옥수수수염은 다양한 플라보노이드를 함유하고 있어 항산화능이 보고되었으며, 전통의학에서는 부종의 제어에 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 본 연구는 LPS로 자극된 RAW 264.7 대식세포의 염증모델에서, 옥수수수염 추출물의 항염증기작을 탐색하였다. 옥수수수염 추출물과 함께 배양한 RAW 264.7 대식세포의 대식능, 항원제시 단백질 (CD80, CD86, MHC class II)의 발현량, 염증성 유전자 (iNOS, COX-2, TNF-α, IL-6)의 전사 및 염증성 싸이토카인 (TNF-α, IL-6) 분비능을 측정하였다. FITC-latex beads를 이용하여 대식능을 측정한 결과, 옥수수수염 추출물을 처리함에 따라 유의적인 차이를 보이며 농도 의존적으로 증가하는 경향을 나타내었다. 또한, 형광항체를 이용하여 LPS 자극에 따른 항원제시 단백질의 발현량을 flow-cytometer로 측정하였다. 그 결과, CD80 단백질은 옥수수수염 추출물을 처리하였을 시 농도에 관계 없이 그 양이 유의적으로 증가하였으며, CD86 단백질은 농도 의존적으로 유의적인 차이를 보이며 증가하였다. 대식세포의 대표적인 염증성 신호전달체계인 NF-kB의 down-stream 유전자의 전사량을 qRT-PCR을 이용하여 측정한 결과, iNOS, COX-2, TNF-α 및 IL-6의 전사량은 모두 유의적으로 감소하였다. 염증성 싸이토카인인 TNF-α와 IL-6의 전사량의 변화가 세포배양액 내 분비량과의 상관관계가 있는지 확인하기 위하여 ELISA법을 이용하여 배양액 내 싸이토카인을 정량한 결과, 모두 유의적으로 감소함을 보였다. 따라서, 본 연구결과는 옥수수수염 추출물의 항염증 기능을 밝히고 있다. 더불어, 대식세포의 후천성면역을 매개하는 항원제시능은 영향을 받지 않음으로서 면역저하효과는 없을 것으로 판단된다.

Coffee is one of the most familiar beverages to modern human adults, but its bio-physiological effect has not been clearly elucidated. It was known that more than one thousand chemicals were included in the ordinary coffee extract. Among them, the caffein and chlorogenic acid (caffeoylquinic acids) are most abundant and have been investigated by many authors so far. In order to know the real cellular effect of whole coffee extract elements, the dialyzed coffee extract (DCE)1) was made to get coffee elements less than 1000 Da molecular weight, which are freely absorable through gastrointestinal tract. It was directly treated in the culture of RAW 264.7 cells, a murine macrophage lineage. RAW 264.7 cells were treated with DCE equivalent to 2.5 cups of coffee (DCE-2.5), DCE-5, and DCE-10 for 12 hours, and their protein extracts were examined by histological observation and immunoprecipitation high performance liquid chromatography (IP-HPLC). RAW 264.7 cells differently expressed the proliferation-related proteins depending on the dose of DCE. DCE-2.5 and DCE-5 enhanced the cellular growth of RAW 264.7 cells by increasing the expression of β-actin, PCNA, Ki-67, MPM2, MAX, cMyc, E2F-1, and Rb-1, and by decreasing the expression of MAD and p21. These proliferation-related proteins were rarely affected by DCE-10. DCE-2.5 and DCE-5 induced the cellular proliferation of RAW 264.7 cells by the signaling of E2F-1 and cMyc, respectively, but these cellular effects almost disappeared in DCE-10. Therefore, it was presumed that the low dose of coffee, DCE-2.5 and DCE-5 might be effective for the proliferation of murine macrophages, RAW264.7 cells, contrast to the high dose of coffee, DCE-10. It was also suggested that the low dose of DCE-2.5 and DCE-5 be helpful to increase the innate immunity in vivo by increasing the cell number of macrophages in contrast to the high dose of DCE-10.

In order to perform the biological investigation of coffee extract containing different molecules, it would be necessary to develop in vitro experimental system rather than animal experiment. Although the animal experiment treated via oral intake or intravenous injection may disclose the whole systemic effect, the in vitro cell culture experiment would be more convenient to analyze direct cellular effect of coffee extract than animal experiment. Therefore, this study was aimed to develop a dialysis method for the crude coffee extract to perform the biological investigation using murine macrophage cell line, RAW 264.7. First of all, the RAW 264.7 cells treated with dialyzed coffee extract were observed, and subsequently their protein extracts were analyzed by gel filtration chromatography, thin layer chromatography, and immunoprecipitation high performance liquid chromatography (IP-HPLC). Resultantly, it was found that the low dose (20μg/mL) of dialyzed coffee extract, about 5 cups of ordinary coffee drinking for human adult, enhanced the growth of RAW 264.7 cells by increased expression of β-actin and Ki-67, and also induced the anti-inflammatory effect by decreased expression of NFkB, TNFα, and LC3 contrast to the high dose (40μg/mL) of dialyzed coffee extract. The low dose of dialyzed coffee extract produced almost no harmful effect on RAW cell culture for 12 hours, rather than it produced stimulatory effect on RAW cells by increasing the cell number and enhancing the protein expression of β-actin, Ki-67. Therefore, it was thought that the low dose of dialyzed coffee extract is applicable to cell culture experiment without difficult purification procedures of coffee elements. In addition, as the contrast cellular effect between the low and high dose of coffee extract was found in this study, it was also presumed that the low dose of coffee extract may play an important role in the inflammatory reaction of murine macrophages.

Chronic inflammation, which results from continuous exposure to antigens, is one of major reasons for tissue damage and diseases such as rheumatoid arthritis and type 2 diabetes. In this study, we investigated the anti-inflammatory effects of extracts (hexane, CHCl3, MeOH, MeOH/H2O, and H2O) from GW10-45, which is our new cultivar of an edible mushroom Pleurotus ferulae (ASI 2803 and ASI 2778), in RAW264.7 murine macrophages. None of the extracts showed cytotoxicity in RAW264.7 cells and the hexane, CHCl and H extracts reduced nitric oxide (NO) production, an important inflammatory marker, in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated RAW264.7 cells. Particularly, the extract (CG45) inhibited NO production more than the other extracts did. To elucidate the effects of CG45 on molecular targets involved in proinflammatory responses, we performed western blot analysis. Expression of inducible nitric oxide (iNOS) significantly decreased in LPS and CG45 co-incubated cells compared to that in LPS only-treated cells. Additionally, another protein thatplays a critical role in inflammation, was down-regulated in cells treated with both LPS and CG45. In the nuclear factor (NF)- B pathway, phosphorylation of I Bα decreased in RAW264.7 cells treated with both LPS and CG45. Furthermore, CG45 inhibited the phosphorylation of NF- B in LPS-stimulated RAW264.7 cells. Conclusively, CG45 could suppress proinflammatory responses in LPS-stimulated RAW264.7 cells by down-regulating not only the phosphorylation of NF- B and I Bα but also the expression of iNOS and COX-2 without any cytotoxicity.

울금의 주요 성분인 커큐민과 대두 추출물인 이소플라본의 피부 미용 측면에서 생리활성을 연구하여 화장품 소재로서 가능성 여부를 규명하고자 하였다. 본 연구는 세포실험을 통해 커큐민과 대두 추출물을 피부 세포에 대한 독성 및 항염증을 확인하고, HPLC을 이용하여 대두 추출물의 성분분석과 피부에 적용하였을 때 수분과 유분, 홍반변화를 측정하였다. 본 연구 결과 커큐민이 RAW 264.7 세포에 대한 독성이 적은 것으로 확인되었으며, 항염증에 대한 효과를 확인하였다. 8주 동안 커큐민과 대두 추 출물이 함유된 화장품과 식이를 병행하여 사용하였을 때 수분함량 변화, 유분함량 변화, 홍반 지수의 감 소가 통계적으로 유의미한 변화를 나타내었으며, 여드름 피부에 유의한 효과를 가질 수 있음을 확인하였 다. 따라서 본 연구는 커큐민과 대두 추출물이 화장품 소재로 사용 시 여드름 피부 개선에 효과적인 화 장품 소재로서 활용 가능성이 있을 것으로 사료된다.

본 연구에서는 녹각영지버섯 추출물의 항산화 효과 및 lipopolysaccharide (LPS)/interferon (IFN)-γ로 자극 된 RAW 264.7 대식세포에서 항산화 효과 및 항염증 효과를 조사하였다. 녹각영지버섯의 항산화 활성 을 확인하기 위하여 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)과 2,2'-azino-bis-3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonic acid (ABTS) radical 소거 활성 및 reactive oxygen species (ROS) 생성량을 측정한 결과, DPPH radical 및 ABTS radical 소거효과에 대한 IC50은 각각, 80.74, 52.28 ㎍/ml의 radical 소거능이 관찰되었으며 ROS 생성량은 농도 의존적으로 감소하는 것으로 나타났다. 그리고, RAW 264.7 대식세포를 이용하여 항산화 및 항염증 활성을 확인하기 위하여 ROS 및 nitric oxide (NO) 생성량을 측정한 결과, 활성산소 종 ROS와 염증 매개물질인 NO는 투여농도 의존적으로 감소하였다. 또한, 염증과 관련된 inflammatory cytokine의 발현을 농도 의존적으로 억제하여 항염증 활성을 나타내는 것을 확인할 수 있었다. 이상의 결과로부터 녹각영지버섯 추출물은 항산화 및 항염증을 지닌 기능성 소재로 활용이 가능할 것으로 사 료된다.

염증성 사이토카인은 파골세포형성과정에서 중요한 요인이며, 뼈의 흡수는 자주 골다공증과 연결된다. 설포라판은 보로콜리의 화뢰로 부터 분리된 물질로 염증성 사이토카인을 억제한다고 알려져 있다. 본 실험 에서는 Receptor activator of nuclear factor kappaB ligand(RANKL)로 자극된 세포에서 설포라판이 파 골세포 형성 억제에 대한 효과를 측정하였다. 설포라판은 대식세포인 RAW 264.7 세포에서 파골세포 특이 마커 유전자인 tartrate-resistant acid phosphatase(TRAP), Cathepsin K, matrix metalloproteinase 9 (MMP-9), calcitonin receptor을 저해하였으며, TRAP, MMP-9, tumor necrosis factor receptorassociated factor 6(TRAF6)와 전사인자인 nuclease factor of activated T cells(NFATc1)의 단백질 발현 과 RANKL로 자극하였을 때 전자인사인 nuclear factor kappaB(NF-kappaB)의 전사활성도 억제 하였다. 이와 같은 결과로 설포라판이 NF-kappaB의 전사활성 억제뿐만 아니라, 파골세포형성인자(TRAP, cathepsin K, MMP-9, calcitonin, NFATc1)와 NFATc1의 발현을 억제시키는 효과가 있음을 확인하였다.

Nanoparticles are widely used in various fields such as electronics, medicines and getting focus on the application in food industry for developing intelligent delivery system with bioactive ingredients or functional nutrients. Basic study on possible toxicological effect of food applicable nanoparticles is required for a practical application in food industry. In this study, size-controlled bovine serum albumin (BSA) nanoparticles were prepared by a desolvation method and their cytotoxicity was investigated. BSA nanoparticles were prepared with mean diameters as 115, 137, 159, and 299 nm, then cytotoxicity was evaluated with RAW 264.7 macrophages as in vitro model. Cell viabilities were significantly affected as increasing nanoparticle concentration. Smaller the sizes of nanoparticles, LD50 values were significantly reduced. LD50 values of BSA nanoparticles were 50, 65, 126, and 170 μg/ml, respectively. Nanoparticle was supposed to induce the apoptosis of RAW 264.7 marcrophages and underlying mechanism will be investigated in future. These findings will be used as valuable basement for nanofood development with BSA nanoparticles.

제주산 식용 고사리를 열수와 70% 에탄올로 추출한 후, 70% 에탄올 추출물을 순차적으로 헥산, 에틸아세테이트, 부탄올, 증류수로 분획하여 폴리페놀 함량과 항산화 활성 및 NO 생성 저해효과를 측정하였다. 총페놀 함량은 열수와 70% 에탄올 추출물이 각각 50.0과 43.4mg GAE/g이었고, 에틸아세테이트와 부탄올 분획물에서 각각 104.3과 58.7mg GAE/g로 높았다. DPPH 라디칼 소거활성(IC50)은 에틸아세테이트 분획물이 100.6μg/mL로 가장 높았고, 그 다음으로 부탄올 분획물(182.6), 70% 에탄올 추출물(231.5) 순이었다. ABTs 라디칼 소거활성(IC50)은 열수와 70% 에탄올 추출물이 각각 102.4와 119.4μg/mL이었고, 분획물에서는 에틸아세테이트가 70.7μg/mL으로 가장 높았으며 그 다음으로 부탄올(141.7)이었다. 활성산소 흡수능력(ORAC)은 열수와 70% 에탄올 추출물이 각각 267.8과 205.5mg TE/g이었고, 에틸아세테이트 분획물이 836.0mg TE/g로 가장 높았으며, 부탄올 분획물은 337.9mg TE/g이었다. NO 생성 저해활성(IC50)은 에틸아세테이트 분획물이 24.9μg/mL로 가장 높았으며, 그 다음으로 헥산과 부탄올 분획물이 34.9와 118.0μg/mL이었다. 결론적으로 제주산 고사리의 에틸아세테이트 분획물은 총페놀 함량은 물론 항산화 활성과 항염 활성이 가장 높아 기능성 소재로 활용될 수 있을 것으로 추정되었다.