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한국응용곤충학회 학술대회논문집

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2012 한국응용곤충학회 정기총회 및 춘계학술발표회 (2012년 5월) 195

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돼지 써코바이러스 2형(porcine circovirus type 2)은 단일가닥 원형DNA바이러 스이며 돼지에 심각한 질병을 일으키는 돼지이유자돈전신성소모성 증후군의 주요 한 인자로 알려져 있다. 돼지 써코바이러스 2형은 2개의 주요한 ORF를 가지고 있 으며 ORF1은 바이러스의 복제, ORF2는 캡시드단백질의 형성에 관여한다. 이 중, ORF2의 해독에 의해 생성된 캡시드단백질은 바이러스의 구조형성 뿐만 아니라 항 원단백질로써 알려져 있으며, 이에 따라 본 연구에서는 베큘러바이러스 다각체 단 백질과 부분 융합에 의한 돼지 써코바이러스 2형 구조단백질의 재조합 발현을 확 인하였다. 발현된 단백질은 SDS-PAGE 상에서 분석하였고, 항-돼지 혈청, 항 -PCV2 ORF2 단일항체 그리고 히스텍 항체를 사용하여 Western blot 분석으로 확 인하였다. 그 결과 재조합 단백질은 재조합 바이러스 접종 후 2일째부터 발현이 나 타나며 4일째 최대 발현하는 것을 확인하였다. 또한 다각체 단백질과 부분 융합한 바이러스는 비융합 바이러스보다 재조합 단백질 생산이 증대 되었으며, 이는 다각 체 단백질과 부분 융합을 이용한 돼지 써코바이러스 2형 구조단백질 ORF2의 발현 을 향상 시킬 수 있음을 보여준다.
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ORF11 (ac11) of Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) is a highly conserved baculovirus gene whose homologs are found in all lepidoteran Group I NPV, but its function is unknown so far. To determine the role of ac11 in baculovirus life cycle, ac11 knock-out mutant, Ac11KO, was constructed using the plasmid capture system (PCS). Real-Time PCR analysis showed that ac11 transcript was first detected at 6 h post-infection (p.i.) and accumulated to maximum at 48 h p.i., indicating that ac11 is belong to late gene. When the genomic DNA of Ac11KO was transfected into Sf9 cells, viral replication was restricted to a cell transfected originally. While viral transmission of the Ac11KO was not observed in Sf9 cells, production of budded virus (BV) in Sf9 cells transfected with Ac11KO was observed by transmission electron microscopy (TEM). These results suggest that the ac11 is essential for AcMNPV to produce infective BV.
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Plasmids from Bacillus thuringiensis have been implicated in pathogenicity as they carry the genes responsible for different types of diseases in mammals and insects. B. thuringiensis serovar mogi of a novel serogroup (H3a3b3d), which showed mosquitocidal activity against Anopheles sinensis and Culex pipiens pallens, was isolated from fallen leaves in Mungyeong city, Republic of Korea. In contrast to the complicated plasmid profiles of B. thuringiensis H3 serotype strains, the B. thuringiensis serovar mogi contained only megaplasmid (> 30 MDa) on which the toxin genes were occasionally located. Sequence analysis using 454-pyrosequencing revealed that the megaplasmid harbored at least seven putative cry genes, showing about 84%, 75%, 73%, 58%, 84%, 39% and 75% similarities in amino acid sequences with Cry27Aa, Cry19Ba, Cry20-like, Cry56Aa, Cry39ORF2, Cry8Ba and Cry40ORF2, respectively. These cry genes were cloned to the Escherichia coli-B. thuringiensis shuttle vector, pHT1K, and then introduced into an acrystalliferous B. thuringiensis Cry-B strain for further molecular characterization. This novel 3a3b3d type strain, B. thuringiensis serovar mogi, could be used as a good resource for studying unknown mosquitocidal cry genes.
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In the transcriptome surveys of Laodelphax striatellus, several cDNA sequences showed a high level of similarities to the insect picorna-like virus genomes. Interestingly, there was no sequence similarity between picorna-like virus sequences from the RSV-viruliferous and those from the non-viruliferous L. striatellus. Picorna-like virus from the non-viruliferous L. striatellus was a geographical isolate of Himetobi P virus (HiPV). The genome of the HiPV was 9,272 nt in length excluding the poly(A) tail and contained two open reading frames (ORFs), which were separated by a 176 nt intergenic region that functions as an internal ribosome entry site (IRES). The 5' ORF encodes the non-structural proteins and the 3' ORF encodes the capsid proteins. The partial genomic RNA of the picorna-like virus from the RSV-viruliferous L. striatellus, LsPV-2, was 8,769 nt in length excluding the poly(A) tail and contained a single, large open reading frame (nt 1–8,535) encoding a 2,845 aa polyprotein. In terms of sequence similarity, identity, and genome organization, LsPV-2 resembled insect picornalike viruses belonging to the family Iflaviridae. A phylogenetic analysis based on RNA-dependent RNA polymerase (RdRp) sequence showed that LsPV-2 was most closely related to the deformed wing virus (DWV). The HiPV and LsPV-2 were incompatible each other in L. striatellus, suggesting that these two picorna-like viruses may have important functions in transmission of the RSV.
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2011년 봄과 가을동안 한국내의 주요 국립공원 중 소백산, 덕유산, 가야산, 월악 산, 속리산 국립공원 주변의 토양을 채집하여 곤충병원성 선충에 대한 분포 조사를 실시하였다. 각 지역에서 토양 샘플을 채집하여 미끼 곤충인 꿀벌부채명나방 (Galleria mellonella) 유충을 이용하여 곤충병원성 선충 유무를 확인하였다. 40곳 의 토양 샘플 중 곤충병원성 선충이 검출된 지역은 무주, 합천, 문경, 제천, 충주 지 역으로 Steinernema속 7종류와 Heterorhabditis속 1종이 발견 되었으며 검출율은 17.5% 였다. 곤충병원성 선충의 신속한 분류를 위해, 침입태 유충의 DNA를 분리 한 후 ITS 영역을 이용하여 분자학적으로 동정한 결과 Steinernema속 7종은 모두 S. monticolum으로, Heterorhabditis속 1종은 H. megidis로 동정되었다. 곤충병원 성 선충이 발견된 지역의 식생을 조사한 결과 대부분 낙엽송(Larix kaempferi)이 서 식하는 지역이었다.
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병해충 방제시 농약사용 절감과 방제효율 개선을 위해 고속살포기(SS기; Speed Sprayer; HA-1000SCA)를 사용하여 2개 시험포장을 대상으로 각 포장에 동 일한 처리를 하였다. 시험처리는 관행구(노즐:ø1.0mm 표준노즐; 분무압력 : 20kg/cm2; 표준농도; 살포량 : 1L/3.3m2), 관행저물량구(노즐:ø1.0mm 표준노즐; 분무압력 : 20kg/cm2; 표준농도; 살포량 : 0.7L/3.3m2), 저물량-1구(노즐:ID노즐 (Lechler사; 스위스); 분무압력 : 10kg/cm2; 1.5배 고농도; 살포량 : 0.5L(‘08), 0.5→ 0.7L(’09~‘10)/3.3m2), 및 저물량-2구(노즐:ID노즐(Lechler사; 스위스); 분무압력 : 10kg/cm2; 1.5배 고농도; 살포량 : 0.7L(‘08), 0.7→1.0L(’09~‘10)/3.3m2)로 설정하 여 방제하였다. 시험처리 포장간(시험구 Ⅰ과 Ⅱ)에는 배나무의 수령이 다르고 포 장의 위치 차이가 있어 포장간 차이를 분석하기 어려웠다. 약제저리 방법간에 병해 충 방제효과를 조사한 결과, 검은별무늬병은 대체적으로 관행시험구에서 방제효 과가 좋았으나, 성페로몬트랩으로 나방류의 발생양상을 조사시 처리구간의 뚜렷 한 차이를 보기는 어려웠다. 처리구간의 수확과실에 대한 병해충 피해정도도 재배 기간중 병해충 발생양과 유사하게 관행처리구에서 적은 피해를 보이는 경향이었 다. 2009년에 시포험포장 Ⅰ과 Ⅱ의 관행저물량구에서 깍지벌레류에 의한 피해과 율이 각각 2.1과 7.5%로 가장 많았고, 다른 처리구에서는 0.9~1.4%의 피해과율로 큰 차이가 없었다. 2010~’11년에도 2009년과 같이 관행구에서 깍지벌레에 의한 피 해과실이 더 적은 결과를 보였다. 심식충류와 잎말이나방류에 의한 과실피해는 대 체로 살포물량과 농약사용량이 적은 관행저물량 및 저물량-1구에서 피해가 더 많 았다. 따라서, 단위면적당 농약사용량(A.I.)은 일정하게 유지하여야 할 것으로 생 각된다.
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Insulin/insulin-like peptide-binding protein (IBP) is abundantly found in venom of the solitary hunting wasp, Eumenes pomiformis (Hymenoptera: Eumenidae). E. pomiformis IBP (EpIBP) is most similar to insect IBP-like proteins that are known to inhibit insect growth and insulin signaling. To investigate the toxicity and target protein, EpIBP was in vivo expressed by Escherichia coli. Spodoptera exigua (Lepidoptera: Noctuidae) larvae injected with EpIBP showed a 20% lower pupation rate than the control larvae, although their body weight was not significantly different from the control when the larvae were provided artificial diet after the injection. EpIBP extended the larval stage without inducing paralysis of S. exigua larvae. To investigate the effects of EpIBP on caterpillar under a starvation condition, survivorship and body weight of the EpIBP-injected were evaluated without providing artificial diet until all the larvae died. The survivorship of the EpIBP-injected larvae was 24-36% higher than the control larvae at 4-5 d post-injection. The body weight of the control larvae reduced to 59% that is approximately 10% lower than the body weight of the EpIBP-injected larvae. These results suggest that EpIBP might inhibit the metabolism of the caterpillars, which is likely related with insulin-like peptide signaling pathway, suppress the loss of body weight and eventually extend the larval stage. An EpIBP-binding protein (EpIBPBP) isolated by immunoprecipitation was matched with a coiled-coil domain-containing protein of the fruit fly. The full-length sequence analysis of EpIBPBP is in progress.
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현재 파의 육종 및 채종 수분을 위해 파리류를 사용하고 있으나, 먹이구입 곤란, 악취 등 비 위생문제로 수분에 어려움이 많다. 따라서, 파의 F1 채종에 적합한 수분 곤충을 선발하기 위하여 파리류를 비롯한 서양뒤영벌, 머리뿔가위벌, 꿀벌, 연두금 파리에 대하여 화분매개능력을 조사하였다. 육종용 대파의 교배순화를 위한 자식 케이지(Ø=0.4m, h=0.5m) 내에서 화구수정률을 조사한 결과, 파리류가 다른 실험 곤충보다 3-4배 많았음에도 불구하고 서양뒤영벌은 파리류와 같은 화구수정률을 보였으며, 다른 3가지 곤충은 화구수정률이 저조하였다. 또한 소화수정률 및 종자 수의 경우에서도 뒤영벌 방사구가 대조인 파리류와 유사한 수준을 보여 자식케이 지에서의 육종용 파의 수분에는 뒤영벌을 이용하는 것이 효율적이라고 생각된다. 채종용 파에 뒤영벌을 화분매개곤충으로 사용하기위해 자식케이지내 적정한 뒤영 벌의 수를 조사한 결과, 뒤영벌 일벌 10-15마리내외가 효율적이라고 판단된다. 또 한 설탕물의 공급여부에 따라서 일벌수명에 약 4배정도의 차이가 있어 파에서 뒤 영벌의 봉군관리를 위해서는 설탕물을 공급하주는 것이 반드시 필요하다고 생각 된다.
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Spider silks hold great potential as biomaterials with extraordinary properties. Here we report cloning and characterization of the major ampullate silk protein gene from the spider Araneus ventricosus. A cDNA coding for the partial major ampullate silk protein (AvMaSp) was cloned from A. ventricosus. Analysis of the cDNA sequence shows that AvMaSp consists of 240 amino acids of a repetitive region and 99 amino acids of a C-terminal non-repetitive domain. The peptide motifs found in spider major ampullate silk proteins, (A)n, (GA)n, and (GGX)n, were conserved in the repetitive region of AvMaSp. Phylogenetic analysis further confirmed that AvMaSp belongs to the spider major ampullate spidroin proteins. The AvMaSp-R cDNA, which contains sequences encoding for 240 amino acids of a repetitive domain, was expressed as a 22 kDa polypeptide of soluble form in baculovirus-infected insect cells. Recombinant AvMaSp-R was degraded abruptly by trypsin. However, AvMaSp-R was stable at 100 °C for at least 30 min. Additionally, the AvMaSp-R was stable at various pH values from 2 to 12 for at least 1 h. Taken together, our findings provide the molecular structure and biochemical property for A. ventricosus major ampullate silk protein as a biomaterial.
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Bee venom contains serine proteases and serine protease inhibitors. In this study, we identified a bumblebee (Bombus ignitus) venom Kunitz-type serine protease inhibitor (Bi-KTI) that acts as a plasmin inhibitor. Bi-KTI showed no detectable inhibitory effect on factor Xa, thrombin, or tissue plasminogen activator. In contrast, Bi-KTI strongly inhibited plasmin, indicating that it acts as an antifibrinolytic agent. The fibrin(ogen)olytic activities of B. ignitus venom serine protease (Bi-VSP) and plasmin in the presence of Bi-KTI indicate that Bi-KTI targets plasmin more specifically than Bi-VSP. These findings demonstrate a novel mechanism by which bumblebee venom affects the hemostatic system through the antifibrinolytic activity of Bi-KTI and through Bi-VSP-mediated fibrin(ogen) olytic activities, raising interest in Bi-KTI and Bi-VSP as potential clinical agents.
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In arthropods, an immune challenge triggers a serine protease cascade that leads to the activation of prophenoloxidase (proPO)-activating factors (PPAFs), which are also called proPO-activating enzymes (PPAEs) or proteinases (PAPs). PPAFs are activated by cleavage between their clip and serine protease domains. Once activated, PPAFs convert proPO to phenoloxidase (PO), which then catalyzes the production of quinones to form melanin. In this study, we identified a Bombyx mori PPAF(BmPPAF) that involves in the pupal melanization. In the fat body, expression of BmPPAF was detected on day 1 to 3 of the pupal stage. RNA interference (RNAi)-mediated BmPPAF knock-down inhibited pupal melanization, resulting in the delay of pupal melanization. Based on these results, we concluded that BmPPAF is involved in the melanization of pupal stage in silkworm metamorphosis.
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Bee venom is a rich source of pharmacologically active substances. In this study, we characterized a B. terrestris venom Kunitz-type serine protease inhibitor (Bt-KTI). Bt-KTI consists of two exons encoding 82-amino acids (aa), including a predicted 24-aa signal peptide and a 58-aa mature peptide. Recombinant Bt-KTI was expressed as a 6.5-kDa peptide in baculovirus-infected insect cells. Bt-KTI showed no detectable inhibitory effect on factor Xa, thrombin, or tissue plasminogen activator. In contrast, Bt-KTI strongly inhibited plasmin, indicating that it acts as a plasmin inhibitor. The electrophoretic mobility shift assay showed that Bt-KTI binds to plasmin, indicating the formation of a plasmin-Bt-KTI complex. These results demonstrate that Bt-KTI acts as an antifibrinolytic agent, suggesting a role for Bt-KTI as an anti-bleeding agent.
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This study was carried out to know whether the host plant feeding have an influence to subsequent prey consumption of a zoophytophagous mirid, Nesidiocoris tenuis, with biological control potential. Piece of leave of Paprika, Sesame, and cotton ball soaked with water were respectively provided to the test insects, adult mirid starved about a day, and frozen eggs of Ephestia kuehniella, were presented to them for a day and counted the number of the eggs consumed by them. The mirid fed by Sesame leave took significantly less prey than both the Paprika and the water fed one.
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The genus Pratylenchus is considered as one of the most important plant-parasitic nematodes around the world because of its broad spectrum host ranges and worldwide distribution. 72 species of root-lesion nematodes have already been described from various parts of the globe. Among all of them, only 5 species are regulated as a target species in quarantine inspection. As the importation of target items inspecting nematodes are surely increasing every year, detection rate of nematodes in quarantine also increased. However, the rate of species identification has been decreased due to lack of related information. The species belonging to genus Pratylenchus are shown very low identification rate because we have specimens and information about only 10 domestic species and 5 regulated species. In this study, we identified the species in the genus Pratylenchus and obtained related information for application in the quarantine field. Species identification was performed with extracted nematodes from plants obtained in the recent quarantine inspection. Newly identified species were 5 species including Pratylenchus crenatus, P. fallax, P. kumamotoensis, P. panamaensis and P. penetrans. The photos, measured value and morphological characters of each species are provided.
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농촌진흥청에서는 농작물 병해충 발생에 대하여 신속하게 대응하여 농가피해 를 최소화하기 위하여 2010년부터 2011년까지 웹GIS (Geographical Information System)를 기반으로 한 국가 병해충 관리시스템(National Pest Management System)을 구축하였다. 이 시스템(http://npms.rda.go.kr)은 크게 병해충 예찰, 예 측, 진단, 동아시아병해충네트워크로 구성되어 있으며 예찰자료 입력, 통계정보 조 회가 가능하고 웹지도상에서 발생분포를 확인할 수 있다. 병해충 예찰시스템에서 는 벼, 보리, 사과 등 11개 작물에 대해 지정된 해충과 병 발생 조사자료를 입력·관리 할 수 있다. 병해충 예측시스템에서는 국가농림기상센터의 기상자료를 이용한 격 자형 기상 추출값을 기반으로 벼, 사과, 배, 감귤, 고추의 주요 해충과 병에 대한 발 생예측결과를 웹지도상에서 예찰자료와 비교할 수 있다. 또한 해충·병·잡초 통합 DB를 병해충 진단시스템에 구축하여 해충·병·잡초 명칭 및 이미지 검색이 가능하 고 전문가에게 의뢰를 진단결과를 받아 볼 수 있다. 동아시아병해충네트워크에서 는 중국, 일본, 베트남 등 13개국의 벼에 발생하는 멸구류의 발생밀도를 집계하고 이를 통해 동아시아 국가 간 멸구류 이동 모니터링의 기반을 마련하였다. NPMS의 병해충 예찰, 예측정보는 병해충 방제의 기초자료로서 앞으로 이를 활용하여 병해 충 피해를 최소화하고 방제비용을 줄이는데 기여할 수 있을 것으로 사료된다.
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