After liquid culture of Phellinus baumii (P. baumii) mycelium (LPBM) was prepared, LPBM was fractionated into A∼E fraction (A; hot-water extract of liquid culture including mycelia, B; crude polysaccharide of A, C; hot-water extract of mycelia, D; crude polysaccharide of C, and E; crude polysaccharide of culture broth) to evaluate for possibility as functional materials with immunostimulatory activity. In macrophage stimulatory activity, E fraction as postbiotics significantly increased secretion of NO and IL-12 from RAW 264.7 cells. Next, when the splenocytes of C3H/HeN mice were primary cultured, E fraction showed significantly mitogenic activity with enhancing mitogen-related cytokines (IFN-γ and TNF-α) production from splenocyte. E fraction also potently stimulated GM-CSF production from Peyer’s patch cells as well as Peyer’s patch-mediated bone marrow cell proliferation. In addition, the immunostimularoy E fraction contained neutral sugar (73.8%), uronic acid (10.6%), protein (7.8%), and polyphenol (7.5%), and mainly consisted of glucose (39.1%), galactose (21.7%), mannose (11.1%), galacturonic acid (9.9%), and arabinose (8.9%) as component sugars. In conclusion, it was demonstrated that postbiotics including exopolysaccharide fractionated from liquid culture of the P. baumii mycelium could enhanced immunostimulatory activity.

본 연구에서는 장수진흙버섯 자실체로부터 메탄올과 열수를 이용해 추출한 물질의 항당뇨, 항콜린에스테라아제, 항염증 효과를 탐색하였다. 항당뇨 실험에서 α-amylase 효소에 대한 메탄올과 열수 추출물의 저해 효과는 1.0~2.0 mg/ml의 농도에서 각각 50.67~61.33%와 52.67~ 65.00%를 보여 양성대조군인 acarbose의 83.67~96.33% 에 비해 크게 낮았으나 α-glucosidase에 대한 메탄올과 열수 추출물의 1.0~2.0 mg/ml의 농도에서의 저해 효과는 각각 74.33~89.67%와 75.67~91.00%를 보여 53.67%와 84.67%를 보인 양성대조군 acarbose에 비해 유의하게 높아 탄수화물 분해효소인 α-glucosidase에 대한 저해 효과가 특이적으로 높았다. 메탄올과 열수 추출물의 아세틸콜린 에스테라아제에 대한 저해 효과는 1.0 mg/ml의 농도에서 각각 96.05%와 94.58%를 보여 양성대조군인 galanthamine (97.80%)과 유사하였으나 butyrylcholinesterase에 대한 저해 효과는 1.0 mg/ml의 농도에서 각각 91.05%와 82.27%를 보여 galanthamine의 저해 효과 81.12%에 비해 유의하게 높았다. 염증 저해 효과 실험에서 RAW 264.7 대식세포 가 배양되고 있는 배지에 메탄올과 열수 추출물을 각각 전처리 후 염증 매개 물질인 LPS를 1 μg/ml 처리하여 24 시간 배양 후 NO 생성의 저해 효과를 조사한 결과 각각의 추출물 농도가 증가함에 따라 생성된 NO의 양도 점차 유의하게 감소하는 경향을 나타내었다. Carrageenan의 주사에 의해 흰쥐의 뒷발에 유도된 부종 저해실험에서는 투여한 메탄올 추출물의 농도가 증가함에 따라 뒷발에 유발 된 부종의 용적도 농도 의존적으로 점차 감소하는 추세를 나타냈다. 따라서 장수진흙버섯의 자실체에 함유된 물질은 항당뇨, 항콜린에스테라아제 및 항염증 효과를 지니고 있어서 천연 건강식품으로의 개발 가능성이 높은 것으로 사료 된다.

P. linteus(품종명: 고려상황, PLKS)와 P. baumii (장수 상황, PBJS)를 동일한 조건하에서 인공재배하여 얻어진 자실체를 70% 메탄올, 60% 에탄올, 열수추출하여 폴리페놀과 플라보노이드 측정 시 함량은 60%에탄올 추출물에서 가장 높게 나타났다. 60%에탄올을 용매로 PLKS와 PBJS의 자실체를 추출하여 농도별로 DPPH (2,2-diphenyl- 1-picrylhydrazyl), ABTS (2,2'-azino-bis (3-ethylbisthiazoline- 6-sulfonic acid) 라디칼 소거능을 측정한 결과 PLKS와 PBJS는 거의 유사한 항산화 활성을 보였으며 자실체가 균사체보다 2-3배 이상 높은 항산화 활성이 측정되었으나 FRAP (ferric reducing antioxidant power)분석에서는 자실체와 균사체 간에 큰 차이가 없는 것을 확인하였다. PLKS와 PBJS의 자실체 ethyl acetate 분획물을 HPLC 분석한 결과 styrylpyrone 계 폴리페놀 성분인 davallialactone, hispidin, hypholomine B, inoscavin A를 검출할 수 있었으나 균사체에서는 검출되지 않아 자실체 특이적인 화합물인 것을 확인하였다.

장수상황버섯 (Phellinus baumi) 자실체에서 추출한 베타글루칸을 이용하여 개미의 진정사회성에 미치는 영향을 이해하기 위한 연구를 수행하였다. 일본 왕개미 (Camponotus japonicus)를 베타글루칸의 추출물 (BGE)이 포함된 먹이를 공급한 후 진정사회성에 관한 실험을 실시하였다. 멸균된 토양을 PET 병에 넣은 후 세 가지 농도의 BGE 먹이를 이용하여 배양을 실시하였다. 설탕분말에 BGE를 중량비율로 각각0, 20, 50% (g/g)를 혼합하여 대조군, 저, 고의 세가지 농도로 BGE먹이를 만들었다. 진정사회성에 미치는 영향을 연구하기 위해 세 가지의 진정사회성 지표를 이용하여 실험을 수행하였다. 개미집의 수, 협동 방어 노력 지수 (CDI), 개체군의 규모를 지표로 사용하였다. 고농도의 BGE를 공급한 집단에서 대조군보다 개미집의 형성도가 유의적으로 높았다. 외부 여왕 개미에 대한 반응을 나타내는 CDI에서도 차이를 보였는데, 고농도의 BGE 그룹은 다른 그룹보다 방어 체계를 완성하는 데 상대적으로 적은 시간이 걸렸고 참여하는 개미의 수도 유의적으로 많았다. 개미와 알의 수로 관측한 개체군의 규모에 있어 대조군과 BGE 그룹 간에 명백한 차이가 있었다. BGE가 공급된 그룹은 여왕을 제외하고 개미와 알의 수가 가장 많았다. 이 결과를 종합하면, 개미의 먹이에 BGE를 첨가 할 때, 개미는 높은 진정 사회성 강화 지수를 보이며 이 결과는 BGE가 개미의 진정사회적 기능수행에 매우 긍정적인 영향을 준다는 것을 나타낸다.

The fruiting bodies of Sanghwang mushrooms, Phellinus linteus HN1009K (PLH) and Phellinus linteus (Korea Sanghwang, PLK), and Phellinus baumii (Jangsu Sangwhang, PB), were extracted with 70% methanol. The methanolic extracts of different concentrations (5–200 μg/ml) showed inhibitory effects of 20–95% on plated aggregation induced by collagen (2.5 ug/ml), ADP (10 uM), and thrombin (0.1 U/ml). The PLH, PLK, and PB extracts (200 ug/ml) reduced ATP release from ADP-activated platelets by 50¬60%. These results suggest that the methanolic extracts from Sanghwang mushrooms inhibit platelet aggregation.

This study aimed to investigate antioxidant activity of various extracts from fruiting bodies and mycelia of two Phellinus linteus strains and P. baumii. The Phellinus strains have cultivated on oak and mulberry logs. The fruiting bodies species were harvested from each Phellinus strain and used in this study. The tested items include: 2, 2’-azinobis[3-ethylbenzthiazoline]-6-sulfonic acid (ABTS), free radical scavenging assay and determination of total phenolics contents (TPC), ferric reducing antioxidant power assay (FRAP), and DPPH (1, 1-diphenyl-2- picrylhydrazyl) radical-scavenging activities. Different extractions with 60% Ethyl alcohol, 70% methyl alcohol and heat water were done on the mycellial and fruiting bodies samples of the mushroom species. The methyl alcohol extraction from fruiting body of P. linteus KACC93057P displayed the highest antioxidant activity on ABTS, FRAP, and DPPH assays. The ethyl acetate fraction was concentrated and subjected to an ODS column chromatography, followed by Sephadex LH-20 column chromatography. Finally six compounds 1-6 were detected by preparative reversed-phase HPLC.

장수진흙버섯(Phellinus baumii)의 균사추출물은 임상실험을 통해 항종양, 면역조절 작용 등이 보 고되었고, 복분자(覆盆子, Rubus coreanus)는 항염, 항산화, 항헬리코박터파이로리 작용 등이 보고 되었다. 본 연구에서는 현미, 적미, 흑미 등 3가지 곡물배지에 복분자 추출물(10, 20, 30%)과 부산물(20, 30, 100%)을 각각 첨가하여 장수진흙버섯(상품명 : 상황버섯) 균사체의 배양적 특성을 조사하였다. 현미 및 적미에 복분자 추출물을 첨가하여 배양한 결과 추출액 30%에서 장수진흙버섯의 균사생 장이 가장 우수하게 나타났으나 흑미 곡물배지 30%에서는 생장이 비슷하였다. 그리고 복분자 부산 물을 첨가하여 배양한 결과에서는 현미, 흑미, 적미 배지에서 부산물의 첨가량이 증가 할수록 균사 생장이 우수하였다, 복분자 추출물을 첨가한 조건보다 부산물을 첨가한 곡물배지에서 장수진흙버섯 의 균사생장이 우수하다는 것을 확인할 수 있었다.

상황버섯류는 분류학적으로 담자균아문(Basidiomycotina), 진정담자균강(Eubasidiomycetes), 주름버섯목(Aphyllophorales), 소나무비늘버섯과(Hymemcohaetaceae)의 진흙버섯속(Phellinus)에 속하는 백색부후균(white rotfungi)으로써 세계적으로 300여종이 보고되었다. 상황버섯류의 5균주(균주명: JMI-P1, JMI-P2, JMI-P3, JMI-P4, JMI-P5)를 수집하여 ITS 염기서열을 분석한 결과, 758~772bp 정도의 염기서열을 확인하였다. Blast 결과는 JMI-P1 및 JMI-P4 균주는 목질진흙버섯(Phellinus linteus)과 99% 일치하였으며, JMI-P3 균주는 찰진흙버섯(Phellinus robustus)과 94% 일치하였다. 또한 JMI-P2 및 JMI-P5 균주는 장수상황(Phellinus baumii)과 98~99% 일치하였다. 수집균주별로 균사의 생장속도는 JMI-P2, JMI-P1, JMI-P3, JMI-P5, JMI-P4 순으로 나타났으며, 가장 생장속도가 우수한 JMI-P2 균주의 최적 배양온도는 pH 5에서 32℃로 확인되었다. 탄소원에 따른 균사의 생장량은 glucose 첨가배지에서 균사생장이 가장 우수하였고, 질소원은 Malt Extract 첨가배지에서 균사생장이 가장 우수하게 나타났다.

Green mold of Phellinus baumii caused by Penicillium was observed in Daegu on August, 2000. The causal fungus was identified as Penicillium citrinum based on their cultural and morphological characteristics. Conidiophores one-stage branched, terminating in a whorl of 3~5 metulae. Metulae mostly 5.2~7.8㎛. Phialides were flask-shaped, 5.7~7.5×2.2~2.7㎛. Conidia were subglobose, 1.8~2.3㎛ in size. Colonies on Czapek agar were mostly attaining a diameter of 23 ㎜ within 8 days at 25 . The optimum temperature for growth of the fungus was about 20~30℃. On the basis of mycological characteristics and pathogenecity test on host mushrooms, the fungus was identified as Penicillium citrinum. This is the first report on the green mold of Phellinus baumii caused by Penicillium citrinum in Korea. The present study was carried out to investigate the preventive effect of Penicillium citrinum by backfill (sand, granite soil, and smash rock). The result showed that the use of granite was 3~10% infection rate and sand was 2~10% infection of P. citrinum. However, the smash rocks showed no infection of this fungus. The chemical properties of smash rocks was pH 8.4, showing alkalinity. The sand and granite soil were pH 6.1 and pH 7.5, respectively. These did not have heavy metals such as Mn, Fe, Pb and As.

Green mold of Phellinus baumii caused by Penicillium was observed in Daegu on August, 2000. The causal fungus was identified as Penicillium citrinum based on their cultural and morphological characteristics. Conidiophores one-stage branched, terminating in a whorl of 3~5 metulae. Metulae mostly 5.2~7.8㎛. Phialides were flask-shaped, 5.7~7.5×2.2~2.7㎛. Conidia were subglobose, 1.8~2.3㎛ in size. Colonies on Czapek agar were mostly attaining a diameter of 23㎜ within 8 days at 25℃. The optimum temperature for growth of the fungus was about 20~30℃. On the basis of mycological characteristics and pathogenecity test on host mushrooms, the fungus was identified as Penicillium citrinum. This is the first report on the green mold of Phellinus baumii caused by Penicillium citrinum in Korea. The present study was carried out to investigate the preventive effect of Penicillium citrinum by backfill (sand, granite soil, and smash rock). The result showed that the use of granite was 3~10% infection rate and sand was 2~10% infection of P. citrinum. However, the smash rocks showed no infection of this fungus. The chemical properties of smash rocks was pH 8.4, showing alkalinity. The sand and granite soil were pH 6.1 and pH 7.5, respectively. These did not have heavy metals such as Mn, Fe, Pb and As.

본 연구에서는 상황버섯 (P. baumii)의 자실체에 발생하는 Penicillium sp.균을 동정하기 위하여, 분리균의 배양적·형태적 특징을 조사하였다. 분리된 Penicillium sp.의 형태적 특성을 조사한 결과, 분생포자의 모양은 타원형이고 직경이 1.8∼2.3 ㎛ 크기로 분생포자를 많이 형성하였다. 분생포자경은 균사로부터 one-stage branch 모양을 형성하였고, matulae는 3∼5개로 길이가 5.2∼7.8 ㎛이며, phialide는 플라스크상이고 크기가 5.7∼7.5×2.2∼2.7 ㎛이였다. Czapek's agar 배지에서 생육시 25℃에서 8일간 균체가 23 ㎜ 생장하였다. PDA 배지 상에서 균총의 형태는 처음에는 조밀한 솜털모양의 백색을 띄었으며 차츰 기중균사가 형성되었고, 점차 회녹색으로 변하였다. 이상과 같은 형태 및 배양적 특징으로 이 균을 P. rubrum으로 동정하였다. 상황버섯 (P. baumii)에서 P. rubrum에 의한 병은 아직 국내에 보고된바 없어, P. rubrum에 의한 상황버섯 (P. baumii) 푸른곰팡이병을 최초로 보고한다.

국내에서 재배하여 생산되고 있는 상황버섯의 일종인 PMO-P4균주에 대한 ITS 영역의 염기서열 분석을 실시하였으며 목질 진흙버섯으로 잘 알려져 있는 P. linteus와 함께 RFLP분석을 통하여 상호 비교한 결과 PMO-P4균주는 P. baumii로 판명되었다. 이 결과를 토대로 이미 보고 되어 있는 Phellinus속 균주들과의 종간 ITS 영역의 상동성을 비교한 결과 48.6%-72.2%였으며 본 연구에서 비교한 종들 가운데서는 P. linteus와 상동성이 가장 높았으며 P. gilvus와 상동성이 가장 낮았다.

국내에서 재배되고 있는 약용버섯인 상황(P. baumii) 자실체의 열수 추출물로 부터 건강 기능성 식품 및 의약품개발의 기초자료를 제공하고자 항암실험 및 면역효과에 대한 실험을 수행하였다. 본 연구에서 사용한 PMO-P4의 경우 rDNA의 ITS부위의 염기서열 분석을 통한 계통분석결과 P. baumii로 판명 되었으며, PMO-P4 자실체로부터 열수 추출한 성분(HWE-P4)을 160mg/kg/day의 농도로하여 Sarcoma-180 암세포를 유발한 마우스에 경구투여한 결과 A군의 경우, 종양억제효과는 35.3%로 대조군보다 유의성 있게 감소하였으며(p<0.05), 생명연장 효과는 156%증가한 것으로 나타났다. 시료의 경구투여 방법에 있어서도 시료를 먼저 2주간 투여한 후 암세포를 접종한 A군의 경우가 시료 투여와 암세포 접종을 동시에 실시한 B군의 경우 보다 종양억제효과 및 생명연장효과가 높았음을 알 수 있었다. A군의 경우 대조군에 비하여 CD4/CD8의 비율이 71.4%증가 하였으며, CD25(IL-2receptor chain)분자의 발현을 5배정도 증가시키는 것으로 관찰되었다. 이러한 결과로 보아 P. baumii로 밝혀진 PMO-P4 자실체로부터 열수 추출한 성분의 항암효과는 암세포를 직접 공격하여 항암효과를 나타내기 보다는 T cell등의 면역세포를 활성화시킴으로써 암세포를 억제 혹은 사멸시키는 것으로 생각된다.

약용버섯(상황·영지) β-glucan 미세캡슐 제품을 10℃, 25℃, 40℃에서 5개월 동안 저장하며 한 달 간격으로 수분함량, 색도 및 일반세균 변화를 조사하고 식품 유통기한 설정 프로그램을 이용하여 유통기한을 예측하였다. 수분함량 변화 결과 상황버섯 β-glucan 미세캡슐은 저장기간 동안 25℃와 40℃에서는 변화가 없었으나 10℃에서는 3개월째에서 증가한 후 감소하였고, 영지버섯 β-glucan 미세캡슐은 저장기간 동안 25℃와 40℃에서 약간의 증가 및 감소가 있었으나 10℃에서는 저장 3개월째에서 초기값보다 감소한 후 증가하였다. 색도 변화는 상황버섯, 영지버섯 β-glucan 미세캡슐 모두 10℃, 25℃, 40℃에서 저장 5개월째까지 큰 차이를 나타내지 않았다. 일반세균은 상황버섯, 영지버섯 β-glucan 미세캡슐의 저장기간 및 저장온도에 따른 큰 변화 없이 초기값을 유지하였다. 이들 결과를 바탕으로 상황버섯 β-glucan 미세캡슐은 30.11개월이었고, 영지버섯 β-glucan 미세캡슐은 24.82개월의 유통기한을 최종적으로 산출하였다. 따라서 약용버섯(상황·영지) β-glucan 미세캡슐 제품의 유통기한을 각각 24개월로 설정하는 것이 바람직할 것으로 사료된다.

시판되고 있는 상황버섯과 영지버섯 차류 제품의 이화학적 특성과 β-glucan 함량, 항산화 활성 및 항산화 성분 함량을 조사하고 이들 간의 상관성을 분석하였다. pH는 4.43-7.05의 범위를 보였으며, 상황버섯 액상차2(PL2)와 영지버섯 액상차1(GL1)이 가장 낮은 값을 보였다(p<0.05). Hunter 색차계로 측정한 결과 L 값은 41.76-55.02, a 및 b 값은 -0.49-5.06, 17.41-28.32의 범위를 보였다. 가용성 고형분 함량은 0.40-0.73 °Brix의 범위를 보였으며, 증발잔류물은 62.04-258.84 mg/100 g의 범위로 PL2와 GL1이 가장 높은 값을 나타내었다(p<0.05). β-Glucan 함량은 15.51-62.32 mg%의 범위를 나타내었으며, GL1과 PL2가 각각 62.32 mg%, 42.35 mg%로 높은 함량을 나타내었다(p<0.05). DPPH 라디칼 소거 활성에서는 32.63-367.81 μM GAE, FRAP에서는 321.86-1,035.19 μM TE, ABTS 라디칼 소거활성에서는 703.50-1,091.83 μM TE의 범위를 나타내었으며, 총페놀 함량은 286.56-916.00 μM GAE, 총플라보노이드 함량은 85.33-635.33 μM CE의 범위를 보여 전반적으로 PL2와 GL1이 항산화능이 높은 것으로 나타났다(p<0.05). 총페놀 함량과 총플라보노이드 함량은 DPPH 라디칼 소거 활성, FRAP 및 ABTS 라디칼 소거 활성과 모두 높은 상관성(r=0.7298-0.9743)을 보인 반면, β-glucan 함량은 항산화 활성 모두와 비교적 낮은 상관성(r=0.3146-0.6663)을 보였다. 전반적으로 액상차가 침출차에 비해 β-glucan 함량 및 항산화능이 우수하였다.

상황버섯을 90℃에서 환류추출 시 시간과 추출용매의 조건(물 및 에탄올 농도, pH)에 따른 추출물을 제조하여 β-glucan 함량과 항산화활성 및 항산화성분의 함량을 조사 하였다. 상황버섯 추출물은 추출시간이 길어짐에 따라 수 율과 β-glucan 함량이 증가하여 24시간 추출 조건을 실험에 사용하였다. 추출용매에 따른 상황버섯 추출물의 수율은 60% 에탄올, pH 4의 조건에서 가장 높았다. β-glucan 함량 은 열수 추출물에서 높은 함량을 나타내었고, 산성과 중성 조건에서 높게 나타났다. 항산화활성은 60% 에탄올, pH 7 조건에서 추출한 것이 가장 높았다. 항산화성분의 함량 또한 항산화활성과 같은 경향을 보였으며, 수율, β-glucan 함량, 항산화활성 및 성분을 모두 고려하였을 때 60% 에탄 올, pH 7 추출 조건이 적합하였다.

여러 가지 한약재의 추출물의 항알러지 활성을 증진시키기 위하여 장수상황버섯의 고체발효 중 시너지 효과를 확인하여 보았다. 그 결과 마황이 좋은 활성을 나타내어 DNFB (dinitrochlorobenzene)에 의해 유발된 접촉성 피부염 알러지 질환 동물모델에서 피부상피조직의 비후정도를 약 50%정도의 수준으로 완화시키며, 이는 면역조직화학적인 방법으로 확인하였다. 이 결과로, 마황 추출액의 장수상황버섯 고체발효의 최적 조건을 확립한다면 향장소재