivacaine significantly showed cell death in a concentration-(LC50=1.2mM) and time-dependent manner. To confirm cell death induced by bupivacaine, the observation of cell morphology and FACS using Annexin V and propidium iodide (PI) staining were performed. As a result of Annexin V and PI staining, as well as the morphological change, only bupivacaine induced apoptotic cell death on odontoblasts when compared with levobupivacaine and lidocaine. These results suggest that bupivacaine might affect normal pulpal integrity even after uneventful local anesthesia.

We have examined the effect of NO donor, S-nitl‘ oso-N-acetyl-DL-penicillamine(SNAP) on heme oxygenase-1 (HQ-l) ex pression in human oral immortalized & malignant keratinocytes, and investigated in the control of keratinocyte proliferation evidence tha t HO-1 cou ld be involved in a low dose of NO, NO inhibitor, HOinducer, and HO inhibitor medi ated cytoprotect ion against cytotoxi city induced by a high dose of NO Oral keratinocyte growth inhibitory or anti-proliferative effects were exerted by with SNAP and hemin in a dose- and cul tivation time dependent manner The level of HQ-1 protein was increased in all cell types after exposure hernin dose, and the hemin induced HQ-1 protein achieved at higher maximum level by 12 hrs in all kind of cells , The pretreatment of cells with 0, 2 μ M SNAP reduced 1 mM SNAP-induced death in IHOK and HN4 cells , These cytoprotective effects on high dose of NO induced HQ-1 expresion and cell ular toxicity were blocked by low dose of SNAP, HCB, and ZnPP IX supporting the involvement of HQ-1 in high dose NO induced growth arrest or cell death, But these cytoprotection pattern is different from immortalized and malignant keratinocytes , These results indirectly demonstrate that HQ-1 could be involved in cytoprotection by NO priming against high dose NO induced cytotoxicity in immortalized and maigla nt oral keratinocytes, Thus, HQ-1 might be an important cellular target of NO donor, with clinical implications for the pre vention of inJlammatory di seases and anti-tumor immunity

Heat shock p1'otein (Hsp) 40 acts as a co-cha perone of Hsp70 by fac ilitating the ATPase activity of Hsp70 as well as promoting the protein fo lding and rena turation by Hsp70. In the present study. Hsp40 gene was fu sed with a gene f’ragment encoding the HJV-l TAT protein transduction domain(YGRKKRRQRRR) in a bacterial exp1' ession vector pTAT-HA to produce the TAT-fused Hsp40(TAT- Hsp40). Purified TAT-Hsp40 was effectively t 1'ansduced into the HEK 293 cells in a time- and dose-dependent manne1' To examine the effec t of TAT- Hsp40 upon oxidalive stress, HEK293 cells were exposed to H2Û2. Oxidative stress induced the ra pid increase of proteasome activity foll owed by celJ death in HEK 293 cells However ‘ HEK 293 cells t 1'ansduced by TAT- Hsp40 showed r esistance against oxidative st 1'ess induced cytot oxicity, TAT- Hsp40 transduced cell s showed dec1'eased p1'oteasome activity and inhibi ted Hs p70 degradation. These results suggest that Hs p40 rnight protect cell death f rom oxida tive st1'ess by p1'ese1'ving the cellula1' level of Hs p70.

식용꽃인 꽃베고니아(Begonia semperflorens ‘Superolympia White’), 토레니아(Torenia fournieri ‘Crown Pink’), 팬지(Viola tricolor ‘Solvetsunny Royal’) 및 펠라고니움(Pelargonium grandiflorum ‘Jessie Jarrett’) 추출물의 총페놀 함량, 전자공여능 및 세포독성에 미치 는 영향을 조사하였다. 에탄올 추출물의 총 페놀함량은 펠라고니움의 경우 531.57mg/100g으로 높게 나타났으 나 토레니아는 30.98mg/100g, 팬지는 14.62mg/100g, 꽃베고니아는 5.77mg/100g으로 낮게 나타났다. 전자공 여능은 꽃베고니아, 토레니아, 팬지의 열수 및 에탄올 추출물은 500g·mL-1에서는 모두 69.4% 이하를 나타 냈으나 펠라고니움의 열수 및 에탄올 추출물은 125g·mL-1에서도 각각 94% 내외를 나타내었다. 세포 생존율은 토레니아와 팬지의 열수 및 에탄올 추출물 처리구에서는 95% 이하를 나타내어 세포사가 일어난 것으로 추정되었다. 히스타민 억제효과는 펠라고니움 추출물의 경우 91% 이상을 나타냈으나 토레니아 추출 물은 51-66%, 팬지 추출물은 14-24%, 꽃베고니아 추 출물은 1~2%의 억제 효과만 나타났다.

This study was to taken to demonstrate the effects of exogenous nitric oxide(NO) on hu rnan pu lp cell s ‘ In volvement of cyclic 3’, 5' -monophosphate(cGMP) in p버 paJ protection induced by herne oxygenase-l (J-lO-l) against NO-induced cytotoxicity , By use of Western blotting and cell viabi lity assay, we have examined the cytotoxicity and J-lO-l induction in pulp cells that were treated with NO donor ‘ S-nitroso-N-acetyl-D, L-penici 1 lamine(SNAP) , We have assessed wheathel' HQ--l contributes the cytoprotective effect against the cytotoxicity caused by NO, and inves tigated the l'elationship between HO-l and cGMP in the s ignaling pathway, SNAP decreased cell via bility but in creased HO-l expl'ession in a concentl'ation- and time一dependent manner in hurnan pu lp cells NO-induced cyto toxicity was inhibited in the presence of the hemin(inducer of HO-l) , whel'eas was en hanced in the pl'esence zinc protoporphyrin IX(ZnPP IX, HO-l inhibitor), thus Lhe NO-induced cytoLoxicity was cOl'related with HO- l expression. R‘ etreatment with a rnemhrane-permeable cGMP analog, 8-bromo-cGMP, restored cell death and enhanced the HO-l protein expression induced by SNAP, ln contrast‘ inhibition of guanylate cyclase by lI-l -[1,2,4] ox adiazole[ 4,3 口]quinoxalin-l-one(ODQ) pretreated pulp cells to 1 mM SNAP resulting in marked cytotoxicity , These findings , demonstrating a link between J-lO-l, regulated thl'ough the cGMP system and NO-induced cytotox.icity in huma띠 p버 p ceJls , suggesti ng a protective 1'ole of HO-l in pulp infl ammatory disease

양강추출물(Alpinia officinarum, 70% ethanol extract)과 함유 주성분인 galangin은 프리라디칼소거작용과 지질과산화억제활성을 나타내었으며, H_2O_2 또는 KO_2유도 세포독성에 대해서도 억제적으로 작용하여 세포보호효과를 나타내었다. DNA single strand breakage와 같은 산화적 스트레스에 대해서도 보호작용을 하고 있다. 또한, 마우스 소핵시험에 의하여 adriamycin과 같은 superoxide유발물질에 의한 염색체 수준에서의 손상에 대해서도 억제효과를 나타내었다. 양강추출물은 galangin을 유효성분으로하여 산소프리라디칼들에 의한 산화적 손상에 억제적으로 작용하는 기전으로 산화적 스트레스에 대한 항노화, 암예방제로서의 응용가능성이 높은 추출물로서 향후 기능성 식품으로서의 응용가능성이 높을 것으로 판단되었다.

콘돼트렌즈 관리 용액의 세포독성올 검사하기 위한 방법이 여러 가지 이용되고 았 으나， 직접 소프트콘택트렌즈에 홉수된 관리용액의 독성을 조사하기는 어려운 실정이 었다. 따라서 본 연구에서는 관리용액이 홉수원 렌즈 위에 세포를 직접 배양하여 용 출된 관리용액으로 언한 세포독성을 평가하고자 시행하였다. 여러 가지 콘돼트헨즈 관련 용액 중 보존제 성분으로 가장 많이 사용되고 있쓴 Benzalkonium chloride (BAC)와 Multipurpose solutions(MPS) 빛 AOSept에 Etafilcon A(FDA공인 W 그룹， Acuvue) 재질인 소프트콘태트렌즈콜 4시간 동안 담구어 용액이 홉수되도록 한 후 배양 결막세포 (clone 1- 5c -4) 룹 콘택트렌즈 위에 직접 배양하여 2 시간 통안 용출액에 의한 세포독성을 조사하였다. 또한 같은 용액에 세포를 2시간 직접 배양하여 독성 정 도를 비교하였으며， Monolayer cell 에 같은 용액올 15분 직접 처리하여 독성올 비교 하였다. 그리고 계대 배양 시 25% 농도로 같은 용액을 세포 혼탁액에 혼합하여 부착 률과 증식률을 조사하였다. 세포독성은 세포를 계수하는 방볍과 시l 포활성올 조사하는 방법올 이용하였으며 형광염색을 통해 세포 생존용플 비교하였다. 콘택트렌즈 용출액에 의한 세포 독성은 MPS는 거의 독성이 없었으며， BAC (0,00 1%-0，α)5%) 처리군에서는 40% 의 세포 증식저해가 였으벼. BAC 0， 01% 와 AOSept (0α)()5 -0.oo1%)에서는 70%이상의 증삭저해를 나타냈다. 또한 세포를 실험 용액에 직 접 2시간 배양하여 세포뜰 계수한 결과 대조군인 식염수에 비교하변 MPS 는 40% 이상， BAC 0.001%는 70% 이상， AOSept는 80% 이상 세포 뚱식 서해가 있으며， BAC (O.α)5， 0.01%) 에서는 세포의 생존율이 없는 것으로 사료된다. MTT assay 와 LDH assay를 한 결과 세포룰 계수 하는 결과와 유사하게 나타났다. 형광염색을 이용한 생존율 조사 결 과， BAC 0.01% 처리군에서는 세포가 사멸하는 것을 확인할 수 았었다.

콘태트렌즈 다목적 용액 내에는 보존제， 소독제， 세척제， 윤활제 둥이 포함되어 있 으며 콘택트렌즈 표면에 침착하는 단백질올 제거하기 위해 물질의 계변에 홉착되어 그 표면 장력을 현저하게 저하샤키고 수액 내에 열정 농도이상으로 폰재할 때 미젤 구조를 형성하여 정상적으로 용해되지 않는 물질을 미첼구조내에서 용해시키는 특성 올 갖판 계면활성제를 사용한다. 본 연구논 계면활성제의 세척 효과와 세포독성 판계를 연구하고자 소프트 콘택트렌즈 의 세척용으로 사용되는 여러 가지 계변활성제 (Tyloxapol， Tromethamine, Poloxamine, Poloxamer40η) 가 생쥐의 섬유모세포인 L• 929 cell line에 미 치찬 저해 효과를 알아보 았다. 계면활성제를 농도별 <0,001-10%, w/w) 토 처리한 후 시간별 (24h， 48h)로 MTT 와 LDH 분석 방법올 사용하여 측정하였다. 단백칠 제거효과는 친수성 콘택트 렌즈 FDA공인 W 그룹의 렌즈 etafilcon A (함수융 58%) 를 인공누액에 65시간 담근 후 꺼내어 계면활성제의 농도와 처리시간이2， 24h) 에 따라 단백절 제거효과를 조사하였 는데 단백질이 침착된 친수성 콘택트렌즈가 각각의 계면활성제에 의해 제거된 단백질 량의 정량은 Bradford 정량 방법올 이용하여 측정하였다. 세포증식 저해효과는 24시간 처리결과 Poloxamine의 ;성우 0.1%이하에서. Poloxamer407은 5% 이하에서. Tyloxapol 은 0.1%이하에서， Tromethamine은 1% 이하의 농도에서는 세포독성윷 나타내지 않았 으나， Poloxamine의 경우 1% 에서， poloxamer407은 7% 에서， Tyloxapol은 1% 에서， Tromethamine은 1.5%에서 세포독성을 나타내었다. 세포소지판을 중심으로 평가된 MTT 분석 방법은 LDH 유리 분석 방법보다 민감하게 나타났다. 계면활성제의 세포독성이 없는 농도에서 단백질 제거효과눈 Tylox따Xll > Poloxamer-때7> Tromethamine > Poloxamine 순으로 콘택트렌즈에 침착된 단백질 제거량이 높았으며， 농도 의존적으로 효과가 높은 것으로 조사되었다. 이러한 결파똘 통해 미래의 계면활 성제는 세포독성이 낮고 세척효과가 뛰어나야 할 것으로 사료된다.

본 연구는 콘택트렌즈의 세척용으로 사용되는 여러 가지 계면활성제중 널리 사용 되고 있는 Tyloxapol과 Tromethamine의 단백질 게거 효과와 L-929세포에 미치는 저해효과를 서로 비교하기 위하기 위해 먼저 렌즈를 인공누액에 65시간 담근 후 계 면활성제의 처리시간에 따라 단백질 제거효과를 UV Photo-spectrometer를 이용하여 측정하였다. 또한 계면활성제의 L-929세포에 미치는 저해효과는 MTT assay, LDH assay 방법으로 측정하였다. 연구 결과 계면활성제가 L-929세포에 미치는 저해효과는 통일 농도에서 Tyloxapol 이 Tromethamine보다 높은 것으로 나타냈으며， 세포 수도 농도 의폰적으로 감 소하였다. 독성의 차이는 LDH assay 보다 MTT assay가 더 민감도를 보였다. 침착 된 단백질에 대한 세척효과는 동일농도에서 Tyloxapol 이 Tromethamine보다 뛰어났 다. 단백질 제거효과는 농도 의존적으로 효과가 높은 것으로 조사되었으며， Tyloxapol과 Tromethamine의 세포증식 저해를 나타내는 최저농도에서 Tyloxapol 이 Tromethamine보다 단백칠 제거효과는 월둥히 뛰어났다.

본 연구는 시중에 유통되고 있는 콘택트렌즈 단백질 제거제로 4개회사의 제품(국 내 2종， 국외 2종)을 선별한 후， 세포 독성과 단백질 제거 효능의 관계를 조사하였다. 단백질 제거제가 녹아 있는 식염수에 12시간 동안 담근 콘택트렌즈를 L929 세포주 (생쥐섬유모세포주) 위에 직접 올려놓아 용출된 용액으로 인한 세포 생사를 Trypan blue 염색올 통해 판별하는 USP Elution Assay 법을 사용하였다. 그리고 단백질 제거 제를 직접 배양세포에 15분간 처리하여 MTT Assay 인 세포 독성을 검정하였다. 또 한 단백질 제거제 효능을 조사하기 위해 FDA에서 분류한 IV group lens를 조성한 인공누액에서 단백질을 홉착시킨 Bradfod Assay 법을 통해 측정 비교하였다. MTT 결과는 1 종류의 제품에서 40% ， 3종류의 제품은 70% 이상의 세포증식 저해율이 나타 났다. USP Elution Assay에서는 동물성 단백질 제거제 Pancreatin 이 주성분인 1 종 류의 제품은 1 등급， 나머지 3종류는 O등급을 나타내였다. 또한 Bradford Assay 방법 을 이용하여 단백질 제거제의 효능을 겁정하였는데， Subtilisin A가 주성분인 A사 8 시간， Subtilisn 이 주성분인 B사 5분， Pancreatin 이 주성분인 C사 6 시간， Papain 이 주 성분언 D사는 8시간이 지난 후에 단백질 제거제 효능이 최대 효과가 나타났다.